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药用植物防风低温胁迫下内参基因的应用

  • 国知局
  • 2024-08-05 11:41:02

本发明涉及分子生物学,特别是涉及药用植物防风低温胁迫下内参基因的应用。

背景技术:

1、防风是一种多年生药用植物,属于伞形科saposhnikovia divaricata(turcz.)schischk(sd),广泛分布于中国东北和华北各省,具有显著的药用、营养和经济价值,通常用于治疗风湿、中风、发热、感冒和关节痛,是我国重要的中药资源。低温胁迫是影响植物生长发育的重要环境因素之一,对药用植物的生长和药材质量产生重要影响,在不同环境条件下的生长适应机制和活性成分变化规律对于其药用价值和质量控制具有重要意义。近年来,随着分子生物学、基因组学和代谢组学等技术的发展,研究人员开始利用这些技术手段来深入探究防风在低温条件下的生长适应机制。通过分析防风在低温环境中的基因表达和代谢产物组成,可以揭示防风对低温胁迫的响应机制,为其在不同生长环境下的合理利用提供科学依据。

2、在研究防风在低温环境中的生长适应机制和活性成分变化规律时,选择合适的内参基因对于准确评估目标基因的表达水平至关重要。过去的研究表明,不同内参基因在不同植物物种和处理条件下的表达水平可能存在差异,因此需要筛选和验证适合在特定条件下使用的内参基因。近年来,研究人员已经开始针对防风内参基因进行系统的筛选和验证,以确保实验数据的准确性和可靠性。但截至目前,关于防风在低温胁迫过程中内参基因的研究还未见报道,因此研究防风在低温环境下的生长适应机制和内参基因的开发不仅有助于深入了解植物在不同环境条件下的生长调控机制和活性成分变化规律,也为中药材质量控制、药效评价和临床应用提供科学依据。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供药用植物防风低温胁迫下内参基因的应用,以解决上述现有技术存在的问题,本发明首次提出将18srrna-1和18srrna-2基因作为防风qrt-pcr的内参基因对目标基因的表达水平进行归一化,解决了低温胁迫下防风qrt-pcr没有内参基因的现状,同时为低温胁迫下防风抗性基因的表达研究奠定了重要基础。

2、为实现上述目的,本发明提供了如下方案:

3、本发明提供18srrna-1作为内参基因在如下任一项中的应用:

4、(1)在低温胁迫下防风叶片荧光定量pcr检测中的应用;

5、(2)在筛选或鉴定防风叶片的低温抗性基因中的应用;

6、所述18srrna-1的核苷酸序列如seq id no.1所示。

7、本发明还提供检测18srrna-1的荧光定量pcr引物在如下任一项中的应用:

8、(1)在低温胁迫下防风叶片荧光定量pcr检测中的应用;

9、(2)在筛选或鉴定防风叶片的低温抗性基因中的应用;

10、(3)在制备低温胁迫下防风叶片荧光定量pcr检测试剂或试剂盒中的应用;

11、(4)在制备防风叶片的低温抗性基因的筛选或鉴定产品中的应用;

12、所述荧光定量pcr引物的核苷酸序列如下:

13、正向引物为5’-tactacggtggtgacgggtgac-3’,反向引物为5’-cctgctgccttccttggatgtg-3’。

14、本发明还提供18srrna-2作为内参基因在如下任一项中的应用:

15、(1)在低温胁迫下防风根茎荧光定量pcr检测中的应用;

16、(2)在筛选或鉴定防风根茎的低温抗性基因中的应用;

17、所述18srrna-2的核苷酸序列如seq id no.2所示。

18、本发明还提供检测18srrna-2的荧光定量pcr引物在如下任一项中的应用:

19、(1)在低温胁迫下防风根茎荧光定量pcr检测中的应用;

20、(2)在筛选或鉴定防风根茎的低温抗性基因中的应用;

21、(3)在制备低温胁迫下防风根茎荧光定量pcr检测试剂或试剂盒中的应用;

22、(4)在制备防风根茎的低温抗性基因的筛选或鉴定产品中的应用;

