对SARS-CoV-2RBD具有特异性的单克隆抗体的制作方法

背景技术：

1、冠状病毒(cov)是大型、有包膜、正义的单链rna病毒，并且基于其血清学和基因型特征，它们可以进一步细分为alpha、beta、gamma和delta冠状病毒。两种beta冠状病毒sars-cov-1(严重急性呼吸综合征冠状病毒)和mers-cov(中东呼吸综合征冠状病毒)在过去十年中引起了两次严重的冠状病毒流行(sars2002/2003,mers2012)。自2019年12月31日至2021年7月5日，全球范围已报告184,677,763例报告病例，其中3,995,429例确认死亡，221个国家或地区受到影响(来源：世界卫生组织-https://www.who.int/emergencies/diseases/novel-coronavirus-2019)。covid-19是由一种新型冠状病毒，即严重急性呼吸综合征冠状病毒2(sars-cov-2)引起的。sars-cov-2通过结合宿主细胞受体ace2(血管紧张素转化酶2，一种广泛存在于下呼吸道中的受体)感染呼吸道。sars-cov-2的表面刺突(s)糖蛋白介导了与ace2受体的这种相互作用，驱动膜融合并因此进入宿主细胞。刺突蛋白(s)是一种三聚体蛋白，并且是疫苗和病毒进入的抑制剂的主要靶标(walls等人，2020)。

2、covid-19的常见症状包括发烧、咳嗽、疲劳、呼吸急促或呼吸困难。这些症状相对非特异性，并且可以在多种其他疾病中看到。虽然大多数covid-19患者症状轻微，但有些患者会发展成肺炎、急性呼吸窘迫综合征、败血性休克和肾衰竭。

3、covid-19的负担远远超出了接触性传染病的负担，并有可能使医疗保健系统不堪重负。确定疾病负担高的地方对于确保谨慎有效地分配紧急医疗和公共卫生资源至关重要。与covid-19相关的严重结果的风险似乎随着年龄、虚弱和血管合并症的增加而增加。这种情况被认为会增加住院率、重症监护室入住率和再入住率。由于sars-cov-2是一种新型病毒，因此缺乏从诊断到治疗和疫苗接种的患者管理经验。

4、测试sars-cov-2感染的标准方法是对患者的鼻咽和口咽拭子样品进行实时逆转录酶聚合酶链式反应(实时rt-pcr)。然而，分子测试相当缓慢且昂贵，并且无法提供应对covid-19大流行所需的规模测试。对基于pcr的sars-cov-2测试的需求很高，但随着大流行的继续，供应仍然存在问题。

5、抗体测试，如抗核衣壳或抗刺突免疫测定，在实验室环境中进行pcr测试，以评估患者的免疫力。抗原测试缩小了分子测试(pcr)和免疫测试(抗体测试)之间的差距。

6、快速抗原测试是在护理点环境开发的，旨在应对测试的高需求并允许尽早测出sars-cov-2感染。然而，市场上没有针对中心实验室环境的允许进行高通量测试以提高全球范围内的sars-cov-2测试能力的抗原测试。鉴于持续的大流行和感染患者的增加以及因此对测试的需求，对在集中实验室环境中进行具有成本效益和高通量的抗原测试的需求很高。这种全自动系统可以在18分钟内提供单次测试的测试结果(不包括样品收集、运输和准备的时间)，单个分析仪的通量最多每小时300次测试，具体取决于分析仪。基于实验室的自动化抗原测定由于消除了手动操作以及快速周转时间和高测试通量，从而允许降低成本和减少错误。

技术实现思路

1、在第一方面，本发明涉及结合至sars-cov-2病毒的刺突蛋白的受体结合结构域(rbd)的(分离的)单克隆抗体或其抗原结合片段，

2、a)缔合速率常数(ka)大于2.5e+06m-1s-1，如由表面等离子体共振所确定的，

3、且/或

4、b)解离速率常数(kd)小于5.0e-03s-1，如由表面等离子体共振所确定的，

5、且/或

6、c)半衰期t/2diss为4分钟或更长，如由表面等离子体共振所确定的，

7、且/或

8、d)化学计量比为1:1或1:2。

9、在本发明的第一方面的优选实施方案中，抗体是中和性的。

10、在本发明的第一方面的优选实施方案中，抗体是抑制性的。

11、在第二方面，本发明涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其

12、a)包含分别地根据seq id no:1、2、3、4、5和6的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，

13、b)与包含分别地根据seq id no:1、2、3、4、5和6的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体结合至相同的表位，

14、或者

15、c)与包含分别地根据seq id no:1、2、3、4.0、5和6的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体竞争结合至sars-cov-2病毒的刺突蛋白的rbd。

16、在第三方面，本发明涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其

17、a)包含分别地根据seq id no:17、18、19、20、21和22的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，

18、b)与包含分别地根据seq id no:17、18、19、20、21和22的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体结合至相同的表位，

19、或者

20、c)其与包含分别地根据seq id no:17、18、19、20、21和22的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体竞争结合至sars-cov-2病毒的刺突蛋白的rbd。

21、在第四方面，本发明涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其

22、a)包含分别地根据seq id no:33、34、35、36、37和38的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，

23、b)与包含分别地根据seq id no:33、34、35、36、37和38的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体结合至相同的表位，

24、或者

25、c)其与包含分别地根据seq id no:33、34、35、36、37和38的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体竞争结合至sars-cov-2病毒的刺突蛋白的rbd。

26、在第五方面，本发明涉及分离的抗体或其抗原结合片段，其：

27、a)包含分别地根据seq id no:49、50、51、52、53和54的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3，

28、b)与包含分别地根据seq id no:49、50、51、52、53和54的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体结合至相同的表位，

29、或者

30、c)其与包含分别地根据seq id no:49、50、51、52、53和54的cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3、cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的抗体竞争结合至sars-cov-2病毒的刺突蛋白的rbd。

31、在优选的实施方案中，根据本发明的第二、第三、第四和第五方面的抗体是中和性抗体。

32、在优选的实施方案中，根据本发明的第二、第三、第四和第五方面的抗体是抑制性抗体。

33、在第六方面，本发明涉及试剂盒，其包含至少一种抗体和任选地第二抗体和任选地第三抗体，所述至少一种抗体选自如上文针对本发明的第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面所述的抗体的组，所述第二抗体选自如上文针对本发明的第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面所述的抗体的组，所述第三抗体选自如上文针对本发明第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面所述的抗体的组。

34、在第七方面，本发明涉及编码抗体的核酸，该抗体选自如上文针对本发明的第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面所述的抗体的组。

35、在第八方面，本发明涉及宿主细胞，该宿主细胞包含如上文针对本发明的第七方面所述的核酸，和/或产生如上文针对本发明的第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面所述的抗体。

36、在第九方面，本发明涉及包含至少一种抗体的组合物，该抗体选自如上文针对本发明的第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面所述的抗体的组。

37、在第九方面，本发明涉及本发明的第一方面、第二方面、第三方面、第四方面或第五方面的抗体或本发明的第六方面的试剂盒或本发明的第九方面的组合物用于体外免疫测定的用途。

38、在第十一方面，本发明涉及一种用于检测从患者获得的样品中sars-cov-2病毒的存在情况的体外方法。

39、下面将更详细地描述根据本发明的实施方案。