抗猫PD-1单克隆抗体及其应用的制作方法

本申请涉及抗体兽药。具体地，本申请涉及一种抗猫pd-1单克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、程序性细胞死亡蛋白1(pd-1)是一种在激活的t细胞、b细胞和髓样细胞中转录诱导的i型跨膜蛋白。研究表明，pd-1受体可以下调免疫反应，机体缺乏pd-1受体会出现外周免疫耐受崩溃，缺乏pd-1的小鼠会发生狼疮样增殖性关节炎和肾小球肾炎等自身免疫症状。这表明pd-1在免疫系统中起着重要的负调节作用。

2、pd-1是cd28同源物，其配体pd-l1也是b7：cd28基因家族的一员。b7：cd28家族能提供刺激和抑制t细胞激活的关键信号，调节t细胞的激活和耐受。pd-1可表达于活化的t、b细胞、巨噬细胞和nk细胞，而pd-l1可广泛表达于非淋巴组织，包括肿瘤细胞和肿瘤浸润性免疫细胞。pd-1信号通路能抑制t细胞的增殖和细胞因子的产生，而阻断pd-1能逆转pd-1介导的肿瘤免疫抑制。

3、免疫检查点抑制剂(icis)目前是治疗多种人类癌症的有效途径。pd-1及其配体(pd-l1和pd-l2)是最具吸引力的免疫检查点之一。针对免疫检查点(ic)的抗体能通过抑制pd-1和pd-l1的结合来恢复t细胞功能，从而在多种人类癌症的治疗中发挥作用。一些pd-1和pd-l1抑制剂已经被开发出来并被批准用于人类的抗癌治疗，pd-1或pd-l1在不同类型癌症的阻断免疫治疗中都获得了巨大成功。在兽医领域，pd-1/pd-l1抗体已用于治疗口腔恶性黑色素瘤(omm)，并取得了一定的疗效。这说明pd-1和pd-l1在免疫抑制中发挥了重要作用。

4、然而，到目前为止，关于ic的表达及其在猫体内作为治疗靶点的潜力还有许多未知因素。有研究者制备了抗猫pd-1单克隆抗体，其能在体外抑制猫pd-1和猫pd-l1之间的相互作用，研究者还发现这些猫的抑制性单克隆抗体增加了猫体内活化的外周血淋巴细胞(pbls)中干扰素γ(ifnγ)的产生。综上所述，抗猫pd-1单克隆抗体未来将有望成为一种有效的猫肿瘤治疗抗体。

技术实现思路

1、本申请的目的在于提供一种新的抗猫pd-1单克隆抗体、包含该单克隆抗体的兽药组合物以及该单克隆抗体的制药用途。

2、本申请的具体技术方案如下：

3、1.一种抗猫pd-1单克隆抗体，其中，其包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述三个轻链互补决定区为cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：

4、cdr-h1的氨基酸序列如seq id no：3所示；

5、cdr-h2的氨基酸序列如seq id no：4所示；

6、cdr-h3的氨基酸序列如seq id no：5所示；

7、cdr-l1的氨基酸序列如seq id no：6所示；

8、cdr-l2的氨基酸序列如seq id no：7所示；

9、cdr-l3的氨基酸序列如seq id no：8所示。

10、2.根据项1所述的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中，

11、所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no：9所示；

12、所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：10所示。

13、3.根据项2所述的单克隆抗体，其中，

14、重链的氨基酸序列如seq id no：11所示；

15、轻链的氨基酸序列如seq id no：12所示。

16、4.根据项1所述的单克隆抗体，其中，

17、所述单克隆抗体的重链的核苷酸序列如seq id no：1所示；

18、所述单克隆抗体的轻链的核苷酸序列如seq id no：2所示。

19、5.一种分离的核酸，其中，其编码如项求1-4任一项所述的单克隆抗体。

20、6.一种宿主细胞，其中，其包含如项5所述的核酸。

21、7.一种生产单克隆抗体的方法，其中，所述方法包括培养如项6所述的宿主细胞从而生产如项1-4任一项所述的单克隆抗体。

22、8.一种兽药组合物，其中，其包含如项1-4任一项所述的单克隆抗体和药学上可接受的载体；

23、优选地，其中，其用于治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病。

24、9.根据项8所述的兽药组合物，其中，所述治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病可以是以下任意一种或两种以上：猫鳞状细胞癌、乳腺癌、纤维肉瘤、肥大细胞瘤、肾细胞癌、淋巴瘤、皮肤癌、白血病。

25、10.如项1-4任一项所述的单克隆抗体在制备用于治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病的兽药中的用途；

26、优选地，其中，所述治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病可以是以下任意一种或两种以上：猫鳞状细胞癌、乳腺癌、纤维肉瘤、肥大细胞瘤、肾细胞癌、淋巴瘤、皮肤癌、白血病。

27、发明的效果

28、本专利申请的抗猫pd1单克隆抗体与重组猫his pd-1epksc抗原蛋白结合良好，也能很好地阻断猫pd1-hfc抗原与猫配体细胞cho-k1 pd-l1的结合，该猫pd1单克隆抗体的亲和力常数达到10-9数量级，为5.97×10-9m。该抗猫pd1单克隆抗体有望在临床上用于治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病。

技术特征：

1.一种抗猫pd-1单克隆抗体，其中，其包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3，所述三个轻链互补决定区为cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，其中：

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，其中，

3.根据权利要求2所述的单克隆抗体，其中，

4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其中，

5.一种分离的核酸，其中，其编码如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体。

6.一种宿主细胞，其中，其包含如权利要求5所述的核酸。

7.一种生产单克隆抗体的方法，其中，所述方法包括培养如权利要求6所述的宿主细胞从而生产如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体。

8.一种兽药组合物，其中，其包含如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体和药学上可接受的载体；

9.根据权利要求8所述的兽药组合物，其中，所述治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病可以是以下任意一种或两种以上：猫鳞状细胞癌、乳腺癌、纤维肉瘤、肥大细胞瘤、肾细胞癌、淋巴瘤、皮肤癌、白血病。

10.如权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体在制备用于治疗猫的癌细胞的生长、增殖或转移相关的疾病的兽药中的用途；

技术总结本申请提供了一种抗猫PD‑1单克隆抗体，其中，其包含三个重链互补决定区和三个轻链互补决定区，所述三个重链互补决定区为CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3，所述三个轻链互补决定区为CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3。本专利申请的抗猫PD1单克隆抗体与重组猫his PD‑1EPKSC抗原蛋白结合良好，也能很好地阻断猫PD1‑hfc抗原与猫配体细胞CHO‑K1PD‑L1的结合，且该抗猫PD1单克隆抗体与抗原的亲和力高，有望在临床上用于治疗猫的癌细胞生长、增殖或转移相关的疾病。技术研发人员：秦晓瑞,张久春,方朝东受保护的技术使用者：麦里生物科技（上海）有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/13