一种花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用的制作方法

本发明涉及生物医药，具体涉及一种花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用。

背景技术：

1、肝纤维化是由多种慢性肝损伤引起的疾病，如病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝、自身免疫性肝炎等。肝组织内细胞外基质成分过度增生与异常沉积，使纤维结缔组织大量增生形成瘢痕，纤维瘢痕会破坏肝脏结构导致肝细胞坏死和肝脏正常功能失调，加重肝脏损伤。我国约有3亿慢性肝病患者，绝大多数患者都有不同程度的肝纤维化，这些患者中约10％最终会发展为肝硬化。

2、肝星状细胞的活化是肝纤维化发生的关键因素。研究表明肝细胞损伤后会分泌多种细胞因子，这些细胞因子通过tgf-β1/smad信号途径、p53途径和铁死亡等途径动态调节肝纤维化病变过程。其中肝星状细胞受细胞因子激活后转化为成纤维细胞,最终使肝内细胞外基质累积过度。纤维细胞、骨髓来源的细胞和肝实质细胞等也可通过不同刺激因子转化为成纤维细胞引发肝纤维化。

3、目前西医尚无疗效确切的抗纤维化药物，但临床治疗发现一些中药成分如黄酮、酚酸、生物碱和多糖具有显著的抗纤维化作用。近几年抗肝纤维化的单味中药中以芍药、丹参、黄芪、鳖甲使用频率最高，复方药中以清热祛湿、活血化瘀、疏肝健脾、滋补肝肾等为主，中药复方胶囊以扶正化瘀胶囊、鳖甲软肝胶囊、鸡骨草胶囊等为主。但是研究表明，大剂量的黄芩治疗肝纤维化，会加重肝纤维化程度。此外，雷公藤、何首乌等部分中药均被报道具有肝损伤作用。因此如何将植物中的活性成分更好的传递到肝细胞内，并影响肝细胞的行为，以及阐明植物活性成分调节肝细胞的分子机制，有待进一步的深入研究。

4、植物细胞外囊泡是一种由植物细胞分泌的，以脂质双分子层为基本骨架、包裹各种蛋白和核酸等活性物质的膜性小泡，对植物的生长发育、组织修复和自体防御等过程起重要作用。

5、目前发现植物来源的囊泡具有治疗酒精性肝损伤的潜能。健康小鼠口服生姜来源的囊泡后，发现囊泡大量积累在肝脏和肠系膜淋巴结中，并抑制肝细胞中活性氧的产生。对于酒精性肝损伤小鼠，囊泡处理可以显著减少肝脏重量和脂滴数量，降低甘油三酯水平，明显优于未给药模型组，表明生姜囊泡具有预防和治疗酒精性肝损伤的潜力。

6、花椒是指芸香科各种花椒的果实，因其辛辣的风味和药用特性而在中国厨房中被广泛使用。新鲜花椒的精油含量非常高，高达11％，被描述为具有新鲜、辛辣、花香、清凉和绿色的香气。现代药理学研究表明，花椒具有镇痛抗炎、保肝、抗氧化、驱蚊杀虫、抗肿瘤、降血糖、抗阿兹海默症等作用。目前尚不清楚花椒对肝纤维化的影响作用及机制。

技术实现思路

1、为此，本发明提供一种花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用，以填补现未有花椒针对肝纤维化研究的空白。

2、本发明首次发现了花椒外泌体及相关生物材料可用于预防和/或治疗肝纤维化，通过抑制肝脏星状细胞的增殖、迁移以及纤维化指标，从而达到预防和/或治疗肝纤维化的效果，可作为预防和/或治疗肝纤维化的药物。本发明发现对于酒精诱导的小鼠化学性损伤肝纤维化模型，花椒外泌体干预可显著改善肝组织病理学变化，抑制胶原沉积，减少肝组织中脂滴数量，降低血清ast和alt的活性，效果显著优于未给药模型组。本发明提供了一种包含花椒外泌体或相关生物材料的药物，该药物与传统的治疗药物相比，具有易于分离，易于检测，来源丰富，安全性高，稳定性好，也可作为药物递送系统加载靶向药物等优点，从而提高肝纤维化疾病治疗的效率。

