新型干扰素变体及其双功能融合分子的制作方法

干扰素(ifn)是通过细胞响应于病毒而自然地产生的可溶性蛋白。干扰素包括i型干扰素(例如干扰素-α(ifn-α)和干扰素-β(ifn-β))和ii型干扰素(例如干扰素-γ(ifn-γ))。尽管首次描述了其抑制病毒复制的能力，但是ifn-α具有表现出抗增殖作用、诱导凋亡(rodriguez-villanueva j和tj mcdonnell,int j cancer,61:110,1995)和诱导肿瘤细胞中的肿瘤抑制基因p53(takaoka a等人,nature,424:516,2003)的多种特性。ifn-α是用于治疗多种癌症的第一重组蛋白，并且ifn-α已经被fda批准用于治疗若干种癌症，包括黑素瘤、肾细胞癌、b细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性髓细胞性白血病(cml)和毛细胞白血病。ifn-α、聚乙二醇化ifn-α和共有ifn(干扰素alfacon-1)也被fda批准用于治疗丙型肝炎(hcv)病毒和/或乙型肝炎(hbv)病毒的慢性感染。所有i1型ifn都被共有的受体ifn-αr识别，该共有的受体ifn-αr包括两种跨膜蛋白ifn-αr1和ifn-αr2。i型干扰素(ifn)信号传导驱动许多自身免疫性疾病，特别是系统性红斑狼疮(sle)的病理学，并且可以经由全血中存在的i型ifn-诱导型转录物来追踪，所述转录物提供i型ifn基因标志。通过实例的方式，yao等人(hum genomics proteomics 2009,pii:374312)描述了ifnα/β21-基因标志的鉴定及其作为i型ifn相关疾病或病症的生物标志物的用途。ifn-α对肿瘤细胞的“直接”作用是通过ifn-α直接结合这些细胞上的i型ifn受体并刺激凋亡、终末分化或减少增殖来介导的。不幸的是，i型干扰素受体也存在于大多数非癌性和非病毒感染的细胞中。ifn-α对这样的细胞上的这种受体的全身活化引起许多促炎细胞因子和趋化因子的表达，导致毒性。这样的毒性阻止了以对癌细胞发挥最大抗增殖和促凋亡活性的水平向受试者给药ifn-α，并且ifn-α治疗癌症的用途已经受到其短半衰期和相关的全身毒性的限制(weiss k,semin oncol,25:9,1998；jones gj和itri lm,cancer,57:1709,2006)。全身性ifn-α疗法的局限性已经导致对将ifn-α安全且有效地递送到肿瘤或病毒感染的部位的替代策略的探索。癌症免疫疗法是给予使用免疫系统攻击癌症的癌症治疗的名称，并且正在从全局和非特异性模拟免疫系统的疗法迅速发展到更有针对性地活化免疫系统的单个组分，导致增加的效力和降低的毒性。主要焦点是抑制存在于肿瘤或抗原呈递细胞的表面上的程序性死亡配体1(pd-l1)和存在于活化的淋巴细胞的表面上的程序性死亡1(pd-1)之间的相互作用的疗法。程序性死亡1(pd-1)是cd28受体家族的成员，该cd28受体家族还包括cd28、ctla-4、icos和btla。通过与其两个主要配体pd-l1(b7-h1)或pd-l2(b7-dc)结合，pd-1下调t细胞活化，该t细胞活化将通常在通过t细胞调节因子识别在肿瘤细胞上mhc的背景下表达的肿瘤抗原的情况下发生。在癌症中，pd-l1/pd-1途径可以保护肿瘤免受细胞毒性t细胞的影响，最终通过使肿瘤微环境中的细胞毒性t细胞灭活来抑制抗肿瘤免疫应答，并防止淋巴结中新t细胞的引发和活化以及随后向肿瘤的募集(chen和irving,clin cancer res.,18:6580-6587,2012)。pd-1/pd-l1相互作用的抑制在临床前模型中介导有效的抗肿瘤活性(美国专利第8,008,449号和第7,943,743号)，并且pd-1/pd-l1相互作用的ab抑制剂用于治疗癌症已经成为许多类型癌症的标准治疗(参见，例如，topalian等人,curr opin immunol.,24:207-212,2012；brahmer等人,n engl j med.,366(26):2455-65,2012；garon等人,n engl jmed,372:2018-2028,2015；philips等人,int.immunol.,27(1):39-46,2015；migden等人,nengl jmed,379:341-351,2018)。已经在肿瘤浸润性t细胞上发现pd-1表达，并且已经在许多鼠和人类癌症，包括人类肺癌、卵巢癌和结肠癌以及多种骨髓瘤中的肿瘤细胞和肿瘤内的髓样细胞上发现pd-l1表达，并且由例如bristol-myers squibb(纳武利尤单抗)、merck(帕博利珠单抗)、regeneron(西米普利单抗(cemiplimab))、roche(阿替利珠单抗)、astrazeneca(度伐利尤单抗)开发的抗pd-1抗体和抗pd-l1抗体已经被fda批准用于治疗多种癌症适应症。pd-1途径阻断剂的耐受性及其独特的作用机制使其成为组合方案开发的理想支柱。最近在黑素瘤患者中组合ctla-4和pd-1阻断的临床数据示出，与单独阻断任一检查点相比增加的客观肿瘤应答的比率，支持组合检查点阻断可能导致增加的临床益处的观点(wolchok等人,n engl j med,366:2443-54,2012)。yervoy和opdivo的组合已经被批准用于治疗某些患有黑素瘤、间皮瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌和肾细胞癌的患者。pd-1/pd-l1免疫检查点还参与慢性病毒感染，包括乙型肝炎病毒(hbv)和丙型肝炎病毒(hcv)。