LNnT与益生菌的组合及其在制备用于减少肠道中支链脂肪酸的组合物中的应用的制作方法

本发明涉及益生元与益生菌，具体是关于lnnt与益生菌的组合及其在制备用于减少肠道中支链脂肪酸的组合物中的应用。

背景技术：

1、母乳低聚糖(human milk oligosaccharides，hmos)是一类存在于母乳中的复杂混合低聚糖，是母乳中的重要成分之一。hmos可刺激肠道中的有益菌生长并抑制有害菌生长，在维持肠道微生态平衡、预防相关疾病、促进认知发育等方面发挥重要作用。2'-岩藻糖基乳糖(2'-fucosyllactose，2’fl)是母乳中含量最高的hmo，已经被批准作为儿童产品的营养强化剂；乳糖-n-新四糖(lacto-n-neotetraose，lnnt)是母乳中含量最高的中性糖链核心hmo之一。lnnt是由两个d-半乳糖、一个n-乙酰-d葡萄糖胺和一个d-葡萄糖构成的四糖。目前，市售的lnnt经由微生物发酵法制备而成，经质谱和核磁共振确定结构和人乳中发现的寡糖具有相同结构。

2、肠道中代谢产物中有少量的支链脂肪酸(bcfa)如异丁酸和异戊酸，它们由肠道菌群代谢支链氨基酸如缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸等产生，是未消化的蛋白与多肽到达结肠后被细菌发酵的产物，主要来自于膳食或粘膜细胞的脱落。因此与乙酸、丙酸和丁酸不同，异丁酸和异戊酸是蛋白质的代谢产物。异丁酸和异戊酸的降低可看做从蛋白发酵转向纤维发酵，被认为是积极的效应。这些支链脂肪酸被认为是结肠蛋白质发酵的标记物质，该过程同时也产生其他代谢物，如氨气、酚、对甲酚、或生物胺类等，这些物质能对小肠环境中的细胞造成破坏(diet drives quick changes in the metabolic activity andcomposition of human gut microbiota in a validated in vitro gutmodel.research in microbiology，167(2),114-125.)。粪便中高水平的异戊酸与人的抑郁和皮质醇水平有关(isovaleric acid in stool correlates with humandepression.nutritional neuroscience,19(7),279-283.)，最近也有关于bcfa对葡萄糖和脂类代谢的研究(branched short-chain fatty acids modulate glucose and lipidmetabolism in primary adipocytes.adipocyte,5(4),359-368.)。

3、与未接受母乳喂养的相比，全母乳喂养的婴儿粪便中测得异丁酸和异戊酸含量较低(fecal short-chain fatty acid variations by breastfeeding status in infantsat 4months:differences in relative versus absolute concentrations.frontiersin nutrition,4,11.)。粪便中较高的支链脂肪酸，如戊酸、异丁酸和异戊酸，是来自氨基酸代谢的，它们的存在表明婴配粉喂养组的蛋白质吸收较低，或者有过量的蛋白质摄入(可能因为婴配粉中蛋白含量比母乳更高)。这些代谢产物可能也导致了婴配粉喂养的婴儿粪便中，负责分解蛋白的细菌，如拟杆菌属和梭菌属的含量较高。婴配粉喂养的婴儿粪便中蛋白分解的代谢产物水平较高，可能也因为婴配粉不含有hmo因此碳水化合物的存在较低，所以这些婴儿的能量获取更多依赖于蛋白质代谢。

4、chow等人的研究也表明，当母乳喂养和配方粉喂养的婴幼儿粪便培养体系中，可发酵的碳水化合物不存在时，就会主要生成蛋白发酵的代谢产物；而当加入各种可以发酵的碳水化合物后，这些蛋白代谢物含量又下降了。配方粉喂养组粪便中较高的短链脂肪酸可能对婴幼儿代谢产生影响。一些研究报道了，超重的成年人和儿童比瘦的同龄人粪便短链脂肪酸增多，且与其他代谢风险因子有关联。thompson-chagoyan等人(faecalmicrobiota and short-chain fatty acid levels in faeces from infants with cow’s milk protein allergy.international archives of allergy and immunology，156(3),325-332.)对92个2-12个月的婴儿进行了研究，其中一半是不过敏的，一半有牛奶蛋白过敏症状。牛奶蛋白过敏婴儿的粪便支链脂肪酸的浓度和比例比健康婴儿更高。

5、对成人来说，如果胃酸不足，蛋白质消化不充分，肠道容易产生腐败的短链脂肪酸。腐败的短链脂肪酸由厌氧细菌发酵未消化支链氨基酸形成，包含戊酸、异戊酸、异丁酸。腐败的短链脂肪酸异常升高表明蛋白消化不良，提示潜在的胃酸缺乏、胰腺功能不全、吸收不良以及小肠细菌过度增生(sibo)。此外癌症研究中，结直肠癌的代谢物分析表明，支链氨基酸和苯丙氨酸等在疾病早期阶段显著增加。异戊酸这种支链脂肪酸，随疾病的进展逐渐增多。

6、目前在婴幼儿配方粉、辅食及营养补充剂等领域，需要有可改善肠道微环境健康如减少异丁酸和异戊酸等支链脂肪酸的解决方案。在3岁以上儿童、青少年及成人领域，也需要缓解肠道不适及提升自身抵御致病菌如etec感染能力的解决方案。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供母乳低聚糖lnnt与益生菌的组合及其在制备组合物中的应用。

