一种枸杞多糖抗植物病毒剂及其制备方法和应用

本发明涉及植物源农药，尤其是一种枸杞多糖抗植物病毒剂及其制备方法和应用。

背景技术：

1、植物病毒病，也被称为“植物癌症”，是仅次于真菌病害的第二大植物病害。由于病毒寄生在植物体内，吸取寄主的营养物质和能量生长繁殖，所以寄主作物一旦被侵染，很难在不损害自身的情况下将病毒完全杀死。病毒感染会引起作物叶片黄化、畸形、缩小，这些症状会严重影响光合作用和营养吸收，进而导致作物减产，甚至绝产。植物病毒病在全世界范围内造成的损失高达每年600亿美元。就番茄褐色皱纹果病毒(tobrfv)而言，已累计造成数十亿美元的重大经济损失。

2、目前植物病毒病的应对策略以预防性措施为主，包括抗病品种筛选，控制传毒媒介，改善栽培环境，转基因育种等技术。植物体内具有多样性的次生代谢物，对多种植物有害生物具有抵抗效果，如已经商品化的苦参碱、印楝素等制剂对小菜蛾、蚜虫等虫害，对白粉病、锈病等病害，对细菌、病毒和螨类等有害生物都具有良好的防效。中草药对人体有害生物的活性同样来源于其次生代谢物，可见，植物源天然产物防治有害生物具有悠久的理论基础。因此，筛选抗植物病毒的天然产物，尤其是来源于中药的天然产物，可为抗植物病毒剂的发掘及开发提供研究方向。

3、枸杞(lyciumbarbarum l.)属于茄科枸杞属，是一种落叶灌木。枸杞主要分布在中国宁夏、甘肃、青海、新疆等地，其中以宁夏的枸杞品质最为优良，被誉为“枸杞之乡”。其花、叶、果实、根皮都可入药，药用历史悠久。《神农本草经》记载：枸杞久服能坚筋骨、耐寒暑，轻身不老，乃药中上品。《本草纲目》记载：枸杞子甘平而润，性滋补能补肾、润肺、生精、益气，乃平补之药。枸杞子还是国家卫健委最早收录的药食同源植物之一，也被收录于2020版《中华人民共和国药典》。

4、枸杞多糖(l.barbarumpolysaccharides，lbps)作为枸杞果实的主要活性成分，约占干果的5％-8％，药用价值高，具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤等多种作用。枸杞多糖由多个单糖分子通过糖苷键连接而成，是一种高度支化且与蛋白质络合的水溶性复合酸性多糖，分子量在10-6500kda之间，主要由葡萄糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖等以不同比例组成。研究表明，枸杞多糖可以增强机体的免疫功能，对保护肝脏、肾脏、心脏等器官具有保护作用，对肿瘤细胞有一定的抑制作用，对糖尿病、高血脂等慢性疾病也有一定的预防和治疗作用。枸杞多糖是一种具有多样性生物活性的多糖类物质，具有广阔的应用前景。

5、多糖是一种重要的植物免疫诱抗剂。寡糖类植物免疫诱导剂在我国已有多年的研究与产业化基础，如壳寡糖、海藻糖、香菇多糖、氨基寡糖素等，它们通过激发植物的免疫反应。增强防御能力，促进健壮生长，实现作物抗病、减害、增产。这些诱抗剂已经广泛应用到马铃薯、番茄、大豆、黄瓜和辣椒等多种作物上，防治病毒病以及其他病虫害，并取得良好防效。多糖类诱抗剂具有安全、绿色、高效等特性，被誉为“植物疫苗”。枸杞多糖的糖类结构与其免疫调控的药用价值，使其有作为免疫诱导子防治植物病毒病的潜力。目前，枸杞多糖在抗植物病毒病方面的研究未见相关报道。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：克服现有技术中之不足，提供一种枸杞多糖抗植物病毒剂及其制备方法和应用。本发明的枸杞多糖抗植物病毒剂为天然产物抗植物病毒剂，针对植物病毒病具有抗病毒效果好、无残留毒害、安全性高、价格低廉等优点。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

3、一种枸杞多糖抗植物病毒剂，所述枸杞多糖抗植物病毒剂以枸杞多糖提取物为主成分并加入助剂加工而成，制剂形态是水剂、水分散粒剂及微乳剂；其中：

4、所述水剂由以下原料按重量百分比配制：

5、枸杞多糖提取物10～60％，有机溶剂0～20％，表面活性剂5～30％，防冻剂4～10％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％；

6、所述水分散粒剂由以下原料按重量百分比配制：

7、枸杞多糖提取物10～60％，填料10～30％，分散剂4～10％，表面活性剂5～30％，防冻剂4～10％，原料的重量百分比之和为100％；

8、所述微乳剂由以下原料按重量百分比配制：

9、枸杞多糖提取物10～60％，有机溶剂0～20％，乳化剂5～30％，防冻剂4～10％，余量为水，原料的重量百分比之和为100％。

10、进一步地，所述有机溶剂为乙酸乙酯、油酸甲酯、乙醇、甲醇、丙酮、n,n-二甲基甲酰胺中的一种或几种的混合物；

11、所述表面活性剂为烷基苯磺酸盐类、烷基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚类、烷基糖苷类、蓖麻油与环氧乙烷的加成物、芳烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物中一种或几种的混合物；

