双斑萤叶甲V-ATPaseA基因及其应用

本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种双斑萤叶甲中编码vacuolar-type h+-atpase(v-atpase)a subunit的v-atpase a基因及其应用。

背景技术：

1、双斑长跗萤叶甲monolepta hieroglyphica,mh(motschulsky)，属于鞘翅目(coleoptera)叶甲科(chrysomelidae)，又叫双斑萤叶甲(图1)，是一种杂食性害虫，主要寄主为玉米，但也会侵害其他禾本科植物。玉米双斑萤叶甲的生命周期包括卵、幼虫、蛹和成虫四个阶段。幼虫和成虫均会对玉米造成危害。成虫在土中产卵，滞育越冬。幼虫在土壤中生活并化蛹。幼虫通过取食玉米的根茎，影响植株的水分和养分的吸收。而成虫则取食叶片，留下不规则的白色网状斑和孔洞，严重影响光合作用。此外，成虫也咬食玉米的雌穗和花丝，影响授粉，甚至在灌浆期取食籽粒，导致穗腐病的发生。玉米双斑莹叶甲成虫具有较强的飞行和跳跃能力，传统的化学药剂喷施在防治上效果一般。因此，开发基于玉米自身抗虫品质提升的防控策略，对于有效管理这一新型害虫至关重要。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供一种双斑萤叶甲v-atpase a基因及其应用,本发明中，双斑萤叶甲v-atpase a基因即mhv-atpase a基因。

2、本发明双斑萤叶甲v-atpase a基因，其核苷酸序列如seq id no:1所示。

3、本发明所述的双斑萤叶甲v-atpase a基因的表达蛋白，其氨基酸序列如seq idno:2所示。

4、用于克隆本发明所述双斑萤叶甲v-atpase a基因的特异性引物对，其核苷酸序列如seq id no:3和seq id no:4所示。

5、本发明所述的双斑萤叶甲v-atpase a基因在rnai介导的害虫防治方面中的应用。

6、本发明所述的应用，其中，所述双斑萤叶甲v-atpase a基因在干扰玉米双斑萤叶甲靶标序列表达或抑制玉米双斑萤叶甲生长中的应用。

7、本发明所述的应用，其中，所述rnai介导中，合成的dsrna通过显微注射方式进入玉米双斑萤叶甲成虫体内，所述dsrna注射剂量为180ng/头，注射后能够明显抑制mhv-atpase a基因的表达，显著降低玉米双斑萤叶甲存活率。

8、本发明与现有技术不同之处在于：

9、本发明克隆得到了一种双斑萤叶甲v-atpase a基因并研究了其在防治害虫方面的应用，开发基于玉米自身抗虫品质提升的防控策略，对于有效管理这一新型害虫至关重要。本发明为基于rnai原理的转基因抗虫植物的开发提供了坚实的科学基础。

10、下面结合附图对本发明的双斑萤叶甲v-atpase a基因的克隆及其应用作进一步说明。

技术特征：

1.一种双斑萤叶甲v-atpase a基因，其核苷酸序列如seq id no:1所示。

2.权利要求1所述的双斑萤叶甲v-atpase a基因的表达蛋白，其氨基酸序列如seq idno:2所示。

3.用于克隆权利要求1所述双斑萤叶甲v-atpase a基因的特异性引物对，其核苷酸序列如seq id no:3和seq id no:4所示。

4.权利要求1所述的双斑萤叶甲v-atpase a基因在rnai介导的害虫防治方面中的应用。

5.权利要求4所述的应用，其特征在于：所述双斑萤叶甲v-atpase a基因靶标序列的dsrna在干扰玉米双斑萤叶甲靶标基因表达或抑制玉米双斑萤叶甲生长中的应用。

6.权利要求5所述的应用，其特征在于：所述rnai介导中，合成的dsrna通过显微注射方式进入玉米双斑萤叶甲成虫体内，所述dsrna注射剂量为180ng/头，注射后能够明显抑制mhv-atpase a基因的表达，显著降低玉米双斑萤叶甲存活率。

技术总结本发明公开了一种双斑萤叶甲中编码Vacuolar‑type H<supgt;+</supgt;‑ATPase(V‑ATPase)A subunit的V‑ATPase A基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，本发明还公开了所述双斑萤叶甲V‑ATPase A基因的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明克隆得到了一种双斑萤叶甲V‑ATPase A基因并研究了其在防治害虫方面的应用，开发基于玉米自身抗虫品质提升的防控策略，对于有效管理这一新型害虫至关重要。本发明为基于RNAi原理的转基因抗虫植物的开发提供了坚实的科学基础。技术研发人员：张春,肖达,吴忠义,王甦受保护的技术使用者：北京市农林科学院技术研发日：技术公布日：2024/8/27