对人和食蟹猴蛋白具有交叉反应性的抗CD3抗体的制作方法

背景技术：

1、cd3(分化簇3)是蛋白复合物和t细胞共受体，其参与激活细胞毒性t细胞(cd8+初始t细胞)和t辅助细胞(cd4+初始t细胞)。cd3由四条不同的链构成。在哺乳动物中，该复合物包含一条cd3γ链、一条cd3δ链和两条cd3ε链。这些链与t细胞受体(tcr)和cd3-zeta(ζ链)结合以在t淋巴细胞中产生激活信号。tcr、cd3-zeta和其他cd3分子一起构成tcr复合物。

2、由于其复杂的胞外结构，抗cd3激动剂抗体难以开发。自最初尝试产生靶向cd3的治疗性抗体以来的几十年里，成功得到的抗体寥寥无几。sp34是第一个广泛使用的抗cd3激动剂抗体，并且可与食蟹猴cd3交叉反应。此外，已基于原始sp34抗体开发了许多衍生物。然而，已证明使sp34抗体或其衍生物采用scfv形式是一项巨大的挑战。鉴于scfv是用于加入双特异性或三特异性抗体中的最常用的片段，该缺陷严重限制了sp34的应用。另一种广泛使用的抗cd3抗体为okt3，不幸的是，其不具有对食蟹猴cd3的交叉反应性，因此其临床应用因缺乏合适的临床前测试模型而受到阻碍。

3、具有抗cd3单元的双特异性抗体提供了将患者自身的t细胞与恶性细胞连接的靶向免疫肿瘤学平台。此类双特异性抗体确保t细胞与癌细胞直接连接，因此能够激活t细胞，从而产生针对癌细胞的细胞毒性活性。由于缺乏具有平衡效力、对食蟹猴的交叉反应性和对合适片段形式的适应性的抗cd3抗体，开发对cd3具有特异性的双特异性抗体的工作一直受阻。

技术实现思路

1、本公开提供新的抗cd3抗体，这些抗cd3抗体包括人源化抗体和它们的抗原结合片段。这些抗体可以高亲和力结合人和食蟹猴cd3，并且它们的单链片段(scfv)具有合理的可开发性，因此这些cd3抗体可以容易地加入多特异性抗体中以在存在肿瘤细胞的情况下有效激活t细胞。此外，这些抗体数量相对较少，但却表现出了广泛的抗cd3活性。基于这些活性，这些抗体被分类为很好的不同等级(等级1-9)。

2、因此，在一个实施方案中，提供了抗cd3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，该抗cd3抗体或其抗原结合片段对人和食蟹猴cd3均具有结合亲和力。在一些实施方案中，该抗cd3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(vh)和轻链可变区(vl)，该vh包含vhcdr1、vh cdr2和vh cdr3，并且该vl包含vl cdr1、vl cdr2和vl cdr3，其中：该vh cdr1包含seq id no:7的氨基酸序列，该vh cdr2包含seq id no:8、64、65或66的氨基酸序列，该vhcdr3包含seq id no:9的氨基酸序列，该vl cdr1包含seq id no:10的氨基酸序列，该vlcdr2包含seq id no:11的氨基酸序列，并且该vl cdr3包含seq id no:12或67的氨基酸序列；该vh cdr1包含seq id no:13的氨基酸序列，该vh cdr2包含seq id no:14、68、69或70的氨基酸序列，该vh cdr3包含seq id no:15的氨基酸序列，该vl cdr1包含seq id no:16的氨基酸序列，该vl cdr2包含seq id no:11的氨基酸序列，并且该vl cdr3包含seq idno:17或71的氨基酸序列；或者该vh cdr1包含seq id no:13的氨基酸序列，该vh cdr2包含seq id no:18、72、73或74的氨基酸序列，该vh cdr3包含seq id no:19的氨基酸序列，该vlcdr1包含seq id no:20的氨基酸序列，该vl cdr2包含seq id no:21或75的氨基酸序列，并且该vl cdr3包含seq id no:22或76的氨基酸序列。

3、在一些实施方案中，该vh cdr1包含seq id no:7的氨基酸序列，该vh cdr2包含seq id no:8、64、65或66的氨基酸序列，该vh cdr3包含seq id no:9的氨基酸序列，该vlcdr1包含seq id no:10的氨基酸序列，该vl cdr2包含seq id no:11的氨基酸序列，并且该vl cdr3包含seq id no:12或67的氨基酸序列。

4、在一些实施方案中，该vh包含选自seq id no:1和23-28的氨基酸序列，该氨基酸序列任选地具有g55a取代、s61a取代或它们的组合，并且该vl包含选自seq id no:2和30-32的氨基酸序列，该氨基酸序列任选具有s93a取代，所有氨基酸位置根据kabat编号。

5、在一些实施方案中，该vh包含seq id no:24的氨基酸序列，并且该vl包含seq idno:30的氨基酸序列；该vh包含seq id no:25的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:30的氨基酸序列；或者该vh包含seq id no:26的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:30的氨基酸序列。

6、在一些实施方案中，该vh cdr1包含seq id no:13的氨基酸序列，该vh cdr2包含seq id no:14、68、69或70的氨基酸序列，该vh cdr3包含seq id no:15的氨基酸序列，该vlcdr1包含seq id no:16的氨基酸序列，该vl cdr2包含seq id no:11的氨基酸序列，并且该vl cdr3包含seq id no:17或71的氨基酸序列。

7、在一些实施方案中，该vh包含选自seq id no:3和36-41的氨基酸序列，该氨基酸序列任选地具有g55a取代、s61a取代或它们的组合，并且该vl包含选自seq id no:4和44-46的氨基酸序列，该氨基酸序列任选具有s93a取代，所有氨基酸位置根据kabat编号。

8、在一些实施方案中，该vh包含seq id no:37的氨基酸序列，并且该vl包含seq idno:45的氨基酸序列；该vh包含seq id no:38的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:45的氨基酸序列；该vh包含seq id no:39的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:45的氨基酸序列；该vh包含seq id no:37的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:46的氨基酸序列；该vh包含seq id no:38的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:46的氨基酸序列；或者该vh包含seq id no:39的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:46的氨基酸序列。

9、在一些实施方案中，该vh包含seq id no:37的氨基酸序列，该氨基酸序列任选地具有g55a取代、s61a取代或它们的组合，并且该vl包含seq id no:45的氨基酸序列，该氨基酸序列任选地具有s93a取代，所有氨基酸位置根据kabat编号。

10、在一些实施方案中，该vh cdr1包含seq id no:13的氨基酸序列，该vh cdr2包含seq id no:18、72、73或74的氨基酸序列，该vh cdr3包含seq id no:19的氨基酸序列，该vlcdr1包含seq id no:20的氨基酸序列，该vl cdr2包含seq id no:21或75的氨基酸序列，并且该vl cdr3包含seq id no:22或76的氨基酸序列。

11、在一些实施方案中，该vh包含选自seq id no:5和50-55的氨基酸序列，该氨基酸序列任选地具有g55a取代、s61a取代或它们的组合，并且该vl包含选自seq id no:6和59-62的氨基酸序列，该氨基酸序列任选地具有s53a取代、s93a取代或它们的组合，所有氨基酸位置根据kabat编号。

12、在一些实施方案中，该vh包含seq id no:50的氨基酸序列，并且该vl包含seq idno:60的氨基酸序列；或者该vh包含seq id no:50的氨基酸序列，并且该vl包含seq id no:61的氨基酸序列。

13、还提供了使用所公开的抗体或片段治疗疾病诸如癌症的方法和用途。