活化的肝星状细胞（HSC）的消耗及其用途的制作方法

本文提供了能够与活化的肝星状细胞(hsc)结合的分子、包含该分子的药物组合物及其用途。

背景技术：

1、活化的肝星状细胞(hsc)是在肝损伤时介导纤维发生的关键类型的细胞。非常需要靶向活化的hsc的治疗方法，以减缓或预防纤维化形成并且改善患有肝纤维化或肝硬化的患者的生活质量。本公开解决了本领域的这一需要和其他需要。

技术实现思路

1、在一个方面，本文提供了一种结合分子，其包含一个或多个结合结构域和功能结构域，该一个或多个结合结构域结合在活化的肝星状细胞(hsc)上表达的一个或多个抗原，该功能结构域能够增强针对活化的hsc的抗体效应子功能。在一些实施方案中，该抗体效应子功能是抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)。在一些实施方案中，该功能结构域是包含增强adcc的一个或多个突变的fc区。在其他实施方案中，该功能结构域是活化免疫细胞的结构域。在一些实施方案中，该免疫细胞是nk细胞。

2、在一些实施方案中，该功能结构域是包含增强adcc的一个或多个突变的fc区。在一些实施方案中，该fc区的一个或多个突变在根据eu编号的位置233、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、256、258、260、262、263、264、265、266、267、268、268、269、270、272、274、276、280、282、283、285、286、288、290、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、303、307、311、312、313、315、317、318、320、322、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、337、338、339、340、342、344、345、347、355、356、358、359、360、361、362、373、375、376、378、380、382、383、384、386、388、389、390、391、392、396、398、400、401、413、414、415、416、418、419、421、422、424、428、430、433、434、435、436、437、438、439、440、442、444和/或447处。在一些实施方案中，该fc区包含s239d/i332e、s239d/a330l/i332e、l235v/f243l/r292p/y300l/p396l或f243l/r292p/y300l突变。在一些实施方案中，该fc区包含s239d/i332e突变。在一些实施方案中，该fc区包含s239d/a330l/i332e突变。在一些实施方案中，该fc区包含l235v/f243l/r292p/y300l/p396l突变。在一些实施方案中，该fc区包含f243l/r292p/y300l突变。

3、在其他实施方案中，该功能结构域是活化免疫细胞的结构域，并且其中该功能结构域促进免疫细胞活化信号传导或阻遏免疫细胞抑制性信号传导。

4、在一些实施方案中，该功能结构域结合和/或调节免疫细胞上的受体。在一些实施方案中，该功能结构域调节活化免疫细胞的受体。在其他实施方案中，该功能结构域调节抑制免疫细胞的受体。在一些实施方案中，该受体选自由以下组成的组：nkp46、nkp30、nkp44、nkg2c、cd94、kir2ds1、kir2ds4、kir2ds2、kir2dl4、kir3ds1、cd160、nkg2d、nkp80、dnam1、2b4、ntb-a、cracc、4-1bb、ox40、crtam、cd16、lfa1、nkg2a、kir2dl1、kir2dl2、kir2dl3、kir3dl1、kir3dl2、lilrb1、kir2dl5、klrg1、cd161、siglec7、siglec9、lair1、tigit、cd96、pd-1、pvrig、cd122、cd132、cd218a、cd218b、il12rb1、il12rb2、il21r、tgfbr1、tgfbr2、tgfbr3、acvr2a、acvr2b、alk4和a2a。

5、在一些实施方案中，该功能结构域结合nkg2d。在一些实施方案中，该功能结构域衍生自nkg2d配体。在一些实施方案中，该功能结构域是mica、micb、ulbp1或ulbp2的胞外结构域或其片段或变体，并且其中任选地该功能结构域包含seq id no:90-93中任一者的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，该功能结构域包含seq id no:90的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，该功能结构域包含seq id no:91的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，该功能结构域包含seq id no:92的氨基酸序列或其片段。在一些实施方案中，该功能结构域包含seq id no:93的氨基酸序列或其片段。

6、在一些实施方案中，该功能结构域结合nkp46。在一些实施方案中，该功能结构域包含与nkp46结合的抗体(包括抗原结合片段)。在一些实施方案中，该抗体包含如seq idno:87所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:88所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:61的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:62的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:63的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:64的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:65的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:66的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体包含含有seq id no:87的氨基酸序列的vh和含有seq id no:88的氨基酸序列的vl。

7、在一些实施方案中，该功能结构域结合tgfb。在一些实施方案中，该功能结构域包含tgfb受体ii胞外结构域(trii)或其片段或变体，并且其中任选地该功能结构域包含seqid no:94的氨基酸序列或其片段。

8、在一些实施方案中，该功能结构域结合tigit。在一些实施方案中，该抗体包含如seq id no:265所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:266所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:267的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:268的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:269的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:270的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:271的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:272的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体包含含有seq id no:265的氨基酸序列的vh和含有seqid no:266的氨基酸序列的vl。

