一种微球划膜处理液及其应用的制作方法

本发明涉及免疫层析的，具体涉及一种微球划膜处理液及其应用。

背景技术：

1、免疫层析(immunochromatography as say，ica)是20世纪80年代出现的免疫分析方式，它是在免疫渗滤(immunefiltrationasay，ifa)的基础上建立的一种简单快速的免疫学检测技术，也称侧流免疫法(lateral flow immunoassay,lfia)，具有快速简便、特异性好、价格低廉等优点。其中免疫胶体金技术最为成熟，但仅用于定性或半定量检测。随着生物工程技术和材料学的进步，荧光免疫层析技术因可定量检测已被广泛应用于食品/毒品分析、环境检测及疾病检测(如激素检测、传染病检测、糖尿病检测、炎症检查等)等领域。

2、传统的免疫层析试纸通常是采用将标记抗体(或抗原)的荧光微球用喷金仪均匀的喷在玻璃纤维素膜(或聚酯纤维素膜)上，采用冷冻干燥或加热鼓风干燥的方式去除多余的水分，得到荧光结合垫，再与包被另一株抗体(或抗原)的nc膜等材料组成检测试剂卡。通过将荧光微球喷涂在结合垫上的方式能够增加荧光微球上的抗体和样品中抗原的结合时间，从而提高检测灵敏度。但是这种模式也存在一定缺陷，比如在层析过程中存在微球释放不干净或释放时间长等问题，对检测结果的准确性产生不利的影响。尤其面对宽线性项目(如β-hcg，crp，saa等)检测时，当样本中抗原浓度过高时，存在线性上不去的问题，甚至还会出现hook现象。现用技术均有相应的缺陷，如专利cn114942322a中提供了通过一种微球划膜工艺提升试剂线性的方法，但是该技术直接将微球划在nc膜上存在微球释放不干净、微球稳定性不好的问题，从而影响试纸条的准确度；专利cn117420300a提供了一种不通过结合垫介导释放的免层析检测技术及其应用，该专利中提到方法1可在硝酸纤维素膜上直接包被指示剂标记物，该技术同样存在指示剂标记物释放不干净、稳定性不好的问题；另外该技术提到方法2还可将指示剂标记物制备成冻干粉剂，测试前将待检样本加入到冻干粉剂中，制成待检混合液一起加样，虽然该方法可提高灵敏度、缩短反应时间，但是此技术操作繁琐且冻干粉剂的稳定性不好保证；因此，开发准确度高、线性范围宽、稳定好、方便快捷的免疫检测技术，具有重要的临床意义和应用价值。

技术实现思路

1、本发明的目的之一在于提供一种微球划膜处理液，有利于荧光微球的释放，且可以保护荧光微球在nc膜上的稳定性，从而显著提高了试纸条的准确性和稳定。

2、本发明的目的之二在于提供一种微球划膜处理液的应用，通过微球划膜工艺改善免疫层析试纸性能，与现有技术相比，具有线性范围宽、准确度高、反应时间短、稳定性好等优点。

3、本发明实现目的之一所采用的方案是：一种微球划膜处理液，包括：缓冲液、电解质、阳离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、稳定剂、防腐剂；

4、其中按照质量百分数计，阳离子表面活性剂的浓度为0.1％～1.5％，非离子型表面活性剂浓度为0.1％～1.5％，电解质浓度为0.05％～1％，稳定剂浓度为0.5％～5％，防腐剂浓度为0.05％。

5、优选的，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、tris缓冲液中的任意一种。

6、优选的，所述阳离子表面活性剂包括氨基酸表面活性剂，所述氨基酸为赖氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸中的一种或几种。

7、优选的，所述非离子表面活性剂包括surfynol 485、tritonx-100、聚氧乙烯月桂醚、tween20、tween80、span60中的一种或几种。

8、优选的，所述稳定剂包括蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、精氨酸中的一种或几种。

9、优选的，所述电解质包括氯化钠、氯化钾、氯化钾中的一种或多种。

10、优选的，所述防腐剂包括叠氮钠、链霉素、氯霉素、proclin系列中的一种或多种。

11、优选的，所述微球划膜处理液的ph为7～8。

12、本发明实现目的之二所采用的方案是：一种所述的微球划膜处理液在干式荧光免疫层析试剂微球划膜中的应用。

13、优选地，所述应用的方法为将所述微球划膜处理液以2-5μl/cm划在nc膜的近样垫端，干燥后将微球划于微球划膜处理液上，干燥后制成荧光免疫层析试纸条。

14、本发明的微球划膜处理液中的非离子表面活性剂具有良好的生物兼容性、润湿性；阳离子表面活性剂具有良好的润湿性且可以通过静电、疏水等作用来稳定蛋白质；两者复配使用效果更佳。稳定剂具有良好的分散性，可防止微球聚集。

15、本发明具有以下优点和有益效果：

16、本发明的微球划膜处理液通过非离子表面活性剂和阳离子表面活性剂的复配使用，能够使微球更均匀稳定的的包被于nc膜上，层析过程中也有利于荧光微球的释放，从而显著提高了试纸条的准确性和稳定性。

17、本发明通过用划膜处理液处理层析膜，将标记抗体(或抗原)的荧光微球从传统的喷涂在结合垫上改进为划在层析膜上，这样有利于微球释放、能明显缩短抗原-抗体反应时间，提升试纸条检测性能。另外通过本发明的微球划膜处理液将微球直接划在nc膜上，降低了试剂卡成本，同时缩短了检测时间且该划膜处理液原料易得、成本较低。

18、本发明的微球划膜处理液，通过微球划膜工艺改善免疫层析试纸性能，与现有技术相比，具有线性范围宽、准确度高、反应时间短、稳定性好等优点。

技术特征：

1.一种微球划膜处理液，其特征在于，包括：缓冲液、电解质、阳离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、稳定剂、防腐剂；

2.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液、hepes缓冲液、tris缓冲液中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述阳离子表面活性剂包括氨基酸表面活性剂，所述氨基酸为赖氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述非离子表面活性剂包括surfynol 485、tritonx-100、聚氧乙烯月桂醚、tween20、tween80、span60中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述稳定剂包括蔗糖、海藻糖、山梨糖醇、精氨酸中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述电解质包括氯化钠、氯化钾、氯化钾中的一种或多种。

7.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述防腐剂包括叠氮钠、链霉素、氯霉素、proclin系列中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的微球划膜处理液，其特征在于：所述微球划膜处理液的ph为7～8。

9.一种根据权利要求1～8中任一项所述的微球划膜处理液在干式荧光免疫层析试剂微球划膜中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述应用的方法为将所述微球划膜处理液以2-5μl/cm划在nc膜的近样垫端，干燥后将微球划于微球划膜处理液上，干燥后制成荧光免疫层析试纸条。

技术总结本发明涉及免疫层析的技术领域，具体涉及一种微球划膜处理液及其应用，包括：缓冲液、电解质、阳离子表面活性剂、非离子型表面活性剂、稳定剂、防腐剂；其中按照质量百分数计，阳离子表面活性剂的浓度为0.1％～1.5％，非离子型表面活性剂浓度为0.1％～1.5％，电解质浓度为0.05％～1％，稳定剂浓度为0.5％～5％，防腐剂浓度为0.05％。本发明的微球划膜处理液通过非离子表面活性剂和阳离子表面活性剂的复配使用，能够使微球更均匀稳定的的包被于NC膜上，层析过程中也有利于荧光微球的释放，从而显著提高了试纸条的准确性和稳定性。技术研发人员：夏红星,冯亮,邹婷婷,王彤莹受保护的技术使用者：武汉优恩生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/20