3、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

4、根据本发明一方面提供的一种花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用。

5、进一步的，所述肝性疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝。

6、所述肝纤维化包括酒精性肝病和非酒精性肝病。

7、在一种实施方式中，所述肝纤维化治疗药物至少具有以下功用之一：

8、(1)、抑制肝星状细胞的活化，增值与迁移；

9、(2)、改善肝组织病理学变化；

10、(3)、降低肝纤维化标记基因的表达水平。

11、本发明的肝纤维化标记基因包括α-sma和col1。

12、进一步的，所述肝性疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化。

13、进一步的，所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。

14、进一步的，所述花椒外泌体的制备方法包括：新鲜花椒pbs中研磨成匀浆，经过多次离心，上清液经过滤后进行再次离心，pbs重悬沉淀，获得花椒外泌体。

15、进一步的，所述多次离心的方法为1000g离心10min、4000g离心20min、10000g离心30min；再次离心为100000g离心60min。

16、进一步的，所述花椒包含幼嫩茎叶、未成熟的青花椒和成熟的红花椒。

17、所述花椒外泌体在透射电镜下为双膜结构，多呈圆饼状，且所述花椒外泌体的粒径为50-200nm。

18、根据本发明另一方面提供的一种治疗肝性疾病的药物，所述药物包含花椒外泌体或囊泡以及药学上可接受的载体。

19、进一步的，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、口服溶液、注射剂。

20、上述各种剂型可以根据药物制剂领域的常规工艺制备而成。

21、在上文所述的用途中，对于各种活性成分的施用时间、施用次数和施用频率等等，需要根据受试者的实际情况而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠的治疗方案应用于人体上，所有活性成分对人的有效剂量可以通过其对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员而言也是容易实现的。

22、本发明提供了花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝纤维化的药物中的应用，花椒外泌体从细胞水平和组织水平均可以抑制肝纤维化进展程度，从而抑制肝纤维化的发展。

23、本发明具有如下优点：

24、本发明首次发现了花椒外泌体通过抑制肝星状细胞的增值与迁移能力，从而达到逆转肝纤维化的效果，可作为预防和/或治疗结肝纤维化的药物。

25、本发明发现对于酒精诱导的小鼠肝纤维化模型，花椒外泌体干预可显著降低小鼠丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶的表达水平，改善肝组织病理学变化，抑制胶原沉积，减少肝组织中脂滴数量。

26、本发明提供了一种包含花椒外泌体或相关生物材料的药物，该药物与传统的治疗药物相比，具有良好的生物安全性和治疗效果，可以通过口服吸收，也可作为药物递送系统加载靶向药物等优点，从而提高肝纤维化治疗的效率。

技术特征：

1.一种花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肝性疾病包括肝硬化、肝炎、肝纤维化和脂肪肝。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肝性疾病包括化学性损伤肝纤维化、病毒性损伤肝纤维化、脂肪性肝炎、酒精性肝硬化和脂肪性肝硬化。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述化学性损伤肝纤维化包括四氯化碳诱导的肝纤维化。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述花椒外泌体的制备方法包括：新鲜花椒pbs中研磨成匀浆，经过多次离心，上清液经过滤后进行再次离心，pbs重悬沉淀，获得花椒外泌体。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述多次离心的方法为1000g离心10min、4000g离心20min、10000g离心30min；再次离心为100000g离心60min。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述花椒包含幼嫩茎叶、未成熟的青花椒和成熟的红花椒。

8.一种治疗肝性疾病的药物，其特征在于，所述药物包含花椒外泌体或囊泡以及药学上可接受的载体。

9.权根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、口服溶液、注射剂。

技术总结本发明公开了一种花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用，具体涉及生物医药技术领域。花椒外泌体在制备预防和/或治疗肝性疾病的药物中的应用，原理是通过抑制肝脏星状细胞的增殖、迁移以及纤维化指标。对于酒精诱导的小鼠化学性损伤肝纤维化模型，花椒外泌体干预可显著改善肝组织病理学变化，抑制胶原沉积，减少肝组织中脂滴数量，降低血清AST和ALT的活性，效果显著优于未给药模型组。本发明提供了一种包含花椒外泌体或相关生物材料的药物，该药物与传统的治疗药物相比，具有易于分离，易于检测，来源丰富，安全性高，稳定性好，也可作为药物递送系统加载靶向药物等优点，从而提高肝纤维化疾病治疗的效率。技术研发人员：龚前园,蒋涛,郭元彪受保护的技术使用者：成都市第三人民医院技术研发日：技术公布日：2024/6/11