由于病毒感染引起的肝脏的慢性炎症导致肝细胞上pd-l1的表达，这支持了由于经由通过由免疫细胞表达的pd-1的负信号传导下调抗病毒免疫应答而引起的感染的持续存在。pd-1和pd-l1阻断抗体正在用于慢性hbv和hcv感染的临床上进行测试，并且已经示出有希望的活性。这些抗体的提议的作用机制是恢复感染部位处的功能失调的免疫细胞的抗病毒活性。本发明涉及双功能融合分子，该双功能融合分子包含附接至疾病组织靶向生物制品或肿瘤相关抗原(taa)靶向生物制品(例如，抗pd-l1抗体)的具有降低的生物活性的突变多肽配体(例如，突变ifn-α)，其中靶向生物制品或taa靶向生物制品将突变配体引导至在其表面上表达所述靶向生物制品结合的抗原以及所述配体的受体的细胞。重要的是，因为突变多肽配体具有降低的生物活性，所以所得到的融合分子具有降低的脱靶活性和脱靶毒性。更重要的是，靶向生物制品对突变配体的靶向恢复了突变配体的活性，其中活性恢复的程度显然与细胞上靶向生物制品的水平相关。因此，本发明的融合分子通过提供具有比先前描述的治疗窗口更大浓度的治疗窗口的双功能融合分子来推进现有技术。本发明的公开内容在一个方面中，本发明涉及共有ifn-α(con-ifn-α)的突变变体的产生。这些变体具有氨基酸取代，该氨基酸取代降低了它们对ifn-αr1和ifn-αr2受体复合物(ifn-αr)的亲和力，并降低或消除了活化ifn-αr表达细胞的能力，但保留了结合ifn-αr的能力以及结合和活化ifn-αr受体复合物的能力。在多种实施方案中，突变体con-ifn-α具有选自以下的生物活性：野生型con-ifn-α的生物活性的小于70％；野生型con-ifn-α的生物活性的小于60％；野生型con-ifn-α的生物活性的小于50％；野生型con-ifn-α的生物活性的小于40％；野生型con-ifn-α的生物活性的小于30％；野生型con-ifn-α的生物活性的小于20％；或从其推断的野生型con-ifn-α(即编码序列已经突变以获得突变体ifn的野生型con-ifn-α)的生物活性的小于10％。在另一个方面中，本发明涉及使用这些突变的con-ifn-α变体来构建双功能融合分子，该双功能融合分子包含附接至疾病组织靶向部分或肿瘤相关抗原(taa)靶向部分的突变的con-ifn-α变体，其中靶向部分将突变的con-ifn-α变体引导至在其表面上表达所述靶向部分结合的抗原以及所述配体的受体的细胞。在多种实施方案中，靶向部分靶向在ifn受体表达细胞上表达的标志物。在多种实施方案中，靶向部分被引导至组织特异性标志物。在多种实施方案中，组织是癌症组织。在多种实施方案中，双功能融合分子包含呈抗体、双特异性抗体、异二聚体抗体、抗体片段、双抗体、蛋白或肽的形式的靶向部分，该靶向部分与癌症组织中富集的分子，诸如肿瘤相关抗原抗体(taa ab)结合。在另一个方面中，本发明涉及使用这些突变的con-ifn-α变体来构建双功能融合分子，该双功能融合分子包含附接至疾病组织靶向部分或肿瘤相关抗原(taa)靶向部分的突变的con-ifn-α变体，其中靶向部分将突变的con-ifn-α变体引导至在其表面上表达所述靶向部分结合的抗原以及所述配体的受体的细胞。在多种实施方案中，靶向部分靶向在ifn受体表达细胞上表达的标志物。在多种实施方案中，靶向部分被引导至病毒感染的组织特异性标志物。在多种实施方案中，组织是肝炎病毒感染的肝脏。在多种实施方案中，双功能融合分子包含呈抗体、双特异性抗体、异二聚体抗体、抗体片段、双抗体、蛋白或肽的形式的靶向部分，该靶向部分与病毒感染的肝组织中富集的分子结合。在多种实施方案中，融合分子包含i型干扰素分子。在多种实施方案中，融合分子包含干扰素-α(ifn-α)分子。在多种实施方案中，融合分子包含干扰素-β(ifn-β)分子。在多种实施方案中，融合分子包含共有干扰素-α(con-ifn-α)分子。在多种实施方案中，融合分子包含i型干扰素突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:1的氨基酸序列的con-ifn-α分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:2的氨基酸序列的con-ifn-α突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:3的氨基酸序列的con-ifn-α突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:4的氨基酸序列的con-ifn-α突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:5的氨基酸序列的con-ifn-α突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:6的氨基酸序列的人类ifn-α2b分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:7的氨基酸序列的人类ifn-α2b突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:8的氨基酸序列的人类ifn-α5分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:9的氨基酸序列的人类ifn-α5突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq idno:10的氨基酸序列的人类ifn-α5突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:11的氨基酸序列的人类ifn-α6分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq id no:12的氨基酸序列的人类ifn-α6突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seq idno:13的氨基酸序列的人类ifn-α6突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含具有seqid no:14的氨基酸序列的人类ifn-α6突变体分子。