基于养殖高温诱导小黄鱼雄性化的方法

本发明属于海水养殖鱼类性别控制育种，具体涉及一种基于养殖高温诱导小黄鱼雄性化的方法。

背景技术：

1、小黄鱼由于其肉质鲜美，广受消费者的喜爱。已有的研究表明，小黄鱼已经实现全人工养殖，并且在人工养殖条件下，性别比例约为1:1。通过养殖体质量参数的测量表明，人工养殖的上市规格小黄鱼雌性与雄性体长和全长无显著性差异，然而雌性的体重显著高于雄性，这是由于雌性卵巢发育引起的腹部膨胀，从而体重显著增加。传统的人工养殖仍然以雌雄混养为主，这种养殖方式往往伴随着雌性生殖耗能过大，饲料转化利用率低等特点。

2、水产动物性别控制是水产遗传育种研究中重要的领域之一，很多经济鱼类呈现生长速度或者经济性状的性别二态性，如鲤鱼（ cyprinus carpio l.）、泥鳅（ misgurnusanguillicaudatus）及半滑舌鳎（ cynoglossus semilaevis）等，雌性个体生长速度明显快于雄性，而黄颡鱼（ pelteobagrusfulvidraco）、乌鳢（ channa maculata）及尼罗罗非鱼（ oreochromis niloticus）等的雄性生长速度快于雌性，因此培育生长速度更快的单性养殖品种具有重要的经济价值；此外，一些经济性状的雌雄差异，也需要单性化育种与养殖，例如尼罗罗非鱼和大西洋鲑（ salmo salar）等鱼类在达到上市规格前，常出现提前性成熟进入繁殖期，进而影响生长，养殖单性群体可有效避免繁殖活动；鲟鱼的卵子具有重要的经济价值，单雌性养殖更能控制成本，提高效益。

3、传统的性别控制育种方法，主要针对具有明确性别决定基因或性别决定系统的水产动物，例如尼罗罗非鱼是一个xx/xy性别决定系统的鱼类，通过雌性激素雌二醇17β-estradiol处理xy鱼，可以获得xy伪雌鱼，再通过xy伪雌鱼与xy正常雄鱼交配，便可获得yy超雄鱼，yy超雄鱼与xx雌鱼经过交配后，便可以生产xy的全雄鱼。这种遗传育种方法具有效果稳定，可持续的优点，但是也存在育种周期长，需要扎实的研究基础暨找到明确的性别决定基因或者性别决定系统。在未找到明确性别决定基因的水产动物中，仍需开发简便快捷的单性化遗传育种方法。

4、经济水产鱼类的性别，既受到遗传因素的影响，也受到环境因子的调控。其中，温度对鱼类胚胎期或者幼鱼期的影响较为显著，多数鱼类都是养殖高温会导致群体雄性化，甚至会导致100%雄性。小黄鱼目前还未找到明确的性别决定基因，因此，开发温度诱导雄性化的技术方法，是目前单性育种中重要的技术基础。这一技术难题的攻破，将有利于实现小黄鱼单性化育种种质的推广，为广大科研技术人员提供有效的参考，降低养殖成本，提高经济效益。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种基于高温诱导小黄鱼雄性化的方法，该方法通过控制幼鱼期的养殖温度，可以诱导小黄鱼雄性化率达到97.9%，从而实现小黄鱼单性化育种，减少生殖耗能，提高养殖经济效益，具体通过以下技术方案加以实现：

2、基于养殖高温诱导小黄鱼雄性化的方法包括以下步骤：

3、步骤1：控温养殖装置的准备：具体为准备功率为500w至1000w的水族用加热棒，用于300l～1000l的海水养殖桶加热控温；或者准备可以控温的冷热水机，用于2000l左右的养殖桶控温；或者通过锅炉将养殖用海水进行加热控温处理，用于40～80t海水养殖水泥池的控温。

