家蚕中肠特异表达启动子ΔBmSP25-Intron1p及其应用

本发明属于生物，具体涉及家蚕中肠特异表达启动子δbmsp25-intron1p及其应用。

背景技术：

1、家蚕是一种具有农业经济价值的模式昆虫，它在分子生物学研究中发挥着重要作用。家蚕经过人工驯化和过度追求经济形状，饲养过程中易受病原微生物的侵害，为寻找预防家蚕微生物病害的策略和巩固家蚕抵御防线，基于家蚕转基因工程的抗性素材创新，通过高量表达防御相关蛋白或rnai来提高抗病毒能力一直是研究的热点，其中对启动子研究显得尤为重要，这将为优化转基因策略来提高蚕区推广家蚕品种抵御微生物病害能力奠定基础。

2、中肠作为家蚕重要的消化和免疫器官，病原微生物随食物进入中肠，所以中肠也就成为家蚕防御病原微生物侵染的第一道屏障。随着家蚕基因组学、蛋白质组学等方面的突破，关于家蚕中肠研究也日益增多，如何了解中肠表达基因的功能也是诸多科研人员关注的焦点，这样有助于了解家蚕的消化和免疫。启动子在家蚕转基因技术中扮演者重要的角色，转基因技术日趋成熟，候选启动子、目的基因、调控元件等工具也越来越多，其中也包括一些家蚕中肠特异启动子的报道，但启动子驱动存在启动活性的差异，为获得在中肠内高效表达抗性基因来实现抗性素材创新，有必要探索新的家蚕中肠特异表达且高效启动子，进而提高家蚕抗病能力。

技术实现思路

1、基于以上背景，本发明家蚕中肠特异表达启动子δbmsp25-intron1p及其应用，为家蚕的抗病遗传育种提供新的方向。

2、本发明的技术方案为：

3、本发明的目的之一是提供：家蚕中肠特异表达启动子δbmsp25-intron1p，其含有δbmsp25片段，同δbmsp25片段连接的intron1p片段；所述δbmsp25片段的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述intron1p片段的核苷酸序列如seq id no.3所示。

4、本发明的目的之二是提供：上述的启动子δbmsp25-intron1p的应用，所述应用至少包括以下一种：

5、1)调控标记基因或抗性基因在家蚕中肠特异表达；

6、2)培育或辅助培育抗病家蚕；

7、3)制备驱动标记基因或抗性基因在家蚕中肠特异表达的重组载体。

8、进一步地，所述抗性基因选自家蚕空泡型atp酶基因(vacuolar-typeatpase，vac)、家蚕还原型辅酶ⅱ氧化还原酶基因(nadph-oxidoreductase-like，bmnox)、家蚕脂肪基因(bmlipase-1)、家蚕丝氨酸蛋白酶2基因(serineprotease2，bmsp2)其中一种；

9、所述标记基因选自红色荧光蛋白基因(red fluorescentprotein，rep)。

10、本发明的目的之三是提供：所述启动子δbmsp25-intron1p在提高vac基因在家蚕中肠中的表达量的应用。

11、本发明的目的之四是提供：一种基因表达框，其包含权利要求1所述的启动子δbmsp25-intron1p和与所述启动子δbmsp25-intron1p连接的编码基因。

12、进一步地，所述编码基因为抗性基因或标记基因，所述抗性基因选自家蚕空泡型atp酶基因(vacuolar-typeatpase，vac)、家蚕还原型辅酶ⅱ氧化还原酶基因(nadph-oxidoreductase-like，bmnox)、家蚕脂肪基因(bmlipase-1)、家蚕丝氨酸蛋白酶2基因(serineprotease 2，bmsp2)；

13、或所述标记基因选自红色荧光蛋白基因(red fluorescentprotein，rep)。

14、本发明的目的之五是提供所述基因表达框的应用，所述应用至少包括以下一种：

15、1)提高抗性基因在家蚕中肠特异表达量；

16、2)培育或辅助培育抗病家蚕；

17、3)制备驱动标记基因或抗性基因在家蚕中肠特异表达的重组载体。

18、本发明的目的之六是提供一种重组表达载体，其含有所述的启动子δbmsp25-intron1p，或所述的基因表达框。

19、本发明的目的之七是提供所述的一种重组表达载体的应用，所述应用至少包括以下一种：

20、1)提高抗性基因在家蚕中肠特异表达量；

21、2)培育或辅助培育抗病家蚕品系。

22、进一步地，所述抗性基因为vac基因，所述抗病家蚕为抗家蚕核型多角体病毒bmnpv家蚕品系。

23、相比现有技术，本发明的有益效果为：

24、本发明所提供的启动子具有显著的生物活性且可调控目的基因在中肠组织特异性表达：其可使得包括vac基因在内的目标基因在家蚕中肠中特异性表达，提升其表达量，但是在其他的部位，例如丝腺组织的表达量差异不明显，可为利用基因工程对抗病家蚕进行品种改良，特别是抗中肠型疾病的品种培育提供新的方向。

技术特征：

1.家蚕中肠特异表达启动子δbmsp25-intron1p，其特征在于，其含有δbmsp25片段，同δbmsp25片段连接的intron1p片段；所述δbmsp25片段的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述intron1p片段的核苷酸序列如seq id no.3所示。

2.权利要求1所述启动子δbmsp25-intron1p的应用，其特征在于，所述应用至少包括以下一种：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抗性基因选自家蚕空泡型atp酶基因、家蚕还原型辅酶ⅱ氧化还原酶基因、家蚕脂肪基因、家蚕丝氨酸蛋白酶2基因其中一种；

4.权利要求1所述启动子δbmsp25-intron1p在提高vac基因在家蚕中肠中的表达量的应用。

5.一种基因表达框，其特征在于，其包含权利要求1所述的启动子δbmsp25-intron1p和与所述启动子δbmsp25-intron1p连接的编码基因。

6.根据权利要求5所述的一种基因表达框，其特征在于，所述编码基因选自家蚕空泡型atp酶基因、家蚕还原型辅酶ⅱ氧化还原酶基因、家蚕脂肪基因、家蚕丝氨酸蛋白酶2基因其中一种；或红色荧光蛋白基因。

7.权利要求5或6所述的一种基因表达框的应用，其特征在于，所述应用至少包括以下一种：

8.一种重组表达载体，其特征在于，其含有权利要求1所述的启动子δbmsp25-intron1p，或权利要求5或6所述的基因表达框。

9.权利要求8所述的一种重组表达载体的应用，其特征在于，所述应用至少包括以下一种：

10.权利要求8所述的一种重组表达载体的应用，其特征在于，所述抗性基因为vac基因，所述抗病家蚕为抗家蚕核型多角体病毒bmnpv家蚕品系。

技术总结本发明公开了家蚕中肠特异表达启动子ΔBmSP25‑Intron1p及其应用，所述启动子ΔBmSP25‑Intron1p含有ΔBmSP25p片段，同ΔBmSP25p基因片段连接的Intron1p片段。本发明所提供的启动子具有显著的生物活性且可调控目的基因在中肠组织特异性表达：其可使得包括VAc基因在内的目标基因在家蚕中肠中特异性表达，提升其表达量，但是在其他的部位，例如丝腺组织的表达量差异不明显，可为利用基因工程对抗病家蚕进行品种改良，特别是抗中肠型疾病的品种培育提供新的方向。技术研发人员：张永红,白兴荣,苏振国,罗家福,范仕弘受保护的技术使用者：云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/18