新型多特异性抗体的制作方法

本公开涉及抗体领域。具体而言，其涉及用于治疗与异常细胞相关的疾病的治疗性抗体的领域。更具体而言，其涉及结合lag-3和b7家族蛋白质、特别是pd-l1的新型多特异性抗体及其变体。

背景技术：

1、尽管在该疾病的治疗方面取得了许多进展，并且在导致癌症的分子事件方面的知识有所增加，但癌症仍然是世界上主要的死亡原因。传统上，大多数癌症药物的发现聚焦于阻断必要细胞功能和杀灭分裂细胞的药物。然而，在晚期癌症的情况下，无论施用多么积极，甚至于患者因治疗而遭受危及生命的副作用的程度，化学疗法都很少能完全治愈。在大多数情况下，患者的肿瘤停止生长或暂时缩小(称为缓解)不久后再次开始增生，有时速度更快(称为复发)，且变得越来越难以治疗。在过去的数年里，癌症药物开发的重点已从广泛的细胞毒性化学疗法转移至毒性较小的靶向细胞抑制疗法(targeted cytostatictherapy)。用靶向疗法治疗晚期癌症已在白血病及一些其他癌症中得到临床验证。然而，在大多数癌症中，靶向方法仍被证明不足以完全消除大多数患者的癌症。

2、已使用各种不同方法达成癌症的靶向，包括例如针对癌症赖以生存和/或生长的信号传导蛋白质的小分子；具有肿瘤特异性蛋白质的疫苗；用主动杀灭肿瘤细胞和将细胞毒性分子靶向肿瘤的抗体的细胞疗法；干扰信号传导和/或将宿主的免疫系统(再)导向肿瘤细胞。

3、一类开发中的治疗性抗体是双特异性抗体，其包含两种不同结合位点，该位点结合不同抗原或相同抗原上的不同表位。双特异性抗体可针对多种应用进行设计。首先，双特异性抗体可提供比单特异性抗体更高的组织特异性。多种肿瘤相关抗原不仅由肿瘤细胞(过度)表达，亦在正常、健康的细胞上表达。针对涉及特定癌症类型的两种不同肿瘤相关抗原的双特异性抗体可将抗体特异性靶向抗体诱导肿瘤细胞杀灭的肿瘤部位，从而防止与仅表达其中一种抗原的非肿瘤细胞结合并因此减少离位(off-site)毒性。其他作用机制包括例如免疫细胞与肿瘤细胞的接合和肿瘤生长所需的两个信号传导路径的破坏。

4、免疫检查点蛋白例如pd-1、pd-l1、ctla-4、lag-3和tim-3是抗体疗法的受关注目标。至今，已描述许多靶向lag-3或pd-l1的单特异性抗体以及某些结合lag-3和pd-l1的双特异性抗体。然而，这些双特异性抗体中的每个在生产有效治疗药物中有其自身挑战。因此，仍然需要开发新颖、有效的lag-3xpd-l1双特异性抗体。

技术实现思路

1、本发明的一个目的在于提供一种用于治疗人类疾病(特别是用于治疗癌症)的新型药物。此目的通过提供包含抗人类lag-3结合结构域及抗人类pd-l1结合结构域的多特异性抗体来满足。

2、在某些实施方式中，本公开提供了一种多特异性抗体，其包含结合lag-3的结合结构域和结合pd-l1的结合结构域；或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合至少相当、或相等或更高的效价(potency)。在某些实施方式中，参考抗体的组合包含：包含具有如seq id no:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如seq id no:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体(瑞拉利单抗(relatlimab)类似物抗体)、以及包含具有如seq id no:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如seq id no:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体(阿特珠单抗(atezolizumab)类似物抗体)。

3、在某些实施方式中，本公开还提供了一种多特异性抗体、或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或其变体包含特异性结合lag-3的胞外结构域的结合结构域和特异性结合b7家族蛋白质的胞外结构域的结合结构域，其中lag-3结合结构域包含重链可变区，该重链可变区包含具有如seq id no:1至17或seq id no:52至59中任一者所示的氨基酸序列的重链可变区的重链cdr1(hcdr1)、重链cdr2(hcdr2)和重链cdr3(hcdr3)。

4、在某些实施方式中，本公开还提供了一种药物组合物，其包含有效量的如本文所述的多特异性抗体或其变体。

5、在某些实施方式中，本公开还提供了如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用作药物。

6、在某些实施方式中，本公开还提供了如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病。在某些实施方式中，本公开提供如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物，其用于治疗癌症。