4、水族用加热棒，可视情况选择正规厂商生产的具有安全过热或者漏水断电保护设备，使用功率视养殖桶水体大小选择相应的型号；冷热水机为海水专用冷热水机，配合循环水养殖系统使用，功率选择视养殖水桶水体大小选择相应型号；锅炉加热系统，视生产厂家实际情况而定。

5、步骤2：小黄鱼产卵期，在自然海区或养殖水温最高温度达到15.5℃以上且持续7天以上时，挑选性腺发育良好，体表无外伤，健康且正常进食的小黄鱼雌性亲鱼和雄性亲鱼，置于控温养殖装置中暂养，控制水温16±1℃，其中，雌性亲鱼和雄性亲鱼尾数比为30:6-8；雌性亲鱼和雄性亲鱼选择一龄或二龄，一龄亲鱼体重为50-90g，二龄亲鱼体重为130-190g；

6、小黄鱼的产卵季节，特指越冬后的春季，自然海区或养殖水温经过冬季低温后呈升高趋势，最高温度达到15.5℃以上且持续7天以上时，此时，光周期为12小时/天；

7、亲鱼在进行检测前8小时需保持空腹饥饿状态，保持空腹状态，有利于用观察结合触摸法鉴别雌雄，也有利于获得准确的gsi值；

8、营养状况较好的亲鱼，雌性腹部较为圆润有鼓起，触摸时手感较柔软，用食指与大拇指夹住腹部，轻轻顺头部向尾部挤压会发现有少量组织液伴尿液从泄殖孔流出；雄性亲鱼腹部外观无明显鼓起，触摸时手感较硬，同样用食指与大拇指夹住腹部，轻轻顺头部向尾部挤压会发现有乳白色的精液伴少量尿液从泄殖孔流出，若能顺利挤出精液则说明，雄性已进入繁殖期，已达到性成熟，雄性的产精期较雌性产卵期早且持续时间长，在养殖水温14～17℃之间时，精子质量均可保持，但在养殖温度超过18℃且持续7天以上时，精巢会迅速退化，精子质量也会严重退化，雄性性成熟度以可否挤出精液为准，简易且效率高。

9、步骤3：分别对雌性亲鱼与雄性亲鱼进行催产素的注射，在注射完成后，将控温养殖装置中的水温升高至18±1℃，保持36～42小时，亲鱼完成自然受精产卵，其中，催产素为注射用促黄体素释放激素a2，注射剂量为雌性10μg/kg，雄性剂量减半为5μg/kg。

10、步骤4：用鱼网收集控温养殖装置中的受精卵，清洗干净，置于18±1℃的另一控温养殖装置内，正常孵化至幼苗阶段，鱼网为细腻光滑的速干网布，收集的受精卵属于浮性卵，可暂时停止暴气，等待受精卵浮于水面上层时，用鱼网轻轻捞取。

11、步骤5：待幼苗开口正常饲养，鱼苗开口一般为受精后6～7天，正常饲喂的饵料为轮虫配合小球藻，期间逐渐将水温升至24±1℃，逐渐升温的过程为每天升高0.5℃，养至受精后19天，该过程升温的过程需缓慢进行，如果再受精后19天之前直接升温到31℃，会造成幼苗全部死亡。

12、步骤6：自受精后19天开始，对控温养殖装置进行逐步升温处理，逐步升温为每3小时升高1℃，在24小时内，将温度升到31℃，正常饲养。

13、步骤7：控温31±1℃，饲养至受精后90天，停止控温，期间可视鱼苗生长情况进行分桶，完成小黄鱼的雄性化诱导；分桶标准为根据幼苗密度判断，不超过1尾/l水体，分桶的备用桶内，先将温度控制到31℃，不再重复进行升温的操作。

14、本发明通过对受精后19天的幼鱼进行逐步升温和温度的控制，在31℃的养殖温度情况下，小黄鱼的群体雄性化率可以高达97.9%，通过此方法，可以在生产上完成小黄鱼的单雄性育种，并且具有成本低，安全性高，重复性好，可控性高的优点，为小黄鱼性别控制育种提供了技术支撑。