在多种实施方案中，融合分子包含选自由以下组成的组的taa ab：完全人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、双特异性抗体、异二聚体抗体、结合抗原的抗体片段、fab、fab’、fab2、fab’2、igg、igm、iga、ige、scfv、dsfv、dab、纳米抗体、单抗体和双抗体。在多种实施方案中，抗体是嵌合抗体。在多种实施方案中，抗体是人源化单克隆抗体。在多种实施方案中，抗体是完全人类单克隆抗体。在多种实施方案中，taa ab是人类抗pd-l1 ab。在多种实施方案中，taa ab是人类抗pd-1ab。在多种实施方案中，taaab是具有seq id no:15中列出的轻链序列和seq id no:16中列出的重链序列的抗pd-l1。在多种实施方案中，taa ab是具有seq id no:15中列出的轻链序列和seq id no:17中列出的重链序列的抗pd-l1。在多种实施方案中，taa ab是具有seq id no:15中列出的轻链序列和seq id no:18和seq id no:19中列出的重链序列的抗pd-l1异二聚体。在多种实施方案中，融合分子是重组表达的融合分子。在多种实施方案中，融合分子包含直接附接至靶向部分的干扰素分子。在多种实施方案中，融合分子包含经由肽接头附接至靶向部分的ifn分子。在多种实施方案中，接头可以是相对地不含二级结构的在5个、10个、15个、20个、30个、40个或更多个氨基酸之间的人工序列。在多种实施方案中，接头是在10个、15个、20个、30个、40个或更多个氨基酸之间的刚性接头肽，该刚性接头肽展示出α-螺旋构象并且可以充当蛋白结构域之间的刚性间隔物。在多种实施方案中，肽接头是富含g/s的接头。在多种实施方案中，肽接头是α-螺旋接头。在多种实施方案中，肽接头是甘氨酸接头。在多种实施方案中，肽接头具有seq id no:20中列出的序列。在多种实施方案中，肽接头具有seq id no:21中列出的序列。在多种实施方案中，肽接头具有seq id no:22中列出的序列。在多种实施方案中，肽接头具有seq id no:23中列出的序列。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α2b融合分子(“fp-01”)，该抗pd-l1ab-ifn-α2b融合分子(“fp-01”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:6的氨基酸序列的ifn-α2b分子，该ifn-α2b分子直接与具有seq idno:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-ifn-α2b(r149a)融合分子(“fp-02”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α2b(r149a)融合分子(“fp-02”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:7的氨基酸序列的ifn-α2b(r149a)分子，该ifn-α2b(r149a)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α5融合分子(“fp-03”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α5融合分子(“fp-03”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:8的氨基酸序列的ifn-α5分子，该ifn-α5分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α5(r150a)融合分子(“fp-04”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α5(r150a)融合分子(“fp-04”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:9的氨基酸序列的ifn-α5(r150a)分子，该ifn-α5(r150a)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-ifn-α5(a146d)融合分子(“fp-05”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α5(a146d)融合分子(“fp-05”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:10的氨基酸序列的ifn-α5(a146d)分子，