7、在某些实施方式中，本公开还提供了一种用于治疗(a)疾病、或(b)与被抑制的免疫系统相关的疾病、或c)癌症的方法，其包含向有需要的个体施用有效量的如本文所述的多特异性抗体或其变体、或药物组合物。

8、在某些实施方式中，本公开还提供了一种载体，其包含编码如本文所述的lag-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码如本文所述的pd-l1结合结构域的重链可变区的核酸序列。

9、在某些实施方式中，本公开还提供了一种细胞，其包含编码如本文所述的lag-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码如本文所述的pd-l1结合结构域的重链可变区的核酸序列。

10、在某些实施方式中，本公开还提供了一种细胞，其生产如本文所述的多特异性抗体或其变体。

11、在某些实施方式中，本公开提供了一种用于生产如本文所述的多特异性抗体的变体的方法、以及由此方法获得的变体。

技术特征：

1.一种多特异性抗体，其包含结合lag-3的结合结构域和结合pd-l1的结合结构域；或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合相当、或相等或更高的效价，其中所述参考抗体的组合包含：包含具有如seq id no:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如seq id no:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体，以及包含具有如seq id no:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如seq id no:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体。

2.根据权利要求1所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体包含结合lag-3的单一结合结构域和/或结合pd-l1的单一结合结构域。

3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过在体内小鼠研究中测量肿瘤体积减少来确定。

4.根据权利要求3所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价是在所述参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5倍范围内的肿瘤体积减少，且包括与所述参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5至2倍、优选地3至2倍偏差。

5.根据权利要求1或2所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过阻断配体或受体结合lag-3和/或pd-l1的效价来确定。

6.根据权利要求5所述的多特异性抗体或其变体，其中所述阻断配体结合lag-3和/或pd-l1的效价是在pd-1/lag-3报导子测定中测量的。

7.根据权利要求5或6所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价是阻断配体或受体结合lag-3和/或pd-l1的效价，其在所述参考抗体的组合的阻断配体或受体结合lag-3和/或pd-l1的效价的5倍范围内，且包括与所述参考抗体的组合的lag-3和/或pd-l1阻断活性的5至2倍、优选地3至2倍偏差。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述结合lag-3的结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：

9.根据权利要求1-8中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述lag-3结合结构域包含具有如seq id no:1-17或seq id no:52-59中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述lag-3结合结构域进一步包含轻链可变区。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述lag-3结合结构域进一步包含ch1和cl区。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述结合pd-l1的结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：

13.根据权利要求1-12中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述pd-l1结合结构域包含具有如seq id no:20-24中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述pd-l1结合结构域进一步包含轻链可变区。

15.根据权利要求1-10中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述pd-l1结合结构域进一步包含ch1和cl区。

16.一种多特异性抗体、或其保持所述抗体的结合特异性的变体，其中所述抗体或其变体包含特异性结合lag-3的胞外结构域的结合结构域和特异性结合b7家族蛋白质的胞外结构域的结合结构域，

17.根据权利要求16所述的多特异性抗体或其变体，其中所述lag-3结合结构域包含具有如seq id no:1-17或seq id no:52-59中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。

18.根据权利要求16或17所述的多特异性抗体或其变体，其中所述lag-3结合结构域进一步包含轻链可变区。

19.根据权利要求16-18中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述lag-3结合结构域进一步包含ch1和cl区。

20.根据权利要求16-19中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体对于结合lag-3是单价的。

21.根据权利要求16-20中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述b7家族蛋白质选自由pd-l1、pd-l2、cd80、cd86、b7-h4、tnfrsf14和b7-h7组成的组。

22.根据权利要求16-21中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述b7家族蛋白质是pd-l1。

23.根据权利要求16-22中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述特异性结合b7家族蛋白质的胞外结构域的可变结构域阻断pd-l1与其受体的结合。

24.根据权利要求23所述的抗体或其变体，其中所述受体是pd-1和/或cd80。

25.根据权利要求16-24中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述结合pd-l1的结合结构域包含重链可变区，所述重链可变区包含：

26.根据权利要求16-25中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述pd-l1结合结构域包含具有如seq id no:20-24中任一者所示的氨基酸序列、或与其具有至少80％、优选85％、更优选90％、或最优选95％序列同一性的重链可变区。