9、在一些实施方案中，该功能结构域结合pvrig。在一些实施方案中，该抗体包含如seq id no:273所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:274所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:275的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:276的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:277的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:278的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:279的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:280的氨基酸序列。在一些实施方案中，该抗体包含含有seq id no:273的氨基酸序列的vh和含有seqid no:274的氨基酸序列的vl。

10、在一些实施方案中，除了上文所述的活化免疫细胞的功能结构域之外，结合分子还包含fc区，该fc区包含增强adcc的一个或多个突变。在一些实施方案中，该fc区包含在根据eu编号的位置233、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、246、247、248、250、253、254、255、256、258、260、262、263、264、265、266、267、268、268、269、270、272、274、276、280、282、283、285、286、288、290、292、293、294、295、296、297、298、299、300、301、303、307、311、312、313、315、317、318、320、322、325、326、327、328、329、330、331、332、333、334、335、337、338、339、340、342、344、345、347、355、356、358、359、360、361、362、373、375、376、378、380、382、383、384、386、388、389、390、391、392、396、398、400、401、413、414、415、416、418、419、421、422、424、428、430、433、434、435、436、437、438、439、440、442、444和/或447处的一个或多个突变。在一些实施方案中，该fc区包含s239d/i332e、s239d/a330l/i332e、l235v/f243l/r292p/y300l/p396l或f243l/r292p/y300l突变。在一些实施方案中，该fc区包含s239d/i332e突变。在一些实施方案中，该fc区包含s239d/a330l/i332e突变。在一些实施方案中，该fc区包含l235v/f243l/r292p/y300l/p396l突变。在一些实施方案中，该fc区包含f243l/r292p/y300l突变。

11、在一些实施方案中，在hsc上表达的抗原选自由以下组成的组：5ht1b、5ht1f、5ht2a、5-ht2b、5-ht7、a2a、a2b、a1b1整联蛋白、a2bi整联蛋白、a5b1整联蛋白、a6b4整联蛋白、a8b1整联蛋白、avb1整联蛋白、avb3整联蛋白、acvr2a、acvr2b、adipor1、adipor2、adra1a、adra1b、antxr1、at1、at2、bambi、bmpr2、c5ar、cb1、cb2、ccr1、ccr2、ccr5、ccr7、cd105、cd112、cd14、cd146、cd155、cd248、cd36、cd38、cd40、cd44、cd49e、cd62e、cd73、cd95、c-met、cntfr、cxcr3、cxcr4、ddr1、ddr2、egfr、eta、etb、fap、fgfr2、fn、gp130、gpc3、gpr91、icam-1、igf-1r、igf-2r、il-10r2、il-11ra、il-17ra、il-20r1、il-20r2、il-22r1、il-6r、kcne4、itga8、lrp、mica、micb、ncam、ngfr、npr-b、npr3、ob-ra、ob-rb、oprd1、p2x4、p2x7、p2y6、p75ntr、pafr、par1、par2、par4、pdgfra、pdgfrb、pd-l1、pd-l2、ptc、pth-1r、rage、sirpa、cd47、syp、tgfbr1、tgfbr2、tgfbr3、tlr2、tlr3、tlr4、tlr7、tlr9、tnfr1、trkb、trkc、ulbp1、ulpb2、upar、vacm-1、vegfr-1和vegfr-2。

12、在一些实施方案中，该抗原是pdgfrb。在一些实施方案中，该结合结构域包含如seq idno:67所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:68所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:1的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:2的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:3的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:4的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:5的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:6的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含含有seq id no:67的氨基酸序列的vh和含有seq id no:68的氨基酸序列的vl。

13、在一些实施方案中，该抗原是sirpa。在一些实施方案中，该结合结构域包含(i)如seq id no:69所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:70所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；(ii)如seq id no:71所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:72所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或(iii)如seq id no:73所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq idno:74所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，(i)hcdr1包含seq id no:7的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:8的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:9的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:10的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:11的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:12的氨基酸序列；(ii)hcdr1包含seq id no:13的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:14的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:15的氨基酸序列，lcdr1包含seq idno:16的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:17的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:18的氨基酸序列；或(iii)hcdr1包含seq id no:19的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:20的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:21的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:22的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:23的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:24的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含：(i)含有seq id no:69的氨基酸序列的vh和含有seqid no:70的氨基酸序列的vl；(ii)含有seq id no:71的氨基酸序列的vh和含有seq id no:72的氨基酸序列的vl；或(iii)含有seq id no:73的氨基酸序列的vh和含有seq id no:74的氨基酸序列的vl。

14、在一些实施方案中，该抗原是fapα。在一些实施方案中，该结合结构域包含(i)如seq id no:75所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:76所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或(ii)如seq id no:77所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:78所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，(i)hcdr1包含seq id no:25的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:26的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:27的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:28的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:29的氨基酸序列，并且lcdr3包含seqid no:30的氨基酸序列；或(ii)hcdr1包含seq id no:31的氨基酸序列，hcdr2包含seq idno:32的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:33的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:34的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:35的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:36的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含：(i)含有seq id no:75的氨基酸序列的vh和含有seq id no:76的氨基酸序列的vl；或(ii)含有seq id no:77的氨基酸序列的vh和含有seq id no:78的氨基酸序列的vl。