2、一方面，本发明提供lnnt与益生菌的组合在制备用于减少肠道中支链脂肪酸的组合物中的应用。优选地，所述组合物为食品组合物或药物组合物。

3、根据本发明的具体实施方案，其中，所述支链脂肪酸为异戊酸。

4、根据本发明的具体实施方案，其中，所述益生菌选自：动物双歧杆菌乳亚种bb-12、婴儿双歧杆菌ylgb-1496、动物双歧杆菌乳亚种hn019和乳双岐杆菌bl-99中的一种或两种以上的组合。所述婴儿双歧杆菌ylgb-1496是保藏编号为cgmcc no.21109的婴儿双歧杆菌；所述乳双岐杆菌bl-99是保藏编号为cgmcc no.15650的乳双歧杆菌。优选地，所述益生菌为乳双岐杆菌bl-99。

5、根据本发明的具体实施方案，其中，所述lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：106-2×1012cfu；

6、优选地，所述lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：108-2×1010cfu；

7、优选地，所述lnnt与益生菌的含量之比为42.8-428.6mg：108-2×1010cfu。

8、根据本发明的具体实施方案，其中，所述组合物包括食品。

9、优选地，所述食品包括营养补充剂、配方食品、辅食中的一种或多种；

10、其中，所述lnnt的含量为：

11、粉状食品中21.4-857.2mg/100g粉；优选为42.8-428.6mg/100g粉；

12、液态状食品中0.03-1.2g/l；优选为0.06-0.6g/l。

13、优选地，所述食品包括特殊食品、儿童奶粉或成人奶粉，所述特殊食品可以选自婴幼儿配方食品、特殊医学用途婴儿配方食品、特殊医学用途配方食品或保健食品。

14、本发明中所称的“儿童”为：已满36个月但不满15岁的个体(依据中华人民共和国卫生部发布的《食品营养强化剂使用标准》(gb14880-2012)问答)。

15、优选地，所述食品包括婴儿配方奶粉；在所述婴儿配方奶粉中，lnnt的含量为21.4-857.2mg/100g粉；

16、优选地，在所述婴儿配方奶粉中，lnnt的含量为42.8-428.6mg/100g粉；

17、优选地，所述益生菌在婴儿配方奶粉中的含量为106-2×108cfu/g粉。

18、优选地，所述食品包括婴儿配方奶液；

19、在所述婴儿配方奶液中，lnnt的含量为0.03-1.2g/l；

20、优选地，在所述婴儿配方奶液中，lnnt的含量为0.06-0.6g/l。

21、另一方面，本发明提供lnnt与益生菌的组合在制备用于改善肠道微环境健康的组合物中的应用；

22、所述改善肠道微环境健康包括：调控肠道系统中支链短链脂肪酸的产生；

23、优选地，所述支链短链脂肪酸包括异戊酸。

24、根据本发明的具体实施方案，其中，所述组合物包括食品；

25、优选地，所述食品包括营养补充剂、配方食品、辅食中的一种或多种；

26、优选地，所述lnnt的含量为：

27、粉状食品中21.4-857.2mg/100g粉；优选为42.8-428.6mg/100g粉；

28、液态状食品中0.03-1.2g/l；优选为0.06-0.6g/l；

29、优选地，所述食品中lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：106-2×1012cfu；更优选为21.4-857.2mg：108-2×1010cfu。

30、另一方面，本发明提供lnnt与益生菌组成的组合物，其中，所述组合物用于减少肠道中支链短链脂肪酸的含量。

31、根据本发明的具体实施方案，其中，所述益生菌选自：动物双歧杆菌乳亚种bb-12、婴儿双歧杆菌ylgb-1496、动物双歧杆菌乳亚种hn019和乳双岐杆菌bl-99中的一种或两种以上的组合；

32、优选地，所述益生菌为乳双岐杆菌bl-99；

33、优选地，lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：106-2×1012cfu；优选地，lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：108-2×1010cfu；进一步优选地，所述组合物中lnnt与益生菌的含量之比为42.8-428.6mg：108-2×1010cfu。

34、另一方面，本发明提供一种食品，其包括lnnt和益生菌，所述食品用于减少肠道中支链短链脂肪酸的含量。

35、根据本发明的具体实施方案，其中，所述益生菌选自：动物双歧杆菌乳亚种bb-12、婴儿双歧杆菌ylgb-1496、动物双歧杆菌乳亚种hn019和乳双岐杆菌bl-99中的一种或两种以上的组合；

36、优选地，所述益生菌为乳双岐杆菌bl-99；

37、优选地，所述食品中lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：106-2×1012cfu；优选地，所述食品中lnnt与益生菌的含量之比为21.4-857.2mg：108-2×1010cfu；进一步优选地，所述lnnt与益生菌的含量之比为42.8-428.6mg：108-2×1010cfu。

38、本发明的有益效果：

39、本发明提供的lnnt与益生菌的组合在制备用于减少肠道中支链脂肪酸的组合物中的应用，提供了改善肠道微环境健康如减少支链脂肪酸(异戊酸)的解决方案。同时，本发明提供的lnnt与益生菌的组合在制备用于减少肠道中支链脂肪酸的食品中的应用，在3岁以上儿童、青少年及成人领域，也提供了缓解肠道不适的解决方案。