一种人参五味子汤物质基准的质量检测方法与流程

本发明属于中药复方制剂质量检测，具体涉及一种人参五味子汤物质基准的质量检测方法。

背景技术：

1、人参五味子汤原方出自清代名医陈复正的名著《幼幼集成》，全方由人参、漂白术、白云苓、五味子、麦冬和炙甘草组成，内含四君子汤、生脉散二方，具有益气健脾、理气化痰、固卫养肺之效，主治“久嗽脾虚、中气怯弱、面白唇白”及“咳而久不止”等病症。方中人参大补元气“主补五藏”，以复气虚之本；配茯苓、漂白术、炙甘草补中健脾，淡湿助运，补中宫土气；配五味子收敛肺气，以固气泄之标；辅以麦冬甘寒清润以清肺气。综观该方以四君子补脾，生脉散保肺，蕴含培土生金之妙。据现代药理学研究证实，它不仅可以增强单核吞噬细胞的吞噬功能，诱生干扰素，增强机体免疫功能，并有止咳、平喘、祛痰等对症治疗作用，具有较好的临床应用价值。然而，该处方由多味药材组成，经煎煮后成分复杂，其药效不仅仅是单一成分发挥作用，无法有效对其质量进行检测。因此，建立一种能够快速、简便检测药物制剂中多味药材的检测方法，对完善人参五味子汤物质基准的质量标准至关重要。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种人参五味子汤物质基准的质量检测方法。

2、为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

3、本发明公开了一种人参五味子汤物质基准的质量检测方法，包括以下步骤：

4、1)称取人参五味子汤物质基准和对应的各味药材粉末，分别制备各药材的供试品溶液及对应的对照药材溶液，并分别进行薄层鉴别；

5、2)构建人参五味子汤物质基准的指纹图谱；

6、3)称取人参五味子汤物质基准分别制备人参供试品溶液和五味子供试品溶液，同时制备人参皂苷rb1、人参皂苷re和人参皂苷rg1的混合对照品溶液，以及五味子醇甲的单一对照品溶液，进行测定含量，确保人参五味子汤物质基准及颗粒剂中指标成分的含量符合要求。

7、优选地，步骤1)中，人参五味子汤物质基准的制备方法为：依次称取人参、漂白术、白云苓、五味子、麦冬和炙甘草，粉碎，过10目筛，加生姜、大枣和水浸泡90min，煮沸，弃去药渣，冷冻干燥，得到人参五味子汤物质基准。

8、优选地，水的添加量为药材重量的8倍。

9、优选地，煎煮次数为1次。

10、优选地，步骤1)中，各味药材分别为人参、漂白术、白云苓、五味子、麦冬和炙甘草；人参供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤物质基准中加三氯甲烷，加热回流，过滤，加入水饱和正丁醇溶液混匀，取上清液并添加3倍量的氨试液，摇匀后静置，取上层液体旋干，加甲醇溶解，得到人参供试品溶液；漂白术供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤物质基准中加入正己烷混匀，得到漂白术供试品溶液；白云苓供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤物质基准中加入石油醚混匀，滤过，滤液蒸干，加甲醇溶解，得到白云苓供试品溶液；五味子供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤物质基准中加入三氯甲烷，加热回流，滤过，加三氯甲烷溶解，得到五味子供试品溶液；麦冬供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤物质基准中加入三氯甲烷-甲醇混合溶液混匀，放冷，滤过，加三氯甲烷溶解，得到麦冬供试品溶液；炙甘草供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤物质基准中加入石油醚，加热回流，滤过，弃去石油醚液，加甲醇再加热回流，滤过，蒸干，加水溶解，正丁醇提取，加甲醇溶解，得到炙甘草供试品溶液。

11、优选地，步骤1)中，薄层鉴别过程中，吸取人参供试品溶液和对照品溶液点样，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水下层溶液作为展开剂，于紫外光灯365nm下检视；吸取漂白术供试品溶液和对照品溶液点样，以石油醚-乙酸乙酯作为展开剂，于日光下检视；吸取白云苓供试品溶液和对照品溶液点样，以甲苯-乙酸乙酯-冰乙酸作为展开剂，于日光下检视；吸取五味子供试品溶液和对照品溶液点样，以石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，于紫外光灯254nm下检视；吸取麦冬供试品溶液和对照品溶液点样，以甲苯-甲醇-冰醋酸上层溶液为展开剂，于紫外光灯254nm下检视；吸取炙甘草供试品溶液和对照品溶液点样，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水作为展开剂，于紫外光灯365nm下检视。

