多步骤脱细胞组织基质及其制造方法与流程

本发明涉及一种多步骤脱细胞组织基质及其制造方法，尤其涉及一种弹性蛋白含量较高且因为脱细胞效率较高而可以提升生产性的多步骤脱细胞组织基质及其制造方法。

背景技术：

1、细胞外基质(extracellular matrix；ecm)，是一种存在于细胞外部且包含与细胞密切相关的如胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白以及糖胺聚糖(gag)等成分的三维网状结构体，可以通过填充到细胞与组织之间的空间上而起到对细胞进行保护以及支撑的作用，在细胞通过如整合素等细胞受体与细胞外基质内的成分相互作用时，将作为信号转导途径使用，而且还具有其他多种功能。

2、具体来讲，细胞外基质可以通过对生长因子、酶以及其他干预细胞活性的分子进行捕获而对细胞的功能以及作用进行调节，而包含于细胞外基质中的胶原蛋白以及纤连蛋白可以提供细胞维持形态以及移动时所需要的物理强度。

3、此外，弹性蛋白以及层粘连蛋白用于提供弹性，而且可以起到通过根据人体组织以及器官将特定成分分布到细胞外基质内部而使得相应的组织以及器官执行特定功能的调节作用。

4、尤其是，对于包含于细胞外基质中的弹性蛋白来讲，不仅可以为细胞外基质提供弹性，而且在受损组织的治疗过程中的弹性蛋白生成率较低的情况下无法修复到与原始组织相同的结构并因此导致疤痕的生成，因此对于伤口的治疗或组织的再生来讲属于非常重要的物质，因此被广泛适用于医疗器械或再生医疗领域。

5、通常来讲，在制作用于开发移植用或研究用人造组织、器官或新药的器官模型时，使用没有生物毒性且不会诱发免疫反应的生物相容性材料。过去使用如聚乳酸(pl，polylactic acid)或聚乙醇酸(pga，poly glycolic acid)等生物相容性聚合物，但是最近源自于动物组织的生物材料备受人们的关注，因此主要使用以对所述源自于动物组织的生物材料进行脱细胞的细胞外基质(decellularized extracellular matrix；decm)为基础的生物材料。

6、如上所述的源自于动物组织的生物材料，包含如细胞、脂肪、病毒以及其他异物等会诱发免疫或炎症反应的物质，因此在制造源自于动物组织的生物材料时，最为重要的部分在于去除如上所述的异物的工程。为了对所述物质进行去除，通常来讲利用酸、碱或酶进行处理，但是目前为止并没有开发出可以有效地对细胞、粗脂肪、病毒以及其他异物全部进行去除的方法，而在使用现有方法的情况下，具有生物材料的收率较低、处理时间较长以及弹性蛋白含量较低的问题。

技术实现思路

1、技术问题

2、本发明的目的在于提供一种弹性蛋白的含量较高且因为脱细胞效率较高而可以提升生产性的多步骤脱细胞组织基质及其制造方法。

3、技术解决方案

4、为了达成如上所述之目的，本发明之一实施形态涉及一种源自于哺乳类的脱细胞组织基质，其特征在于，通过：准备除人类之外的哺乳类的组织的准备步骤；对所述组织进行预处理的预处理步骤；利用醇对经过预处理的组织中所包含的病毒进行灭活的第一灭活步骤；使用碱水溶液从经过病毒灭活的组织中对细胞进行去除的第一次脱细胞步骤；通过对经过第一次脱细胞的组织进行酶处理而对细胞进行去除的第二次脱细胞步骤；以及，利用酸(acid)对经过脱细胞的组织中所包含的病毒进行灭活的第二灭活步骤；进行制造，经过所述第二灭活步骤的组织的脱氧核糖核酸(dna)含量为50ng/mg以下，经过所述预处理步骤至第二灭活步骤的组织的弹性蛋白含量的减少率(l)为20％以下。

5、所述第一次脱细胞步骤，可以包括：第一脱细胞步骤，使用碱水溶液与醇的混合物；以及，第二脱细胞步骤，使用碱水溶液。

6、所述组织，可以是源自于哺乳类的血管、韧带以及肌腱中的某一个以上。

7、所述第一脱细胞步骤，可以使用正丙醇(n-proh)以及氢氧化钠(naoh)的混合物执行，而所述第二脱细胞步骤，可以使用超过0.05m不足0.2m的氢氧化钠水溶液执行。

