尿液中N-糖基化蛋白组合作为靶标在早期诊断阿尔茨海默病中的应用

本发明属于疾病诊断标志物，具体涉及尿液中n-糖基化蛋白组合作为靶标在早期诊断阿尔茨海默病中的应用。

背景技术：

1、阿尔茨海默病(alzheimer disease，ad)是一种进行性发展的神经退行性疾病，主要发生于老年人，是一种与年龄相关的、以进行性的记忆和认知功能障碍为主要临床特征的中枢神经系统退行性疾病，临床主要症状包括记忆障碍、失语、失认、执行功能障碍等。阿尔茨海默病病变部位集中在海马和大脑皮层，大脑半球出现皮质弥漫性萎缩，重量变轻，脑回变窄，脑沟增宽。往往在早期ad患者脑中就已经出现病变并伴随临床症状，病变区域随年龄增长而恶化，导致大脑功能受损，身体机能无法改善。1906年德国神经病理学家aloisalzheimer首次对这种疾病进行了报道，描述了在患者脑中发现的此类疾病的病理特征，其一为神经细胞内高度磷酸化的微管相关蛋白(microtubule-associated protein，tau)构成的神经纤维缠结(neurofibrillary tangles，nfts)，其二为细胞外由β-淀粉样蛋白(aβ)聚集和沉积形成的淀粉样斑(amyloid plaques)。随后，神经纤维缠结和淀粉样斑成为诊断阿尔茨海默病的两个重要的病理学特征。

2、阿尔茨海默病多发生在65岁以上的人群中，据统计在65岁以上的人群中发病几率约10％，85岁以上的人群中有约50％的人患有此病。阿尔茨海默病患者占到痴呆症患者总数的60％～80％。临床研究表明ad可分为多见的、散发型的ad(sporadic ad，sad)及少数(约占15％～20％)有家族遗传史的家族型ad(familial ad，fad)。常见的散发类型ad主要影响65岁以上的老年人，并且发病率随年龄的增加而增高。因此，ad发病机理的研究及药物开发对于人类的健康来说越来越重要。

3、ad目前的治疗方法有效，为数不多的药物仅能延缓疾病的进程，暂无药物可以逆转ad的病理进展，因此，开发早期诊断ad的准确无创便捷的诊断标志物和诊断试剂盒就变得尤为重要。

技术实现思路

1、本领域普通技术人员知晓：糖基化是糖链在糖基转移酶作用下结合到蛋白质特定氨基酸残基上，是蛋白质的一种重要的翻译后修饰方式，对生物体的生长、发育、生存起着至关重要的作用。糖基化类型主要为n连接和o连接的糖基化，n连接的糖基化占全部糖基化的90％，是最为主要的糖基化修饰类型，n-糖链通过与蛋白质的天冬酰胺的自由基-nh2共价相连，特定的氨基酸序列为asnxser/thr，其中x是除脯氨酸以外的任意氨基酸。n-糖基化的糖链合成起于内质网，完成于高尔基体，其糖链组成富含甘露糖，支链末端富含岩藻糖。o-糖链与蛋白质的丝氨酸或苏氨酸的自由基-oh共价相连，o-糖基化位点没有保守序列，糖链没有固定的核心结构，组成可以是一个单糖，也可以是巨大的多糖。失调的糖基化蛋白会影响ad疾病进程的多个生物途径，包括细胞外基质功能障碍、神经炎症、突触功能障碍、细胞粘附改变、溶酶体功能障碍、内吞运输调节障碍、内质网功能障碍和细胞信号调节障碍等。糖基化尤其是n-糖基化蛋白的功能失调会对疾病的发生发展产生重大的影响，但在ad中相关的研究还较为缺乏。

2、本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供尿液中n-糖基化蛋白组合作为靶标在早期诊断阿尔茨海默病中的应用。

3、本发明的技术方案如下：

4、尿液中n-糖基化蛋白组合作为靶标在制备阿尔茨海默病早期诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述尿液中n-糖基化蛋白组合包括尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1。

5、在本发明的一个优选实施方案中，所述尿液中n-糖基化蛋白组合由尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1组成。

6、一种阿尔茨海默病早期诊断试剂盒，包括能够检测尿液中n-糖基化蛋白组合的试剂，该尿液中n-糖基化蛋白组合包括尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1。

7、在本发明的一个优选实施方案中，所述尿液中n-糖基化蛋白组合由尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1组成。

8、在本发明的一个优选实施方案中，还包括用于富集尿液中的n-糖基化蛋白的富集组件。

9、进一步优选的，所述富集组件为zic-hilic微柱。

10、在本发明的一个优选实施方案中，所述试剂包括lc-ms/ms分析试剂。

11、本发明的有益效果是：本发明中的尿液中n-糖基化蛋白组合应用于阿尔茨海默病早期诊断，具有无创性和准确性的优点，并具有极高的早期诊断特异性和敏感性。

技术特征：

1.尿液中n-糖基化蛋白组合作为靶标在制备阿尔茨海默病早期诊断试剂盒中的应用，其特征在于：所述尿液中n-糖基化蛋白组合包括尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述尿液中n-糖基化蛋白组合由尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1组成。

3.一种阿尔茨海默病早期诊断试剂盒，其特征在于：包括能够检测尿液中n-糖基化蛋白组合的试剂，该尿液中n-糖基化蛋白组合包括尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1。

4.如权利要求3所述的一种阿尔茨海默病早期诊断试剂盒，其特征在于：所述尿液中n-糖基化蛋白组合由尿液中的n-糖基化mpo、n-糖基化elane、n-糖基化fgg和n-糖基化pon1组成。

5.如权利要求3或4所述的一种阿尔茨海默病早期诊断试剂盒，其特征在于：还包括用于富集尿液中的n-糖基化蛋白的富集组件。

6.如权利要求5所述的一种阿尔茨海默病早期诊断试剂盒，其特征在于：所述富集组件为zic-hilic微柱。

7.如权利要求3或4所述的一种阿尔茨海默病早期诊断试剂盒，其特征在于：所述试剂包括lc-ms/ms分析试剂。

技术总结本发明公开了尿液中N‑糖基化蛋白组合作为靶标在早期诊断阿尔茨海默病中的应用。本发明中的尿液中N‑糖基化蛋白组合应用于阿尔茨海默病早期诊断，具有无创性和准确性的优点，并具有极高的早期诊断特异性和敏感性。技术研发人员：冷历歌,张杰,徐恺成,黄上萌受保护的技术使用者：厦门大学技术研发日：技术公布日：2024/7/25