12、优选地，步骤2)中，供试品溶液的制备方法为：在人参五味子汤的物质基准中加入纯甲醇进行提取，超声，过滤，得到供试品溶液。

13、优选地，步骤3)中，人参供试品溶液的制备方法为：取人参五味子汤物质基准1g，加纯甲醇至25ml，超声，0.45μm微孔滤膜过滤得到；五味子供试品溶液的制备方法为：取人参五味子汤物质基准0.1250g，加纯甲醇至10ml，超声，0.45μm微孔滤膜过滤得到。

14、优选地，步骤3)中，对照品溶液的制备方法为：称定人参皂苷rb1、人参皂苷re和人参皂苷rg1对照品，加甲醇制成质量浓度为0.2mg/ml的混合对照品溶液；称定五味子醇甲对照品，加甲醇制成质量浓度为0.3mg/ml的单一对照品溶液。

15、优选地，步骤3)中，色谱条件为：人参皂苷rb1、人参皂苷re、人参皂苷rg1含量测定色谱条件为：色谱柱为hypersil c18 ods，4.6×250mm×5μm；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液；梯度洗脱：0～5min，3％乙腈；5～10min，3％～10％乙腈；10～20min，10％～20％乙腈；20～40min，20％～35％乙腈；40～45min，35％～50％乙腈；45～70min，50％～77％乙腈；70～90min，77％～90％乙腈；检测波长：203nm；体积流量：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃；五味子醇甲含量测定色谱条件为：色谱柱为hypersil c18 ods，4.6×250mm×5μm；流动相：乙腈-0.1％磷酸水溶液；梯度洗脱：0～30min，45％～50％乙腈；30～35min，50％～66％乙腈；35～45min，66％～68％乙腈；45～50min，68％～90％乙腈；50～53min，90％～95％乙腈；检测波长：220nm；体积流量：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃。

16、优选地，步骤3)中，人参五味子汤物质基准中指标成分人参皂苷rb1、人参皂苷re和人参皂苷rg1的总含量不得少于0.606％，指标成分五味子醇甲的含量不得少于0.662％；人参五味子汤颗粒剂中人参皂苷rb1、人参皂苷re和人参皂苷rg1的总含量不得少于0.245％，五味子醇甲的含量定为不得少于0.238％。

17、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

18、本发明提供的一种人参五味子汤物质基准的质量检测方法，通过薄层色谱鉴别方法能够有效地对人参五味子汤物质基准完成定性检查，通过高效液相色谱含量测定方法能够对人参五味子汤物质基准完成定量检查，所建立的质量标准能够对人参五味子汤物质基准的品质进行全面系统控制。整个检测方法简单直观，准确度高，重复性好，为人参五味子汤物质基准的质量检查提供了一种便捷实用的途径，能够建立人参五味子汤物质基准的质量标准，保障产品质量稳定性，提高生产效率，促进经典名方的传承与发展；能够为人参五味子汤的生产和质量检测提供了可靠的依据，也有助于确立其规范化生产流程，提高药物的一致性和稳定性，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。

19、进一步地，通过控制人参五味子汤物质基准的制备工艺，能够保证人参五味子汤物质基准稳定的出膏率。

20、进一步地，薄层鉴别过程中，针对各味药材选择特定的展开剂，能够保证有效分离；针对各味药材选择特定的检测方法，能够保证清晰呈现检测结果。

21、进一步地，构建指纹图谱时，采用甲醇提取法和超声提取法制备供试品溶液，甲醇提取法所得结果中，峰的数量多、含量高，能全面覆盖多种类型的成分，提取温度范围相对较宽，有助于提高提取速率和效率。超声提取法简单便捷，实验所得色谱图峰数量多且含量高。

22、进一步地，指纹图谱构建过程中，以0.1％磷酸水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b，并采用多波长切换进行洗脱条件，能够保证对紫外检测器检测的高的灵敏度。