一种改善便秘的复合益生菌及其应用的制作方法

本发明属于益生菌，涉及一种改善便秘的复合益生菌及其应用。

背景技术：

1、便秘是一种常见的健康问题，可以由多种因素引起，包括饮食不当、生活压力、药物副作用等。便秘问题会给人们带来不适和痛苦，严重影响人们的生活质量，还可能引发其他健康问题，如痔疮、肠道疾病等。便秘通常是由于肠道蠕动缓慢或者水分不足导致的，表现为排便持续困难、频率低、大便干燥或排便不全，频繁或慢性便秘可能诱发代谢紊乱和其他相关疾病，如缺血性中风、肠易激综合征和冠心病，在老年患者中风险更高。

2、益生菌是活的微生物，当给予足够的量时，对宿主的健康有益。益生菌可以通过多种作用机制缓解便秘，包括调节肠道菌群和发酵，调节神经系统和免疫系统。便秘往往会导致肠道内的微生态失衡，使得有害菌的数量增加，益生菌的数量减少。而益生菌具有维护肠道菌群平衡、促进肠道蠕动以及改善便秘的作用。并且，益生菌在人体结肠内还能够消化可溶性膳食纤维，从而产生短链脂肪酸，进一步促进肠道蠕动，有助于解决便秘问题。因此，通过服用益生菌，有助于恢复肠道中益生菌的优势地位，使得以上两个作用机制得以有效发挥。

3、益生菌还可以改善由便秘引发的胀气、腹泻、食欲不振、肠道消化不良等一系列问题。研究表明，便秘患者与非便秘患者的肠道菌群组成存在显著差异。粪便微生物的组成已被证明与结肠通气时间相关，而结肠粘膜微生物的组成与便秘症状具有直接关系。试验证明，通过补充益生菌后，肠道微生物群落发生了显著变化。表明益生菌的使用可能会对某些微生物群落成分产生影响。因此，开发一种可以有效预防、缓解或治疗便秘的益生菌产品至关重要。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种改善便秘的复合益生菌及其应用。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种改善便秘的复合益生菌，所述改善便秘的复合益生菌由保藏编号为cgmcc no.24029的动物双歧杆菌乳亚种 bifidobacterium animalis subsp.  lactis bla36菌株、保藏编号为cgmcc no.24377的鼠李糖乳杆菌 lactobacillus  rhamnosus lra05菌株、保藏编号为cgmcc no.19487的凝结芽孢杆菌 bacillus coagulansbc99菌株和保藏编号为cgmcc no.16923的两歧双歧杆菌 bifidobacterium bifidum bbi32菌株组成。

4、本发明开发了一种全新的益生菌复配方式和一种全新的改善便秘的策略，即将动物双歧杆菌乳亚种 bifidobacterium animalis subsp. lactis bla36菌株、鼠李糖乳杆菌 lactobacillus rhamnosus lra05菌株、凝结芽孢杆菌 bacillus coagulans bc99菌株和两歧双歧杆菌 bifidobacterium bifidum bbi32菌株进行复配，发现四种菌株之间存在潜在的相互作用，能够相互配合，协同增效，在使用菌量一致的情况下，与缺失任一种菌的菌种干预方式相比，四种菌的复配在提高肠道蠕动、缓解便秘症状的效果上显著提高，具体表现在：（1）显著提高胃动素、p物质和血管活性肠肽等胃肠道肽的水平；（2）显著提高肠推进率；（3）显著提高胃肠道中的短链脂肪酸含量水平。因此，将该复合益生菌用于制备预防、缓解或治疗便秘的药物具有很好的前景。同时，四种菌均为益生菌，因此其在用于制备相关功效产品时，安全性高，且不易产生依赖性。

5、所述复合益生菌的制备方法采用本领域常规的技术方法即可，示例性地可以为：将四种菌株活化后，分别接种于培养基中进行培养，得到培养液；培养液离心，菌体重悬得到菌悬液；按照活菌数比例要求将四种菌悬液混合，即可。或者进一步地加入保护剂进行冷冻干燥，制得冻干菌粉产品。

6、优选地，所述培养基包括mrs培养基。

7、优选地，所述mrs培养基以浓度计包括：蛋白胨8-12 g/l、牛肉膏8-12 g/l、葡萄糖15-25 g/l、乙酸钠1-3 g/l、酵母粉3-7 g/l、柠檬酸氢二铵1-3 g/l、k2po4·3h2o 2-3 g/l、mgso4·7h2o 0.05-0.2 g/l、mnso4 0.01-0.1 g/l、吐温80 0.5-2 ml/l、半胱氨酸盐酸盐0.1-1 g/l。

