一种杜仲总木脂素多组分质量控制方法与流程

本发明涉及药物，具体为一种杜仲总木脂素多组分质量控制方法。

背景技术：

1、骨质疏松症使最常见的慢性疾病之一；目前骨质疏松症药物治疗存在一定的疗程限制，中成药的安全性和耐受性相对较好，杜仲总木脂素有优秀的抗骨质疏松药理活性。药典中关于杜仲的分析方法是以pdg单一成分为检测指标，不能很好地分离pdg。由于杜仲总木脂素成分复杂，含量不均一，目前还没有杜仲总木脂素多组分分析方法的相关报道。建立一个定性、定量的分析方法来保证杜仲中药材、杜仲总木脂素相关中药制剂的安全和有效是必要的。

2、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种杜仲总木脂素多组分质量控制方法，采用液相色谱法所检测的有效成分包括pdg、pmg、dag1和dag2，以氯霉素(chl)作为内标物，为杜仲总木脂素的质量控制标准的建立提供较为准确的依据。

2、为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

3、根据本发明的一个方面，提供了一种杜仲总木脂素多组分质量控制方法，其特征在于，所检测的有效成分包括松脂醇二葡萄糖苷(pdg)、松脂醇单葡萄糖苷(pmg)、dag1和dag2，以氯霉素(chl)作为内标；具体包括以下步骤：

4、(1)吸收波长的选择：精密称取总木脂素粉末，配制浓度为500μg/ml的总木脂素甲醇溶液，于紫外分光光度计上从波长190～420nm扫描，空白溶剂(例如甲醇)作为参比；在277nm处，存在最大吸收波长，因此在后续方法建立过程中以277nm作为最大吸收波长；

5、(2)溶液的配制

6、对照品溶液：精密称取pdg、dag1、dag2和pmg对照品储备液，并以50％甲醇定容至刻度，得到混合对照品溶液；其中pdg浓度为599.77mg/ml，dag1浓度为53.75mg/ml，dag2浓度为66.34mg/ml，pmg浓度为145.09mg/ml；保存于冰箱4℃中；

7、总木脂素溶液：取杜仲树脂柱纯化产物50mg，精密称定，至25ml量瓶中，以50％甲醇溶解并定容至刻度，以0.22mm有机尼龙滤膜过滤，取续滤液即得；

8、(3)色谱条件：色谱柱：nano chromcore c18色谱柱(4.6mm×300mm，3μm)；流动相：2～10％四氢呋喃水相(a相)-乙腈-甲醇混合溶液(b相)；流速：0.7ml/min；检测波长：277nm；柱温：48℃；进样量：10μl；

9、(4)线性关系的考察：取混合对照品溶液，分别进样1～20μl，记录各成分色谱峰面积，以峰面积(y)为纵坐标，浓度(x)为横坐标，x＝对照品浓度×进样体积÷10μl；计算浓度和峰面积，绘制各标准曲线；

10、(5)精密度试验：取混合对照品溶液pdg、pmg、dag1和dag2连续进样6针，分别记录色谱峰面积，计算峰面积的rsd值，考察仪器精密度；pdg、dag1、dag2和pmg四个主成分含量的rsd值依次为0.08％、0.21％、0.41％、0.53％；表明该方法测量精密度良好；

11、(6)重复性考察：按照溶液的配制项下方法平行制备6份总木脂素溶液，测定峰面积，计算各成分含量的rsd值；pdg、dag1、dag2和pmg四个主成分含量的rsd值依次为0.34％、0.73％、0.56％和0.70％，重复性良好；

12、(7)加标回收率试验：精确称取杜仲总木脂素样品10mg至10ml容量瓶内，平行制备6份，按照1:1比例加入对应量的各对照品溶液，并以50％甲醇定容至刻度，超声使溶解后，滤过，取滤液按上述色谱条件进行分析；

13、(8)稳定性试验：取同一供试品溶液，于室温下放置，分别于0-48h进样，4个成分峰面积的rsd均＜3(n＝6)，表明供试品溶液在48h内稳定。

14、(9)含量测定：取不同批次提取的杜仲总木脂素，在色谱条件下进样10μl，计算杜仲总木脂素样品中四种成分的含量。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

16、本发明选择pdg、pmg、dag1和dag2作为指标性成分进行分析，建立一个相对可控的标准，达到对杜仲总木脂素多成分质控的目的，对其临床用药的开发有深远意义。

17、本发明采用甲醇-乙腈系统梯度洗脱分离效果好，pdg峰的分离和峰形比药典测定方法好；所检测的四种有效成分均在范围内呈良好线性关系，精密度、重复性和稳定性好，回收率高，能为杜仲总木脂素的质量控制提供方法依据。

技术特征：

1.一种杜仲总木脂素多组分质量控制方法，其特征在于，所检测的有效成分包括松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷、dag1和dag2，以氯霉素作为内标；具体包括以下步骤：

技术总结本发明提供了一种杜仲总木脂素多组分质量控制方法，该方法所检测的有效成分包括松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷、DAG1和DAG2，以氯霉素作为内标。该方法可以建立一个相对可控的标准，达到对杜仲总木脂素多成分质控的目的。技术研发人员：程志红,宋定中,奚健强,崔诗文,郝五四,袁杰受保护的技术使用者：上海现代药物制剂工程研究中心有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/21