27.根据权利要求16-26中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述pd-l1结合结构域进一步包含轻链可变区。

28.根据权利要求16-27中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述pd-l1结合结构域进一步包含ch1和cl区。

29.根据权利要求16-28中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体对于结合pd-l1是单价的。

30.根据权利要求16-29中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体具有相比于参考抗体的组合相当、或相等或更高的效价，其中所述参考抗体的组合包含：包含具有如seq id no:27中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如seq id no:28中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体，以及包含具有如seq id no:25中所示的氨基酸序列的两个重链可变区和具有如seq id no:26中所示的氨基酸序列的两个轻链可变区的参考抗体。

31.根据权利要求30所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过在体内小鼠研究中测量肿瘤体积减少来确定。

32.根据权利要求30或31所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价包括与所述参考抗体的组合的肿瘤体积减少的5至2倍、优选地3至2倍偏差。

33.根据权利要求30所述的多特异性抗体或其变体，其中所述效价通过阻断配体或受体结合lag-3和/或pd-l1的效价来确定。

34.根据权利要求33所述的多特异性抗体或其变体，其中所述阻断配体结合lag-3和/或pd-l1的效价是在pd-1/lag-3报导子测定中测量的。

35.根据权利要求33或34所述的多特异性抗体或其变体，其中相当的效价是阻断配体或受体结合lag-3和/或pd-l1的效价，其在所述参考抗体的组合的阻断配体或受体结合lag-3和/或pd-l1的效价的5倍范围内，且包括与所述参考抗体的组合的lag-3和pd-l1阻断活性的5至2倍、优选地3至2倍偏差。

36.根据权利要求1-35中任一项所述的多特异性抗体或其变体，其中所述抗体或变体是全长抗体，特别是全长双特异性抗体。

37.一种药物组合物，其包含：根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体；以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。

38.根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物，其用作药物。

39.根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物，其用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病。

40.根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物，其用于治疗癌症。

41.一种用于治疗疾病的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物。

42.一种用于治疗与被抑制的免疫系统相关的疾病的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物。

43.一种用于治疗癌症的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体、或根据权利要求37所述的药物组合物。

44.一种载体，其包含编码根据权利要求16-20中任一项所定义的lag-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码根据权利要求25-28中任一项所定义的pd-l1结合结构域的重链可变区的核酸序列。

45.根据权利要求44所述的载体，其中所述载体进一步包含编码ch1区以及优选地铰链、ch2和ch3区的核酸序列。

46.根据权利要求44或45所述的载体，其进一步包含编码轻链可变区和优选地cl区的至少一个核酸序列。

47.根据权利要求46所述的载体，其中所述轻链可变区是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。

48.一种细胞，其包含编码根据权利要求16-20中任一项所定义的lag-3结合结构域的重链可变区的核酸序列和编码根据权利要求25-28中任一项所定义的pd-l1结合结构域的重链可变区的核酸序列。

49.根据权利要求48所述的细胞，其中所述细胞进一步包含编码ch1区以及优选地铰链、ch2和ch3区的核酸序列。

50.根据权利要求48或49所述的细胞，其进一步包含编码轻链可变区和优选地cl区的至少一个核酸序列。

51.根据权利要求50所述的细胞，其中所述轻链可变区是能够与具有不同表位特异性的多个重链配对的轻链的轻链可变区。

52.一种细胞，其生产根据权利要求1-36中任一项所述的多特异性抗体或其变体。

53.根据权利要求52的细胞，其中所述细胞是重组细胞，其已使用根据权利要求44-47中任一项所述的载体转化。

技术总结本公开涉及一种多特异性抗体，其包含结合LAG‑3的结合结构域和结合PD‑L1的结合结构域。这种多特异性抗体比LAG‑3和PD‑L1参考抗体的组合具有相当、或相等或更高的效价。还提供了一种用于治疗疾病、特别是与被抑制的免疫系统相关的疾病、诸如癌症的方法，其使用本公开的多特异性抗体。本公开还涉及一种载体和细胞，其包含编码LAG‑3和PD‑L1结合结构域的重链可变区的核酸。技术研发人员：西蒙·爱德华·普拉特,科内利斯·阿德里安·德克吕夫受保护的技术使用者：美勒斯公司技术研发日：技术公布日：2024/6/13