腺相关病毒衣壳的制作方法

本公开文本涉及一种aav衣壳，所述aav衣壳具有改善的肝组织嗜性和更强的外源基因表达，和/或改善的逃避中和抗体的能力。本公开文本进一步涉及一种编码所述aav衣壳的核酸；一种含有所述aav衣壳的aav颗粒。本公开文本进一步涉及一种药物配制品，所述药物配制品含有(1)aav衣壳、核酸或aav颗粒，和(2)药学上可接受的载体。本公开文本进一步涉及aav衣壳、核酸、aav颗粒或药物配制品在制造用于将靶基因递送至哺乳动物细胞的药物中的用途。本公开文本进一步涉及一种用于治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用所述药物配制品。本公开文本进一步涉及一种含有所述核酸的细胞。

背景技术：

1、本部分中的陈述仅提供与本公开文本相关的背景信息，并且不一定构成现有技术。

2、腺相关病毒(aav)是直径为约20nm的无包膜病毒，其感染哺乳动物如人和灵长类动物，并且被分类为细小病毒科、依赖病毒属。迄今为止，已经鉴定了大量的aav血清型，并且已知aav的不同血清型感染不同类型的动物或细胞。

3、aav基因组是大约4.7kb的单链dna(ssdna)，并且在两端包含约145个碱基的反向末端重复(itr)序列。itr序列自身形成沃森-克里克碱基对以形成包含aav基因组的复制和包装所必需的顺式元件的t型发夹结构。aav基因组在侧接itr序列的区域中包含两个开放阅读框(orf)。一个orf(也称为“rep基因”)编码四种rep蛋白(rep78、rep68、rep52和rep40)。另一个orf(也称为“cap基因”)编码三种衣壳蛋白(vp1、vp2和vp3)和组装激活蛋白(aap)。rep蛋白具有解旋酶活性，并且不仅是诱导衣壳形成所必需的，而且是将aav基因组整合到宿主细胞染色体中所必需的。在另一方面，vp1、vp2和vp3的总共60个分子以1:1:10的比率组装形成二十面体aav外壳。vp1、vp2和vp3的不同之处主要在于n末端区域。例如，磷脂酶a2(磷脂酶a2：pla2)结构域存在于vp1的n末端。由于pla2结构域仅存在于vp1中，因此vp1的n末端区域也称为vp1独特区域(vp1u)。已知pla2结构域在酸性条件下暴露于aav颗粒的外部，但它通常存在于aav颗粒的内部。因此，认为pla2结构域是aav从内体逃逸并在aav进入细胞后转移到细胞核中所必需的。aap是形成aav衣壳所必需的蛋白质。

4、aav的复制在本质上取决于辅助病毒(如腺病毒和疱疹病毒)的存在。在存在辅助病毒的情况下，aav基因组在宿主细胞中复制，并且形成含有aav基因组的完整aav颗粒。然后，aav颗粒从宿主细胞中释放出来。在不存在辅助病毒的情况下，aav基因组是游离维持的，或者被整合到宿主染色体中并变成潜伏的。

5、aav可以感染多种细胞，包括人细胞，并且aav甚至感染其中分化终止的非分裂细胞，包括血细胞、肌肉细胞和神经细胞。此外，由于aav对人不是致病性的，因此其具有低的副作用风险。aav的病毒颗粒是物理化学稳定的。由于这些原因，aav最近引起了人们对其作为在用于治疗先天性遗传疾病以及治疗癌症或感染的基因疗法中使用的基因转移载体的价值的关注。

6、为了实现基因疗法中使用的aav的更低和更安全剂量，持续需要提供具有改善的组织嗜性和更强的外源基因表达和/或改善的逃避中和抗体的能力的aav。

技术实现思路

1、本公开文本提供了一种aav衣壳，所述aav衣壳实现了改善的肝组织嗜性和更强的外源基因表达和/或改善的逃避中和抗体的能力，从而允许在基因疗法中使用更低和更安全剂量的aav。

2、本公开文本的一方面涉及一种aav衣壳，所述aav衣壳与如seq id no:1所示的氨基酸序列相比包含一个或多个氨基酸修饰，其中所述一个或多个氨基酸修饰位于选自下组的一个或多个位置处：332、589、665、98、701、14、459、452、496、597、552、583及其任意组合，其中所述位置是参考seq id no:1定义的。