该ifn-α5(a146d)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-06”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-06”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:1的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-con-ifn-α(r150a)融合分子(“fp-07”)，该抗pd-l1ab-con-ifn-α(r150a)融合分子(“fp-07”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:2的氨基酸序列的con-ifn-α(r150a)分子，该con-ifn-α(r150a)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-con-ifn-α(a146d)融合分子(“fp-08”)，该抗pd-l1ab-con-ifn-α(a146d)融合分子(“fp-08”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:3的氨基酸序列的con-ifn-α(a146d)分子，该con-ifn-α(a146d)分子直接与具有seq idno:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α(a146k)融合分子(“fp-09”)，该抗pd-l1ab-con-ifn-α(a146k)融合分子(“fp-09”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:4的氨基酸序列的con-ifn-α(a146k)分子，该con-ifn-α(a146k)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α6融合分子(“fp-10”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α6融合分子(“fp-10”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:11的氨基酸序列的ifn-α6分子，该ifn-α6分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α6(r150a)融合分子(“fp-11”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α6(r150a)融合分子(“fp-11”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:12的氨基酸序列的ifn-α6(r150a)分子，该ifn-α6(r150a)分子直接与具有seqid no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α6(a146d)融合分子(“fp-12”)，该抗pd-l1ab-ifn-α6(a146d)融合分子(“fp-12”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:13的氨基酸序列的ifn-α6(a146d)分子，该ifn-α6(a146d)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-ifn-α6(a146k)融合分子(“fp-13”)，该抗pd-l1 ab-ifn-α6(a146k)融合分子(“fp-13”)包含具有seq idno:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:14的氨基酸序列的ifn-α6(a146k)分子，该ifn-α6(a146k)分子直接与具有seq id no:16中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α融合分子(“fp-14”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-14”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:2的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seqid no:22中列出的序列的肽接头与具有seq id no:17中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α融合分子(“fp-15”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-15”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:2的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seqid no:23中列出的序列的肽接头与具有seq id