8、优选地，所述bla36菌株、lra05菌株、bc99菌株和bbi32菌株的活菌数之比为(1-10):(1-10):(1-10):(1-10)；

9、其中，上述“1-10”例如可以是1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

10、基于四种菌株之间的潜在相互作用关系，本发明还发现当四种菌株以上述特定的活菌数配比进行复配使用时，在提高肠道蠕动、缓解便秘症状的功效上更加显著。

11、第二方面，本发明提供一种改善便秘的益生菌剂，所述益生菌剂中的菌株包括第一方面所述的复合益生菌。

12、优选地，所述bla36菌株、lra05菌株、bc99菌株和bbi32菌株在所述益生菌剂中的活菌含量均不低于1×108 cfu/ml或1×108 cfu/g，例如1×108 cfu/ml（cfu/g）、2×108cfu/ml（cfu/g）、5×108 cfu/ml（cfu/g）、8×108 cfu/ml（cfu/g）、1×109 cfu/ml（cfu/g）、5×109 cfu/ml（cfu/g）、1×1010 cfu/ml（cfu/g）等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

13、优选地，所述益生菌剂的剂型包括冻干粉剂、胶囊剂、片剂或颗粒剂。

14、优选地，所述益生菌剂还包括冻干保护剂和/或辅助添加剂。

15、优选地，所述冻干保护剂包括脱脂乳、蔗糖、乳糖、海藻糖、右旋糖酐、明胶、糊精、阿拉伯胶、藻胶钠、聚乙烯吡咯烷酮、山梨醇或木糖醇中的任意一种或至少两种的组合。

16、优选地，所述辅助添加剂包括低聚果糖、低聚木糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖、大豆低聚糖、云芝多糖、聚葡萄糖、α-乳清蛋白或乳铁蛋白中的任意一种或至少两种的组合。

17、第三方面，本发明提供根据第一方面所述的复合益生菌或第二方面所述的益生菌剂在制备预防、缓解或治疗便秘的药物中的应用。

18、第四方面，本发明提供根据第一方面所述的复合益生菌或第二方面所述的益生菌剂在制备提高胃肠道肽水平的药物中的应用。

19、第五方面，本发明提供根据第一方面所述的复合益生菌或第二方面所述的益生菌剂在制备提高胃肠道中短链脂肪酸含量水平的药物中的应用。

20、优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。

21、优选地，所述辅料包括填充剂、ph调节剂、抗氧剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。

22、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

23、本发明开发了一种全新的益生菌复配方式和一种全新的改善便秘的策略，即将动物双歧杆菌乳亚种 bifidobacterium animalis subsp. lactis bla36菌株、鼠李糖乳杆菌 lactobacillus rhamnosus lra05菌株、凝结芽孢杆菌 bacillus coagulans bc99菌株和两歧双歧杆菌 bifidobacterium bifidum bbi32菌株进行复配，发现四种菌株之间存在潜在的相互作用，能够相互配合，协同增效，在使用菌量一致的情况下，与缺失任一种菌的菌种干预方式相比，四种菌的复配在提高肠道蠕动、缓解便秘症状的效果上显著提高，具体表现在：（1）显著提高胃动素、p物质和血管活性肠肽等胃肠道肽的水平；（2）显著提高肠推进率；（3）显著提高胃肠道中的短链脂肪酸含量水平。因此，将该复合益生菌用于制备预防、缓解或治疗便秘的药物具有很好的前景。同时，四种菌均为益生菌，因此其在用于制备相关功效产品时，安全性高，且不易产生依赖性。

24、本发明所涉及的动物双歧杆菌乳亚种bla36菌株的分类命名为动物双歧杆菌乳亚种 bifidobacterium animalis subsp. lactis，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2021年12月02日，保藏编号为cgmcc no.24029，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

25、本发明所涉及的鼠李糖乳杆菌lra05菌株的分类命名为鼠李糖乳杆菌 lactobacillus rhamnosus，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2022年01月24日，保藏编号为cgmcc no.24377，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

26、本发明所涉及的凝结芽孢杆菌bc99菌株的分类命名为凝结芽孢杆菌 bacillus  coagulans，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年03月18日，保藏编号为cgmcc no.19487，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

27、本发明所涉及的两歧双歧杆菌bbi32菌株的分类命名为两歧双歧杆菌 bifidobacterium bifidum，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年12月10日，保藏编号为cgmcc no.16923，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。