8、所述第二次脱细胞步骤，可以使用脱氧核糖核酸酶(dnase)执行。本发明之另一实施例涉及一种脱细胞组织基质的制造方法，具体来讲，通过：准备除人类之外的哺乳类的组织的准备步骤；对所述组织进行预处理的预处理步骤；利用醇对经过预处理的组织中所包含的病毒进行灭活的第一灭活步骤；使用碱水溶液从经过病毒灭活的组织中对细胞进行去除的第一次脱细胞步骤；通过对经过第一次脱细胞的组织进行酶处理而对细胞进行去除的第二次脱细胞步骤；以及，利用酸(acid)对经过脱细胞的组织中所包含的病毒进行灭活的第二灭活步骤；进行制造。

9、此时，经过所述第二灭活步骤的组织的脱氧核糖核酸(dna)含量可以是50ng/mg以下，而经过所述预处理步骤至第二灭活步骤的组织的弹性蛋白含量的减少率(l)可以为20％以下。

10、在所述第一次脱细胞步骤与第二次脱细胞步骤之间，还可以执行使用酸性溶液的中和步骤以及使用磷酸缓冲生理盐水(pbs)的洗涤步骤。

11、在所述第二次脱细胞步骤与第二灭活步骤之间，还可以执行脱色步骤和/或脱脂步骤。

12、所述第二灭活步骤，可以使用有机酸与醇的混合物执行。

13、在所述第二灭活步骤之后，可以执行洗涤、包装以及灭菌步骤。

14、发明效果

15、本发明的多步骤脱细胞组织基质在脱细胞过程中的弹性蛋白的损失率较低，因此可以促进借助于弹性蛋白的受损组织的再上皮化、肉芽组织以及新生血管的形成，从而快速地帮助组织再生。

16、本发明的多步骤脱细胞组织基质的制造方法的脱细胞效率优秀且工程时间较短，因此可以显著提升多步骤脱细胞组织基质的生产性。

技术特征：

1.一种源自于哺乳类的多步骤脱细胞组织基质，

2.根据权利要求1所述的源自于哺乳类的多步骤脱细胞组织基质，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的源自于哺乳类的多步骤脱细胞组织基质，其特征在于：

4.一种包括多步骤脱细胞过程的源自于哺乳类的组织基质的制造方法，

5.根据权利要求4所述的包括多步骤脱细胞过程的源自于哺乳类的组织基质的制造方法，其特征在于：

6.根据权利要求4所述的包括多步骤脱细胞过程的源自于哺乳类的组织基质的制造方法，其特征在于：

7.根据权利要求4所述的包括多步骤脱细胞过程的源自于哺乳类的组织基质的制造方法，其特征在于：

8.根据权利要求4所述的包括多步骤脱细胞过程的源自于哺乳类的组织基质的制造方法，其特征在于：

技术总结根据本发明的源自于哺乳类的脱细胞组织基质，通过：准备除人类之外的哺乳类的组织的准备步骤；对所述组织进行预处理的预处理步骤；利用醇对经过预处理的组织中所包含的病毒进行灭活的第一灭活步骤；使用碱水溶液从经过病毒灭活的组织中对细胞进行去除的第一次脱细胞步骤；通过对经过第一次脱细胞的组织进行酶处理而对细胞进行去除的第二次脱细胞步骤；以及，利用酸(acid)对经过脱细胞的组织中所包含的病毒进行灭活的第二灭活步骤；进行制造，经过所述第二灭活步骤的组织的脱氧核糖核酸(DNA)含量为50ng/mg以下，经过所述预处理步骤至第二灭活步骤的组织的弹性蛋白含量的减少率(L)为20％以下，因为脱氧核糖核酸(DNA)含量极低而可以最大限度地减少免疫或异物反应，而且因为弹性蛋白含量较高而可以有效地治愈伤口以及抑制伤疤。技术研发人员：金炫廷,金昌焕,朴恩惠,金荣换,申载恒,崔麟学受保护的技术使用者：提演奥医疗科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/12/2