测定5-(2-氟苯基)-1H-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法与流程

本发明属于药物检测的，具体涉及测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法。

背景技术：

1、5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈（5-(2-fluorophenyl)-1h-pyrrole-3-carbonitrile），分子式：c11h7fn2，分子量：189.19。其结构式为：。5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈为类白色至棕色固体粉末，是合成富马酸伏诺拉生的重要医药原料或中间体。

2、目前，5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的主要合成工艺是以2-氟苯乙酮为原料，经过溴化、与丙二腈亲核取代、环化合成5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈，在合成过程中，可能存在与丙二腈亲核取代反应不完全的现象，导致5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中间体中存在丙二腈残留的风险，丙二腈为基因毒性物质，因此，检测其含量变得尤为重要。

3、5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈作为重要的医药中间体，其质量差异对终产品的质量优劣起关键作用，因此质量控制尤其重要，再加上富马酸伏诺拉生的工艺合成路线较短，5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈作为其起始原料的质量控制就更加必不可少。但是对其中的5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的检测方法非常少，目前对5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的检测中主要以液相色谱检测，但是液相色谱检测步骤较为繁杂，并且没有对5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中的丙二腈的检测。

4、其中，cn115902082a公开了一种原料药或其中间体中残留丙二腈的含量检测方法，利用气相色谱-质谱联用法检测，采用agilent 7890b-5977b气相色谱-质谱联用仪，色谱柱：agilent cp9102，vf-624ms，30m×250μm×1.4μm；载气为氦气，流速为1.0ml/min；采用分流进样模式，分流比为5:1；升温程序：起始温度80℃，以5℃/min速率升温至120℃，再以20℃/min速率升温至280℃，保持5min；进样口温度为280℃，采用ei离子源，离子源温度为230℃，单重四级杆温度为150℃，传输线温度为300℃，进样体积为1μl，采用特征离子扫描模式，扫描特征离子为m/z66。虽然可以高效的检测丙二腈，但是必须与质谱仪联用检测，检测方法复杂，条件复杂，难以广泛使用。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，操作简单，精密度高，准确度高，稳定性好，重现性好。

2、本发明所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，包括以下步骤：

3、（1）溶液配制：

4、称取5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈，用乙腈溶解并稀释，作为供试品溶液；

5、称取杂质丙二腈对照品，用乙腈溶解并稀释，作为杂质贮备液；量取上述杂质贮备液，用乙腈稀释，作为杂质对照溶液；

6、称取5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈，量取上述杂质贮备液，溶解，再用乙腈稀释，作为标准溶液；

7、（2）色谱条件包括：

8、色谱柱：以6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷为固定相；

9、载气：氮气；

10、流速：3.8～4.2ml/min，优选为4.0 ml/min；

11、柱温：起始柱温为125～135℃，优选为130℃，维持10min，以100℃/min的速率升温至250℃，维持1min；

12、进样口温度：250℃；

13、检测器温度：250℃；

14、分流比：10:1；

15、（3）测定法：精密量取供试品溶液、杂质对照溶液、标准溶液分别注入气相色谱仪，记录色谱图，杂质对照溶液色谱图中与标准溶液色谱图中保留时间一致的杂质峰，按外标法以峰面积计算。

16、所述的色谱柱为db-624柱，柱长为30m，直径0.53mm，膜厚3.0μm。

17、所述的色谱条件包括：检测器为氢火焰离子化检测器，进样量为1.0μl。

18、所述的供试品溶液中5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的浓度为50mg/ml。

19、所述的杂质对照溶液中丙二腈的浓度为0.05 mg/ml。

20、所述的标准溶液中5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的浓度为50mg/ml，丙二腈的浓度为0.05mg/ml。

21、具体的，所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱分析方法，包括以下步骤：

22、（1）溶液配制：

23、称取5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈，用乙腈溶解并稀释制成每1ml中含50 mg的溶液，作为供试品溶液；

24、称取杂质丙二腈用乙腈溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为杂质贮备液；

25、量取上述杂质贮备液1ml，置10ml量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照溶液；

26、称取5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈0.5g，置10ml量瓶中，量取上述杂质贮备液1ml加入，再用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。

27、（2）色谱条件：

28、色谱柱：以6%氰丙基苯、94%二甲基硅氧烷为固定相；

29、载气：氮气；

30、流速：4.0ml/min；

31、柱温：起始温度为130℃，维持10min，以每100℃/min的速率升温至250℃，维持1min；

32、进样口温度：250℃；

33、检测器温度：250℃；

34、分流比：10:1；

35、进样量：1.0μl；

36、（3）测定法：精密量取供试品溶液、杂质对照溶液、标准溶液1.0μl分别注入气相色谱仪，记录色谱图，杂质对照溶液色谱图中与标准溶液色谱图中保留时间一致的杂质峰，按外标法以峰面积计算，丙二腈不得检出。

37、与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：

38、（1）本发明的气相色谱方法，对于5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的专属性强，准确性及精密度高，稳定性及重现性好。

39、（2）本发明的气相色谱方法，操作简单易行，便于生产过程中对5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的质量控制。

技术特征：

1.一种测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，其特征在于：所述的色谱柱为db-624柱，柱长为30m，直径0.53mm，膜厚3.0μm。

3.根据权利要求1所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，其特征在于：所述的色谱条件包括：检测器为氢火焰离子化检测器，进样量为1.0μl。

4.根据权利要求1所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，其特征在于：所述的供试品溶液中5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的浓度为50mg/ml。

5. 根据权利要求1所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，其特征在于：所述的杂质对照溶液中丙二腈的浓度为0.05 mg/ml。

6.根据权利要求1所述的测定5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，其特征在于：所述的标准溶液中5-(2-氟苯基)-1h-吡咯-3-甲腈的浓度为50mg/ml，丙二腈的浓度为0.05mg/ml。

技术总结本发明属于药物检测的技术领域，具体涉及测定5‑(2‑氟苯基)‑1H‑吡咯‑3‑甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法。本发明所述的测定5‑(2‑氟苯基)‑1H‑吡咯‑3‑甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，包括以下步骤：配制供试品溶液、杂质对照溶液、标准溶液；确定色谱条件，精密量取供试品溶液、杂质对照溶液、标准溶液分别注入气相色谱仪，记录色谱图，杂质对照溶液色谱图中与标准溶液色谱图中保留时间一致的杂质峰，按外标法以峰面积计算。本发明提供的测定5‑(2‑氟苯基)‑1H‑吡咯‑3‑甲腈中基因毒性杂质丙二腈的气相色谱方法，操作简单，精密度高，准确度高，稳定性好，重现性好。技术研发人员：张昱,孔青,郑忠辉,王超学,吴辉受保护的技术使用者：山东新华制药股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/7/25