一种灵芝提取物的制备工艺的制作方法

本发明涉及天然产物加工领域，且特别涉及一种灵芝提取物的制备工艺。

背景技术：

1、灵芝，被誉为中医药学中的“仙草”，自古以来就在中医药领域占据重要地位。灵芝提取物则是通过先进科技手段从灵芝中高倍浓缩提取的精华成分，它在保持了灵芝全部药效的同时，更在纯度和浓度上实现了质的飞跃，成为了现代健康产业中备受瞩目的明星产品。其核心成分包括灵芝三萜类化合物和灵芝多糖，这两种成分在灵芝中占据重要地位，是发挥药效的关键所在。

2、文献报道，灵芝的苦味主要来自灵芝中的三萜酸，灵芝三萜类主要分布在灵芝子实体的外周部分，苦味重的灵芝其三萜类化合物含量一般很高。制备灵芝提取物，灵芝提取物的溶出和收率的提高，也会伴随着灵芝三萜酸含量的提高，导致灵芝提取物的苦涩口感加重。

3、传统提取灵芝有效成分的方法如：煎煮、回流、浸渍、渗漉等，存在诸多不足，包括：药材损失严重、提取过程耗时、工序繁琐、效率低下等。另外，灵芝的培育过程中需要田间覆膜，导致部分塑料颗粒进入灵芝植株中，从而给灵芝产品带来较高的塑化剂残留，成为了灵芝产品重大的安全性隐患。

4、因此，同时解决灵芝有效成分充分溶出、提高灵芝提取物收率和改善灵芝苦味口感三大难题是灵芝提取物的关键技术。

技术实现思路

1、本发明的第一目的是提供一种灵芝提取物的制备工艺，可使灵芝提取物制备过程节能、自动化控制及稳态过程生产。

2、本发明的第二目的是提供一种灵芝提取物的提取方法，可使灵芝有效成分充分溶出、提高灵芝提取物收率、改善灵芝苦味口感。

3、本发明的第三目的是优化层析柱洗脱设备，以此来提高设备实验的便捷性和分离纯化效率。

4、本发明的第一目的是通过以下技术方案得以实现的：

5、一种灵芝提取物的制备工艺，包括如下步骤：

6、a、灵芝预处理：采用ph为3的酸水对灵芝原料漂洗3次，去除残留的灰尘和塑料颗粒，粉碎处理后的灵芝，通过复合酶耦合热提取技术，得到灵芝粉的有效成分的提取液；

7、b、将所述提取液经过两层过滤膜进行过滤，得到透过液；

8、c、将所述透过液进行柱层析，同时采用氧化剂对物料进行处理，去除掉残留级别的塑化剂，得到洗脱液；

9、d、将所述洗脱液导入至具有反渗透膜的浓缩装置中，在浓缩过程中添加质量比为1:0.5-1.5的丙二醇和甘油带走多余的杂质，以提高灵芝活性成分三萜的含量，经加压浓缩处理，直至流出液密度达到1.00-1.10g/cm范围，去除部分溶剂后得到流出液浓缩浸膏；

10、e、将所述浓缩浸膏灭菌温度控制在120.0±10.0℃，灭菌时间控制在15-30min；f、将灭菌后的浓缩浸膏在热风的作用下进行喷雾干燥，入口和出口温度分别为170℃±10℃和90℃±10℃，收集干燥固体产物；

11、g、制粒：粉碎得到灵芝提取粉，过筛后合并混合。

12、本发明的第二目的是通过以下技术方案得以实现的：

13、所述步骤a的灵芝提取采用复合酶耦合热提取技术，具体操作为：将粉碎得到的灵芝粉加入浸提罐中，加水；升温至40-50℃，加入包含纤维素酶、半纤维素酶、壳聚糖酶、果胶酶等生物复合酶，酶解时间2-5h；生物酶的总用量是初始物料量的0.3-0.8％；升温搅拌浸提酶解后的物料，温度控制在80-100℃，浸提时间1-4h后得到一浸液；残渣重复浸提一次或多次，合并各次浸提液，得到灵芝提取液。

