高神经靶向的AAV病毒衣壳蛋白突变体及其应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及多种高神经靶向的aav病毒衣壳蛋白突变体及其应用。

背景技术：

1、腺相关病毒(aav)是一种广泛应用于基因治疗的递送载体，其原理是通过基因工程方法将aav基因组itr之间序列替换成目的基因序列，经细胞感染传递到靶细胞，达到基因治疗目的。基于重组aav具有安全性、高效性、稳定性、持续性、特异性、低整合性等特点，使得aav成为基因治疗领域主要递送手段之一。目前已发现12种人类aav 血清型（aav1至aav12），不同aav血清型具有不同的衣壳蛋白空间结构、序列和组织特异性，因而其识别与结合的细胞表面受体有很大差别，这就导致不同血清型感染的组织类型、细胞类型和感染效率也各不相同。其中，aav9血清型因其强的神经嗜性和理想的安全性越来越多的被运用到基因治疗中。但aav9基因治疗仍然需更多疾病分子靶点，对于提高基因表达的靶向性，动力学和有效性的调控、释放以及感染效率等方面仍需要进一步研究。衣壳改造生产是创建新型aav衣壳的瓶颈，因为大多数突变的衣壳蛋白不能组装或包装它们的基因组。

2、基于aav载体的不足之处，研究人员正在采用一系列方法来改造aav，通过改造病毒载体的基因结构、扩大其载体容量、提高病毒产率以及对不同组织细胞的转染效率，以使aav载体更加符合不同疾病的需求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供多种高神经靶向的aav病毒衣壳蛋白突变体及其应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一个方面，提供：

4、高神经靶向的aav病毒衣壳蛋白突变体，通过使用sdgtmekpfr、qegtmekpfr、angtvdrpfk、gpqilkgydi替换野生型aav9病毒衣壳蛋白的586-588位氨基酸得到。

5、本发明的第二个方面，提供：

6、编码本发明第一个方面所述aav病毒衣壳蛋白突变体的基因。

7、本发明的第三个方面，提供：

8、一种表达体系，其表达本发明第一个方面所述的aav病毒衣壳蛋白突变体，或含有本发明第二个方面所述的基因。

9、表达体系可以仅表达本发明第一个方面所述的aav病毒衣壳蛋白突变体，使用时配合相应的辅助表达体系即可。

10、在一些表达体系的实例中，所述表达体系为重组aav载体，所述重组aav载体通过对aav载体插入或替换改造得到。

11、在一些表达体系的实例中，所述aav选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10及其变体中的任意一种。

12、在一些表达体系的实例中，所述表达体系还包括编码功能性基因产物的核酸分子。

13、本发明的第四个方面，提供：

14、一种重组aav病毒，其衣壳蛋白如本发明第一个方面所示。

15、在一些重组aav病毒的实例中，所述aav选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10及其变体中的任意一种。

16、重组aav病毒的其他结构蛋白，可以由其他辅助表达体系表达。

17、本发明的第五个方面，提供：

18、一种组合物，包括本发明第三个方面所述表达体系及可接受的载体，或本发明第四个方面所述的重组aav病毒。

19、本发明的第六个方面，提供：

20、本发明第五个方面所述的组合物在制备靶向中枢神经的基因治疗制剂或转基因制剂或构建靶向中枢神经的转基因动物中的应用。

21、在一些应用的实例中，所述中枢神经为脑神经。

22、本发明的有益效果是：

23、本发明的一些实例的衣壳蛋白突变体，可以有效提高aav病毒神经靶向性，从根本上解决aav9穿透血脑屏障后表达的效率问题。

24、本发明的一些实例的衣壳蛋白突变体，构建得到的重组aav病毒载体具有良好的产量。

技术特征：

1.高神经靶向的aav病毒衣壳蛋白突变体，其特征在于，通过使用sdgtmekpfr、qegtmekpfr、angtvdrpfk、gpqilkgydi替换野生型aav9病毒衣壳蛋白的586-588位氨基酸得到。

2.编码权利要求1所述aav病毒衣壳蛋白突变体的基因。

3.一种表达体系，其特征在于，其表达权利要求1所述的aav病毒衣壳蛋白突变体，或含有权利要求2所述的基因。

4.根据权利要求3所述的表达体系，其特征在于，所述表达体系为重组aav载体，所述重组aav载体通过对aav载体插入或替换改造得到。

5.根据权利要求4所述的表达体系，其特征在于，所述aav选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10及其变体中的任意一种。

6.根据权利要求3所述的表达体系，其特征在于，所述表达体系还包括编码功能性基因产物的核酸分子。

7.一种重组aav病毒，其特征在于，其衣壳蛋白如权利要求1所示。

8.根据权利要求7所述的重组aav病毒，其特征在于，所述aav选自aav1、aav2、aav3、aav4、aav5、aav6、aav7、aav8、aav9或aav10及其变体中的任意一种。

9.一种组合物，包括权利要求3～6任一项所述表达体系及可接受的载体，或权利要求7或8所述的重组aav病毒。

10.权利要求9所述的组合物在的应用，所述应用选自：

技术总结本发明属于生物技术领域，公开了高神经靶向的AAV病毒衣壳蛋白突变体及其应用。该衣壳蛋白突变体通过使用SDGTMEKPFR、QEGTMEKPFR、ANGTVDRPFK、GPQILKGYDI替换野生型AAV9病毒衣壳蛋白的586‑588位氨基酸得到。本发明的一些实例的衣壳蛋白突变体，可以有效提高AAV病毒神经靶向性，从根本上解决AAV9穿透血脑屏障后表达的效率问题。技术研发人员：张倩,袁丽,任盛,霍喾赓,孟珊,刘蕾,伍辰光,郑琴,高翠,刘华清受保护的技术使用者：广州译码基因科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/12/2