一种用于山茶花外泌体切向流提取制备方法及应用与流程

本发明涉及生物工程，特别是一种用于山茶花外泌体切向流提取制备方法及应用。

背景技术：

1、随着人们生活水平的提高，对健康和美容的需求日益增长，皮肤抗衰老成为了护肤领域的重要课题。目前，市场上的抗衰老产品多依赖化学合成成分，长期使用可能会对皮肤造成伤害。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种用于山茶花外泌体切向流提取制备方法及应用。

2、本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，包括以下步骤：

3、s1：挑选无病害的山茶花样本并选择壳聚糖；

4、s2：对山茶花样本进行清洗，并切割成若干块，对山茶花样本进行破碎和过滤，得到提取液；

5、s3：通过浓度为1％的醋酸溶液溶解壳聚糖，并将其浓度调整到2％，将壳聚糖溶液倒入平板上，通过旋转涂布器形成薄膜并进行干燥和热处理；

6、s4：将步骤s2中的提取液与干燥后的壳聚糖膜在室温下混合，通过电荷作用吸附外泌体；

7、s5：将壳聚糖膜放入切向流过滤系统中，当流出液中外泌体浓度稳定时，开始收集切向流过滤后的流出液，并对其进行提纯；

8、s6：对外泌体nta进行鉴定，将纯化后的外泌体溶液预冻24小时，再通过冷冻干燥机进行干燥处理，最后放入密封容器中储存。

9、优选的，步骤s1中，选择的壳聚糖的分子量在50-190kda之间。

10、优选的，步骤s2中，通过超声波破碎机在4℃下对山茶花样本进行破碎处理。

11、优选的，破碎时间为5～10分钟。

12、优选的，步骤s2中，通过低速离心对山茶花样本进行过滤。

13、优选的，步骤s3中，通过旋转涂布器形成薄膜后，使薄膜在室温下干燥24小时，再通过75℃热处理2小时交联固化。

14、优选的，步骤s5中，切向流过滤系统的流速为500ml/min，操作压力为2-5bar。

15、优选的，步骤s5中，通过100kda的超滤膜进行过滤提纯。

16、优选的，步骤s6中，取30μl外泌体原液，稀释至1ml上机，用纳米颗粒跟踪分析仪进行粒径检测。

17、山茶花外泌体在皮肤抗衰老修复中的应用。

18、本发明具有以下优点：本发明通过将山茶花样本进行破碎和过滤，得到提取液，再将提取液与干燥后的壳聚糖膜在室温下混合，通过电荷作用吸附外泌体，经切向流过滤系统过滤后对其进行提纯，从而大量获取高纯度的外泌体，该方法简便、高效。

技术特征：

1.一种用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s1中，选择的壳聚糖的分子量在50-190kda之间。

3.根据权利要求2所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s2中，通过超声波破碎机在4℃下对山茶花样本进行破碎处理。

4.根据权利要求3所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：破碎时间为5～10分钟。

5.根据权利要求4所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s2中，通过低速离心对山茶花样本进行过滤。

6.根据权利要求5所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s3中，通过旋转涂布器形成薄膜后，使薄膜在室温下干燥24小时，再通过75℃热处理2小时交联固化。

7.根据权利要求6所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s5中，切向流过滤系统的流速为500ml/min，操作压力为2-5bar。

8.根据权利要求7所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s5中，通过100kda的超滤膜进行过滤提纯。

9.根据权利要求8所述的用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，其特征在于：所述步骤s6中，取30μl外泌体原液，稀释至1ml上机，用纳米颗粒跟踪分析仪进行粒径检测。

10.一种权利要求1～9任意所述的山茶花外泌体在皮肤抗衰老修复中的应用。

技术总结本发明公开了一种用于山茶花外泌体切向流提取制备方法，S1：挑选山茶花样本并选择壳聚糖；S2：对山茶花样本进行破碎和过滤，得到提取液；S3：通过醋酸溶解壳聚糖，通过旋转涂布器形成薄膜并进行干燥和热处理；S4：将提取液与干燥后的壳聚糖膜混合，通过电荷作用吸附外泌体；S5：将壳聚糖膜放入切向流过滤系统中，收集切向流过滤后的流出液，对其进行提纯；S6：对外泌体NTA进行鉴定，将纯化后的溶液预冻，进行干燥处理，还公开了其应用。通过将山茶花样本进行破碎和过滤，得到提取液，再将提取液与干燥后的壳聚糖膜在室温下混合，通过电荷作用吸附外泌体，经切向流过滤系统过滤后对其进行提纯，从而大量获取高纯度的外泌体，该方法简便、高效。技术研发人员：尹见翕,陈悦帆,李泽华受保护的技术使用者：尹见翕技术研发日：技术公布日：2024/6/18