14、作为优选，采用复合酶对原料进行酶解，以在固定时间内对多种物质同时进行酶解，提高酶解效率，对灵芝子实体进行破壁。其中复合酶包括纤维素酶、半纤维素酶、木瓜蛋白酶、果胶酶、壳聚糖酶：纤维素酶可以切断细胞壁中的纤维素，壳聚糖酶可以酶解几丁质，半纤维素酶可以破坏细胞壁中的半纤维素；复合酶解可以充分破坏细胞壁，提高传质比表面积，且能够使细胞壁松散，便于目标成分扩散进入溶剂主体中来，克服了影响提取效率的主要矛盾。

15、进一步地，采用热提取进行多次浸提，在提取过程中保持一定程度的高温有助于灵芝有效成分的溶出。

16、该工艺选用的复合酶耦合热提取技术绿色无污染，不使用有机溶剂，安全性高，产品得率提高。

17、所述步骤b的过滤采用一级过滤膜与二级过滤膜联用的方法，具体操作为：将灵芝提取液过一级过滤膜进行过滤，得到截留液ⅰ和透过液，所述一级过滤膜为孔径大小为10-20nm的陶瓷膜；将得到的透过液过二级过滤膜进行过滤，得到截留液ⅱ，所述二级过滤膜为孔径大小为0.5-2nm的纳滤膜；合并截留液ⅰ和截留液ⅱ，得到滤过液。

18、作为优选，一级过滤膜为陶瓷膜，可有效将水、无机盐及小分子物质与大分子物质分离开；而二级过滤膜为纳滤膜，其的脱盐及去除重金属离子的效果极佳；陶瓷膜与纳滤膜共同具有分离率高、效果稳定、化学稳定性好、耐酸碱、耐高温、再生性能好、操作维护简便、使用寿命长等优势，用于灵芝提取液的去重金属离子和脱盐效果极佳，仅使用一级过滤膜的提取、纯化效果不佳，仅使用二级过滤膜虽提取、纯化效果没有降低，但工作时间更长，过滤膜的耗损严重，因此采用一级过滤膜与二级过滤膜联用的方法为最优选。

19、所述步骤c用色谱法中的柱层析方法对上样溶液进行纯化分离，具体操作为：向大孔吸附树脂层析柱中加入洗脱剂，对上样溶液进行等度洗脱；洗脱剂选自94-96wt％乙醇-水溶液，洗脱剂与上样物的比例为400-1000ml:1g，洗脱剂流速为0.5-0.8ml/min。

20、作为优选，所述大孔吸附树脂层析柱中的填料为d101填料，其实质为苯乙烯型非极性共聚体；该类型的填料吸附量高、颗粒均匀、机械强度好、不易破碎且残留物少，且对有机物选择性好；可对上样物起到脱盐的作用。

21、进一步地，向大孔吸附树脂层析柱中加入洗脱剂，并对上样溶液进行等度洗脱；其中，综合考虑成本及分离效果，洗脱剂优选为95wt％的乙醇-水溶液。

22、进一步地，洗脱剂与上样物的比例为800ml:1g，洗脱剂的流速为0.65ml/min，此比例和流速下活性成分的分离效果和提取率均最佳。

23、所述步骤c的柱层析方法采用一种层析柱吸附洗脱装置，装置包括：固定夹持层、样品收集层和自动上样装置；使用时，固定夹持层和样品收集层设置有多通道，可同时使用多个层析柱进行作业，且根据层析柱型号，可调整固定夹持层高度和固定夹具的位置，将样品或洗脱液倒入马氏瓶中，调整自动升降台高度，控制层析柱中液面位置，通过装夹机构对设备进行装夹，配合卡装机构对设备进行辅助卡装，通过调节装置对设备进行液体存储的过程中，启动驱动装置对调节装置进行闭合调节，通过密封装置对设备进行密封，以此来提高设备实验的便捷性和分离纯化效率。