15、在一些实施方案中，该抗原是pd-l1。在一些实施方案中，该结合结构域包含如seqid no:79所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:80所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:37的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:38的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:39的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:40的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:41的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:42的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含含有seq id no:79的氨基酸序列的vh和含有seq id no:80的氨基酸序列的vl。

16、在一些实施方案中，该抗原是upar。在一些实施方案中，该结合结构域包含如seqid no:81所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:82所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:43的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:44的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:45的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:46的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:47的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:48的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含含有seq id no:81的氨基酸序列的vh和含有seq id no:82的氨基酸序列的vl。

17、在一些实施方案中，该抗原是igf-1r。在一些实施方案中，该结合结构域包含(i)如seq id no:83所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:84所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或(ii)如seq id no:85所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:86所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，(i)hcdr1包含seq id no:49的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:50的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:51的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:52的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:53的氨基酸序列，并且lcdr3包含seqid no:54的氨基酸序列；或(ii)hcdr1包含seq id no:55的氨基酸序列，hcdr2包含seq idno:56的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:57的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:58的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:59的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:60的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含：(i)含有seq id no:83的氨基酸序列的vh和含有seq id no:84的氨基酸序列的vl；或(ii)含有seq id no:85的氨基酸序列的vh和含有seq id no:86的氨基酸序列的vl。

18、在一些实施方案中，该抗原是antxr1。在一些实施方案中，该结合结构域包含(i)如seq id no:225所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:226所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或(ii)如seq id no:233所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:234所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，(i)hcdr1包含seq id no:227的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:228的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:229的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:230的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:231的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:232的氨基酸序列；或(ii)hcdr1包含seq id no:235的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:236的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:237的氨基酸序列，lcdr1包含seq idno:238的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:239的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:240的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含：(i)含有seq id no:225的氨基酸序列的vh和含有seq id no:226的氨基酸序列的vl；或(ii)含有seq id no:233的氨基酸序列的vh和含有seq id no:234的氨基酸序列的vl。

19、在一些实施方案中，该抗原是cd248。在一些实施方案中，该结合结构域包含(i)如seq id no:241所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:242所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或(ii)如seq id no:249所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:250所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，(i)hcdr1包含seq id no:243的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:244的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:245的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:246的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:247的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:248的氨基酸序列；或(ii)hcdr1包含seq id no:251的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:252的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:253的氨基酸序列，lcdr1包含seq idno:254的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:255的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:256的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含：(i)含有seq id no:241的氨基酸序列的vh和含有seq id no:242的氨基酸序列的vl；或(ii)含有seq id no:249的氨基酸序列的vh和含有seq id no:250的氨基酸序列的vl。

20、在一些实施方案中，该抗原是gpc3。在一些实施方案中，该结合结构域包含如seqid no:257所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3、以及如seq id no:258所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。在一些实施方案中，hcdr1包含seq id no:259的氨基酸序列，hcdr2包含seq id no:260的氨基酸序列，hcdr3包含seq id no:261的氨基酸序列，lcdr1包含seq id no:262的氨基酸序列，lcdr2包含seq id no:263的氨基酸序列，并且lcdr3包含seq id no:264的氨基酸序列。在一些实施方案中，该结合结构域包含含有seq id no:257的氨基酸序列的vh和含有seq id no:258的氨基酸序列的vl。

21、在一些实施方案中，该抗原是nkg2d配体，诸如mica、micb、ulbp1或ulbp2。在一些实施方案中，该结合结构域包含nkg2d胞外结构域或其片段或变体，并且其中任选地该结合结构域包含seq id no:89的氨基酸序列或其片段。

22、在一些实施方案中，该结合分子是igg抗体或包含该igg抗体的融合蛋白。在一些实施方案中，该抗体是人源化抗体。

23、在另一个方面，本文提供了一种编码本文所提供的结合分子或其片段的核酸分子。

24、在另一个方面，本文提供了一种包含本文所提供的核酸分子的载体。

25、在另一个方面，本文提供了一种用本文所提供的载体转化的宿主细胞。

26、在另一个方面，本文提供了一种组合物，其包含治疗有效量的本文所提供的结合分子、核酸分子或载体以及药学上可接受的赋形剂。

27、在又另一个方面，本文提供了一种治疗受试者的疾病或病症的方法，其包括向该受试者施用本文所提供的组合物。在一些实施方案中，该疾病或病症与活化的hsc相关。在一些实施方案中，该疾病或病症是肝纤维化。

28、在又另一个方面，本文提供了一种消耗受试者中的活化的hsc的方法，其包括向该受试者施用本文所提供的组合物。在一些实施方案中，该受试者患有与活化的hsc相关的疾病或病症。在一些实施方案中，该疾病或病症是肝纤维化。