3、本公开文本的另一方面涉及一种aav衣壳，所述aav衣壳与seq id no:13所示的氨基酸序列相比包含一个或多个氨基酸修饰，其中所述一个或多个氨基酸修饰位于选自下组的一个或多个位置处：451、585、98、457、497、201、205、265、410、417、作为整体的450-458、537、540、699、735、14、553、554、579、592、493、595、248、550、581及其任意组合，其中所述位置是参考seq id no:13定义的。

4、本公开文本的另一方面涉及一种核酸，所述核酸包含与编码根据本公开文本的aav衣壳的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、100％同一性的aav衣壳编码序列。

5、本公开文本的另一方面涉及一种aav颗粒，所述aav颗粒含有根据本公开文本的aav衣壳。

6、本公开文本的另一方面涉及一种药物配制品，所述药物配制品含有(1)根据本公开文本的aav衣壳、根据本公开文本的核酸或根据本公开文本的aav颗粒，和(2)药学上可接受的载体。

7、本公开文本的另一方面涉及根据本公开文本的aav衣壳、根据本公开文本的核酸、根据本公开文本的aav颗粒或根据本公开文本的药物配制品在制造用于将靶基因递送至哺乳动物细胞的药物中的用途。

8、本公开文本的另一方面涉及一种用于治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据本公开文本的药物配制品。

9、本公开文本的另一方面涉及一种细胞，所述细胞含有根据本公开文本的核酸。

技术特征：

1.一种aav衣壳，所述aav衣壳与seq id no:1所示的氨基酸序列相比包含一个或多个氨基酸修饰，

2.根据权利要求1所述的aav衣壳，其中所述一个或多个氨基酸修饰选自下组：t332n、q589n、n665q、a98r、a98e、i701v、n14t、n459g、s452插入、g496s、t597v、r552k、a583s及其任意组合。

3.根据权利要求1所述的aav衣壳，所述aav衣壳包含如seq id no:2-12中任一所示的氨基酸序列。

4.一种aav衣壳，所述aav衣壳与seq id no:13所示的氨基酸序列相比包含一个或多个氨基酸修饰，

5.根据权利要求4所述的aav衣壳，其中所述一个或多个氨基酸修饰选自下组：t451n、q585n、a98r、n457q、n497q、n201g、s205a、g265插入、q410t、q410e、d417e、gttsgttnq(450-458)→tsggagt、m537s、n540v、i699v、n735p、n14t、a553v、e554d、t579v、t592i、a493l、t493插入、t595d、a248v、a550k、a581s及其任意组合。

6.根据权利要求4所述的aav衣壳，所述aav衣壳包含如seq id no:14-47中任一所示的氨基酸序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的aav衣壳，所述aav衣壳共价连接、结合或衣壳化选自下组的化合物：dna分子、rna分子、多肽、碳水化合物、脂质和小有机分子。

8.一种核酸，所述核酸包含aav衣壳编码序列，所述aav衣壳编码序列与编码根据权利要求1-7中任一项所述的aav衣壳的核苷酸序列具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％、100％同一性。

9.一种aav颗粒，所述aav颗粒含有根据权利要求1-7中任一项所述的aav衣壳。

10.一种药物配制品，所述药物配制品含有(1)根据权利要求1-7中任一项所述的aav衣壳、根据权利要求8所述的核酸或根据权利要求9所述的aav颗粒，和(2)药学上可接受的载体。

11.根据权利要求1-7中任一项所述的aav衣壳、根据权利要求8所述的核酸、根据权利要求9所述的aav颗粒或根据权利要求10所述的药物配制品在制造用于将靶基因递送至哺乳动物细胞的药物中的用途。

12.一种用于治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求10所述的药物配制品。

13.一种细胞，所述细胞含有根据权利要求8所述的核酸。

技术总结本发明提供了具有改善的肝组织嗜性和更强的外源基因表达、和/或改善的逃避中和抗体的能力的AAV衣壳、相关核酸、AAV颗粒、含有所述核酸的细胞及其药物配制品。还提供了所述AAV衣壳、所述核酸、所述AAV颗粒或所述药物配制品在制造用于将靶基因递送至哺乳动物细胞的药物中的用途，以及用于治疗疾病的方法。技术研发人员：许凯,韩稼葆,李伟,田幸雪,赵小平受保护的技术使用者：上海天泽云泰生物医药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/18