12、所述防冻剂为乙二醇或丙三醇；

13、所述填料为硫酸钠、硫酸铵、高岭土、白炭土、陶土、轻质碳酸钙中的一种或几种的混合物；

14、所述分散剂为烷基磺酸盐、烷基酚或脂肪醇环氧乙烷加成物磺酸盐、烷基酚或脂肪醇环氧乙烷加成物的磷酸酯中的一种或几种的混合物；

15、所述乳化剂为烷基苯磺酸盐类、烷基酚聚氧乙烯醚类、多苯乙烯苯酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚类、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚类、烷基糖苷类、斯潘系列、吐温、农用阴离子-磷酸酯中的一种或几种的混合物。

16、一种如上述的枸杞多糖抗植物病毒剂的制备方法，所述水剂的制备方法具体包括如下步骤：

17、步骤s1、将枸杞干果10kg用粉碎机粉碎至1～5mm的粗粉碎物，按料液比2～5ml/g加入石油醚，在75℃恒温水浴锅中进行第一次脱脂处理1次，时间2h；第一次脱脂后滤掉石油醚，按照料液比2～5ml/g加入乙酸乙酯溶液，在80℃恒温水浴锅中进行第二次脱脂处理1次，时间1h，脱脂后滤掉废液，滤渣水浴烘干后获得脱脂后的枸杞样品；

18、步骤s2、将步骤s1所得的脱脂后的枸杞样品用溶剂按料液比1：10(w/v)浸提，于室温下提取6～12h，将提取混合物过滤，收集滤液，滤液浓缩至体积为200～500ml，制得枸杞多糖提取物浸膏，即为枸杞多糖提取物；

19、步骤s3、将步骤s2所得的枸杞多糖提取物、有机溶剂、表面活性剂、防冻溶剂和水于混配釜中混合搅拌，搅拌均匀后即得枸杞多糖抗植物病毒水剂。

20、进一步地，所述步骤s3中混配釜温度为35～60℃，搅拌时间为30min。

21、一种如上述的枸杞多糖抗植物病毒剂的制备方法，所述水分散粒剂的制备方法具体包括如下步骤：

22、步骤s1’、将枸杞干果10kg用粉碎机粉碎至1～5mm的粗粉碎物，按料液比2～5ml/g加入石油醚，在75℃恒温水浴锅中进行第一次脱脂处理1次，时间2h；第一次脱脂后滤掉石油醚，按照料液比2～5ml/g加入乙酸乙酯溶液，在80℃恒温水浴锅中进行第二次脱脂处理1次，时间1h，脱脂后滤掉废液，滤渣水浴烘干后获得脱脂后的枸杞样品；

23、步骤s2’、将步骤s1’所得的脱脂后的枸杞样品用溶剂按料液比1：10(w/v)浸提，于室温下提取6～12h，后将提取混合物过滤，收集滤液，滤液浓缩至体积为200～500ml左右，制得枸杞多糖提取物浸膏，即为枸杞多糖提取物；

24、步骤s3’、将步骤s2’所得的枸杞多糖提取物、填料、分散剂和表面活性剂于混配釜中混合，加水搅拌均匀后造粒，用烘干机50～70℃烘干之后过筛，即得粒径大小为2～4mm的颗粒即为枸杞多糖植物源抗病毒水分散粒剂。

25、进一步地，所述步骤s3’中混配釜温度为35～60℃，搅拌时间为30min。

26、一种如上述的枸杞多糖抗植物病毒剂的制备方法，所述微乳剂的制备方法具体包括如下步骤：

27、步骤s1”、将枸杞干果10kg用粉碎机粉碎至1-5mm的粗粉碎物，按料液比2～5ml/g加入石油醚，在75℃恒温水浴锅中进行第一次脱脂处理1次，时间2h；第一次脱脂后滤掉石油醚，按照料液比2～5ml/g加入乙酸乙酯溶液，在80℃恒温水浴锅中进行第二次脱脂处理1次，时间2h，脱脂后滤掉废液，滤渣水浴烘干后获得脱脂后的枸杞样品；

28、步骤s2”、将步骤s1”所得的脱脂后的枸杞样品用溶剂按料液比1：10(w/v)浸提，于室温下提取6～12h，后将提取混合物过滤，收集滤液，滤液浓缩至体积为200～500ml左右，制得枸杞多糖提取物浸膏，即为枸杞多糖提取物；

29、步骤s3”、将步骤s2”所得的枸杞多糖提取物、有机溶剂、乳化剂、防冻剂和水于混配釜中混合搅拌，搅拌均匀后即得枸杞多糖抗植物病毒微乳剂。

30、进一步地，所述步骤s3”中混配釜温度为35～60℃，搅拌时间为30min。

31、一种如上述的枸杞多糖抗植物病毒剂的应用，所述枸杞多糖抗植物病毒剂应用于防治植物病毒病。

32、进一步地，所述植物病毒病具体为番茄褐色皱纹果病毒、番茄花叶病毒、番茄斑驳花叶病毒和烟草花叶病毒。

33、本发明的有益效果为：本发明设计合理，制备方法简单，具有以下优点：

34、(1)、本发明的枸杞多糖抗植物病毒剂抗植物病毒剂活性显著，可用于防治番茄、烟草、辣椒等作物上防治番茄褐色皱纹果病毒(tobrfv)、番茄花叶病毒(tomv)、番茄斑驳花叶病毒(tommv))、烟草花叶病毒病(tmv)等多种植物病毒病；

35、(2)、本发明的枸杞多糖抗植物病毒剂对非靶标生物安全，对环境友好；

36、(3)、本发明的枸杞多糖抗植物病毒剂作为生物源农药，抗药性风险低，残留风险低；

37、(4)、本发明的制备方法，制备工艺简单，适宜推广使用。