23、所述荧光定量pcr引物的核苷酸序列如下:

24、正向引物为5’-tcgttcgtctgacttgggtataggg-3’,反向引物为5’-gtacttccattggtgccagctatcc-3’。

25、本发明还提供一种辅助分析防风低温胁迫下基因表达水平的产品,所述产品包含所述检测18srrna-1的荧光定量pcr引物和/或所述检测18srrna-2的荧光定量pcr引物。

26、进一步地,利用检测18srrna-1的荧光定量pcr引物辅助分析防风叶片低温胁迫下基因表达水平;利用检测18srrna-2的荧光定量pcr引物辅助分析防风根茎低温胁迫下基因表达水平。

27、进一步地,所述产品包含试剂或试剂盒。

28、本发明还提供一种辅助分析防风低温胁迫下基因表达水平的方法,包括利用所述产品进行辅助分析的步骤。

29、本发明公开了以下技术效果:

30、本发明根据防风在低温胁迫下不同时间段的转录组测序数据筛选出8个候选基因,利用bestkeeper、normfinder、genorm、delta ct及reffinder分析软件对8个候选基因在防风低温胁迫72h时的叶、茎和根等不同组织中的表达稳定性进行分析。结果表明,低温胁迫下防风叶片中最适内参基因为18srrna-1,茎和根中最适内参基因为18srrna-2。本发明首次提出将18srrna-1和18srrna-2基因作为防风qrt-pcr的内参基因对目标基因的表达水平进行归一化,解决了低温胁迫下防风qrt-pcr没有内参基因的现状。

31、本发明提供了18srrna-1和18srrna-2基因作为内参基因在qrt-pcr检测防风叶、茎和根中基因转录表达水平中的应用,能够用于研究防风在抵御低温胁迫过程中关键抗性基因的表达情况,提高了检测结果的可信度以及基因表达分析研究的稳定性、可靠性和重复性。可见,本发明为低温胁迫下防风抗性基因的表达研究奠定了重要基础。

技术特征:

1.18srrna-1作为内参基因在如下任一项中的应用:

2.检测18srrna-1的荧光定量pcr引物在如下任一项中的应用:

3.18srrna-2作为内参基因在如下任一项中的应用:

4.检测18srrna-2的荧光定量pcr引物在如下任一项中的应用:

5.一种辅助分析防风低温胁迫下基因表达水平的产品,其特征在于,所述产品包含权利要求2所述检测18srrna-1的荧光定量pcr引物和/或权利要求4所述检测18srrna-2的荧光定量pcr引物。

6.根据权利要求5所述的产品,其特征在于,利用检测18srrna-1的荧光定量pcr引物辅助分析防风叶片低温胁迫下基因表达水平;利用检测18srrna-2的荧光定量pcr引物辅助分析防风根茎低温胁迫下基因表达水平。

7.根据权利要求5所述的产品,其特征在于,所述产品包含试剂或试剂盒。

8.一种辅助分析防风低温胁迫下基因表达水平的方法,其特征在于,包括利用权利要求5所述产品进行辅助分析的步骤。

技术总结本发明公开了药用植物防风低温胁迫下内参基因的应用,属于分子生物学技术领域,本发明公开了18SrRNA‑1或18SrRNA‑2作为内参基因在低温胁迫下防风叶片或根茎荧光定量PCR检测中的应用、在筛选或鉴定防风叶片或根茎的低温抗性基因中的应用。本发明通过试验发现低温胁迫下防风叶片中最适内参基因为18SrRNA‑1,茎和根中最适内参基因为18SrRNA‑2,将18SrRNA‑1和18SrRNA‑2基因作为防风qRT‑PCR的内参基因对目标基因的表达水平进行归一化,解决了低温胁迫下防风qRT‑PCR没有内参基因的现状,并为低温胁迫下防风抗性基因的表达研究奠定了重要基础。技术研发人员:李慧,姜明,潘越受保护的技术使用者:齐齐哈尔医学院技术研发日:技术公布日:2024/8/1

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