no:17中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α融合分子(“fp-16”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-16”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:3的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seqid no:22中列出的序列的肽接头与具有seq id no:17中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α融合分子(“fp-17”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-17”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:3的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seqid no:23中列出的序列的肽接头与具有seq id no:17中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α融合分子(“fp-18”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-18”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:5的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seqid no:22中列出的序列的肽接头与具有seq id no:17中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1ab-con-ifn-α融合分子(“fp-19”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-19”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:2的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seqid no:22中列出的序列的肽接头和具有seq id no:18中列出的氨基酸序列的第二重链与具有seq id no:19中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合，形成异二聚体抗体分子。在多种实施方案中，融合分子是抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-20”)，该抗pd-l1 ab-con-ifn-α融合分子(“fp-20”)包含具有seq id no:15中列出的氨基酸序列的轻链以及具有seq id no:5的氨基酸序列的con-ifn-α分子，该con-ifn-α分子使用具有seq id no:22中列出的序列的肽接头和具有seq id no:18中列出的氨基酸序列的第二重链与具有seqid no:19中列出的氨基酸序列的重链的c-末端融合，形成异二聚体抗体分子。在另一个方面中，本发明提供了一种药物组合物，该药物组合物包含在药学上可接受的赋形剂或运载体中的作为活性成分的本发明的双功能融合分子。在多种实施方案中，药物组合物被配制成用于经由选自由以下组成的组的途径施用：皮下注射、腹膜内注射、肌肉内注射、胸骨内注射、静脉内注射、动脉内注射、鞘内注射、脑室内/心室内注射(intraventricular injection)、尿道内注射、颅内注射、滑膜内注射或经由输注。在另一个方面中，本公开内容涉及用于检测和/或监测患有i型干扰素介导的疾病或病症的受试者的生物标志物的鉴定和使用。在多种实施方案中，疾病或病症选自由以下组成的组：癌症、感染性疾病、免疫病症、炎性疾病或状况以及自身免疫性疾病。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的癌症或癌症转移的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。在一种实施方案中，受试者是人类受试者。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的癌症或癌症转移的方法，该方法包括施用与第二疗法组合的治疗有效量的本发明的药物组合物，所述第二疗法选自由以下组成的组：细胞毒性化学疗法、免疫疗法、小分子激酶抑制剂靶向疗法、手术、放射疗法和干细胞移植。在多种实施方案中，组合疗法可以包括向受试者施用治疗有效量的免疫疗法，该免疫疗法包括但不限于使用针对特定肿瘤抗原的消耗性抗体的治疗；使用抗体-药物缀合物的治疗；使用针对共刺激性分子或共抑制性分子(免疫检查点)诸如ctla-4、pd-1、pd-l1、ox-40、cd137、gitr、lag3、tim-3、cd40、cd47、sirpα、icos、siglec 8、siglec 9、siglec 15、tigit和vista的激动性抗体、拮抗性抗体或阻断性抗体的治疗；使用双特异性t细胞接合抗体诸如博纳吐单抗(blinatumomab)的治疗；涉及施用生物响应调节物诸如tnf家族、il-1、il-4、il-7、il-12、il-15、il-17、il-21、il-22、gm-csf、ifn-α、ifn-β和ifn-γ的治疗；使用治疗性疫苗诸如sipuleucel-t的治疗；使用树突细胞疫苗或肿瘤抗原肽疫苗的治疗；使用嵌合抗原受体(car)-t细胞的治疗；使用car-nk细胞的治疗；使用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)的治疗；使用过继转移的抗肿瘤t细胞(离体扩增的和/或tcr转基因的抗肿瘤t细胞)的治疗；使用tall-104细胞的治疗；和使用免疫刺激剂诸如toll-样受体(tlr：tlr7、tlr8和tlr 9)激动剂cpg和咪喹莫特(imiquimod)的治疗；其中组合疗法提供增加的对肿瘤细胞的效应细胞杀伤，即，当被共施用时，在ifn变体和免疫疗法之间存在协同作用。