24、所述步骤c中采用氧化剂（双氧水或漆酶等）在一定条件下对物料进行处理，去除掉残留级别的塑化剂。

25、所述步骤d中为三级反渗透膜浓缩，具体包括：浓缩装置的一、二、三级膜循环的进出口压差控制在10-25bar，保安过滤器滤袋过滤精度5-15μm，得到所述浓缩液；在所述浓缩液中加入其可溶性固形物含量1.0-3.0％的碳酸氢钠，充分溶解，搅拌时间30-45min，调节物料的ph至5.3-6.7所述浓缩液浓度控制10-15brix。

26、作为优选，浓缩装置的一、二、三级膜循环的进出口压差控制为20bar，保安过滤器滤袋过滤精度为10μm，得到所述浓缩液；在所述浓缩液中加入其可溶性固形物含量2.0％的碳酸氢钠，充分溶解，搅拌30min，调节物料的ph至6.0所述浓缩液浓度为10brix。

27、所述步骤d中运用活性成分保护及应用技术，在浓缩过程中添加质量比为1:0.5-1.5的丙二醇和甘油带走多余的杂质，以提高灵芝活性成分三萜的含量，去除灵芝提取物的苦涩味。

28、作为优选，在浓缩过程中添加质量比为1:1的丙二醇和甘油带走多余的杂质，提高灵芝活性成分三萜的含量，去除灵芝提取物的苦涩味。

29、所述步骤e将所述浓缩浸膏灭菌温度控制在120.0±10.0℃，灭菌时间控制在15-30min。

30、作为优选，浓缩浸膏120.0℃灭菌20min。

31、所述步骤f喷雾干燥，具体操作为：将灭菌后的浓缩浸膏在热风的作用下进行喷雾干燥，入口和出口温度分别为170℃±10℃和90℃±10℃，收集干燥后的固体产物。

32、作为优选，灭菌后的浓缩浸膏在热风的作用下喷雾干燥的入口和出口温度分别为170℃和90℃，收集干燥后的固体产物。

33、所述步骤g制粒包括粉碎、过筛、混合等操作，具体操作为：将收集到的干燥固体放入到高速粉碎机内进行粉碎，粉碎时长为30s，得到灵芝提取粉；将得到的灵芝提取粉放入标准分样筛内，筛目为40目，利用电动振筛机进行过筛；未通过筛孔的较大颗粒需要进行再次粉碎过筛；将过筛后的灵芝提取粉合并转至混合机内混合。

34、本发明的第三目的是通过以下技术方案得以实现的：

35、一种灵芝提取物的制备工艺，所述步骤c的柱层析方法采用一种层析柱吸附洗脱装置，其可以通过装夹机构对设备进行装夹，配合卡装机构对设备进行辅助卡装，通过调节装置对设备进行液体存储的过程中，启动驱动装置对调节装置进行闭合调节，通过密封装置对设备进行密封，以此来提高设备实验的便捷性。

36、综上所述，本发明具有以下有益效果：

37、1、本发明通过增加原料预处理，利用复合酶解耦合热提取技术，可使细胞壁疏松、破裂，从而减小有效成分从胞内向提取介质扩散的传质阻力,提高有效成分的浸出率；活性成分保护及应用技术，在浓缩过程中添加甘油和丙二醇带走多余的杂质，提高灵芝活性成分三萜的含量，去除灵芝提取物的苦涩味；

38、2、本发明优化一种层析柱吸附洗脱装置，其可以通过装夹机构对设备进行装夹，配合卡装机构对设备进行辅助卡装，通过调节装置对设备进行液体存储的过程中，启动驱动装置对调节装置进行闭合调节，通过密封装置对设备进行密封，以此来提高设备实验的便捷性和分离纯化效率；

39、3、本发明提供一种灵芝提取物的制备工艺，可使灵芝提取物制备过程节能，生产过程自动化控制，产品稳定性提升。