在多种实施方案中，癌症选自由以下组成的组：b细胞淋巴瘤；肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)；支气管癌；结肠直肠癌；前列腺癌；乳腺癌；胰腺癌；胃癌；卵巢癌；膀胱癌；脑癌或中枢神经系统癌症；外周神经系统癌症；食道癌；宫颈癌；黑素瘤；子宫癌或子宫内膜癌；口腔或咽部的癌症；肝癌；肾癌；胆道癌；小肠癌或阑尾癌；唾液腺癌；甲状腺癌；肾上腺癌；骨肉瘤；软骨肉瘤；脂肪肉瘤；睾丸癌；和恶性纤维组织细胞瘤；皮肤癌；头颈癌；淋巴瘤；肉瘤；多发性骨髓瘤；以及白血病。在多种实施方案中，个体先前对用抗癌疗法的治疗有响应，但是在停止治疗后遭受复发(下文称为“复发性癌症”)。在多种实施方案中，个体患有抵抗性或难治性癌症。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的感染性疾病的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。在一种实施方案中，受试者是人类受试者。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的hbv感染的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。在一种实施方案中，受试者是人类受试者。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的hbv感染的方法，该方法包括施用与第二疗法组合的治疗有效量的本发明的药物组合物，该第二疗法选自由以下组成的组：使用核苷类似物或核苷酸类似物(nucleo(t)side analogs)的治疗，所述核苷类似物或核苷酸类似物诸如富马酸替诺福韦二吡呋酯(tenofovir disoproxil fumarate，tdf)、替诺福韦艾拉酚胺(tenofovir alafenamide，taf)、拉米夫定(lamivudine)、阿德福韦酯(adefovir dipivoxil)、恩替卡韦(entecavir，etv)、替比夫定(telbivudine)、agx-1009、恩曲他滨(emtricitabine)、克拉夫定、利托那韦、dipivoxil、洛布卡韦、泛昔洛韦(famvir)、ftc、n-乙酰半胱氨酸(nac)、pc1323、theradigm-hbv、胸腺素-α和更昔洛韦、besifovir(ana-380/lb-80380)和tenofovir-exaliades(tlx/cmx157)；使用其他抗病毒药物诸如sirna、反义寡核苷酸、衣壳组装调节剂(capsid assembly modulator)和聚合酶抑制剂的治疗；使用免疫调节疗法的治疗，所述免疫调节疗法诸如tlr7激动剂、tlr8激动剂、sting激动剂、rig-i激活剂、pd-1阻断抗体、pd-l1阻断抗体、tim-3阻断抗体、lag-3阻断抗体和ctla-4阻断抗体；使用针对hbv抗原的治疗性疫苗的治疗；以及使用过继细胞疗法的治疗，所述过继细胞疗法诸如hbv特异性car-t细胞疗法、hbv特异性tcr-t细胞疗法和其他hbv特异性细胞疗法。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的hcv感染的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。在一种实施方案中，受试者是人类受试者。在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗受试者的hcv感染的方法，该方法包括施用与第二疗法组合的治疗有效量的本发明的药物组合物，该第二疗法选自由以下组成的组：蛋白酶抑制剂、聚合酶抑制剂、直接作用抗病毒剂、利巴韦林(ribavirin)和聚乙二醇化干扰素。在多种实施方案中，第二疗法选自由以下组成的组：mavyet(格卡瑞韦(glecaprevir)/哌仑他韦(pibrentasvir))、epclusa(索磷布韦(sofosbuvir)/维帕他韦(velpatasvir))、vosevi(索磷布韦/维帕他韦/伏西瑞韦(voxilaprevir))、harvoni(来迪派韦(ledipasvir)/索磷布韦)、sovaldi(索磷布韦)和zepatier(艾尔巴韦(elbasvir)/格拉瑞韦(grazoprevir))。在其他方面中，本公开内容提供了编码本公开内容的融合分子的多核苷酸；包含编码本公开内容的融合分子的多核苷酸的载体；任选地，可操作地连接到由用载体转化的宿主细胞识别的控制序列；包含载体的宿主细胞，所述载体包含编码本公开内容的融合分子的多核苷酸；用于产生本公开内容的融合分子的工艺，该工艺包括培养包括包含编码本公开内容的融合分子的多核苷酸的载体的宿主细胞，使得多核苷酸被表达；以及任选地，从宿主细胞培养基中回收融合分子。

背景技术：

技术实现思路