虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法与流程

本发明涉及一种核酸疫苗实验室生产方法。

背景技术：

1、传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis，ihn)是一种严重威胁鲑、鳟鱼的急性传染病，它主要通过感染鱼类的脾脏和肾脏等造血组织引起组织坏死，根据鱼种、鱼龄、病毒菌株及饲养环境的不同通常可造成80％-100％的死亡率。ihn的病原为传染性造血器官坏死病病毒(infectious hematopoietic necrosis virus，ihnv)，其表面糖蛋白(glycoprotein，g)是病毒表面的主要抗原与病毒的毒力强弱直接相关，因此目前多将其基因作为疫苗研制的主要基因。

2、核酸疫苗又称基因疫苗，是近年来新兴的研究领域，主要分为dna疫苗和rna疫苗，它主要是将编码抗原蛋白的基因克隆到真核表达载体上，然后通过直接注射动物的方式将重组质粒带入动物细胞，利用宿主细胞的转录系统合成外源抗原蛋白，激活机体免疫反应。目前在对虹鳟ihn疾病的预防研究中，dna核酸疫苗已经被广泛应用。

技术实现思路

1、本发明提供了一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法。

2、本发明虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法按照以下步骤进行：

3、一、核酸疫苗pihnch-g菌液培养

4、表达核酸疫苗质粒pihnch-g的大肠杆菌划线含有0.1mg/ml氨苄青霉素抗性的lb固体培养基于35～39℃条件下倒置培养11～13h；挑取平板上的单菌落于含有0.1mg/ml氨苄青霉素抗性的lb液体培养基，在35～39℃、110～130rpm条件下培养10～14h，即得到核酸疫苗pihnch-g菌液；

5、二、摇瓶扩大培养

6、步骤一得到的核酸疫苗pihnch-g菌液按照1％的接种量接种到摇瓶培养基中，在35～39℃、110～130rpm条件下振荡培养8h，即实现了虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产；所述每升摇瓶培养基由15g的胰蛋白胨、15g的酵母提取物、10g的磷酸氢二钾、10g的磷酸二氢钠和余量的水组成。

7、本发明ihn核酸疫苗pihnch-g的实验室生产方法中，最佳碳源为酵母提取物，最佳氮源为胰蛋白胨，最佳缓冲盐为磷酸氢二钾和磷酸二氢钠，采用了最佳发培养时间。利用本发明的方法实现了ihn核酸疫苗pihnch-g的实验室生产，本发明的方法传染性造血器官坏死病疫苗商品化具有重大意义。

技术特征：

1.一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法，其特征在于虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法按照以下步骤进行：

2.根据权利要求1所述的一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法，其特征在于步骤一中每升lb固体培养基由10g的胰蛋白胨、5g的酵母提取物、10g的氯化钠、15g的琼脂粉和余量的水组成。

3.根据权利要求1所述的一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法，其特征在于每升步骤一中lb液体培养基由10g的胰蛋白胨、5g的酵母提取物、10g的氯化钠和余量的水组成。

技术总结本发明提供了一种虹鳟传染性造血器官坏死病核酸疫苗实验室生产方法。本发明涉及一种核酸疫苗实验室生产方法。本发明方法：一、核酸疫苗pIHNch‑G菌液培养；二、摇瓶扩大培养。本发明IHN核酸疫苗pIHNch‑G的实验室生产方法中，最佳碳源为酵母提取物，最佳氮源为胰蛋白胨，最佳缓冲盐为磷酸氢二钾和磷酸二氢钠，利用本发明的方法实现了IHN核酸疫苗pIHNch‑G的实验室生产，本发明的方法对传染性造血器官坏死病疫苗商品化具有重大意义。技术研发人员：赵景壮,徐黎明,邵轶智,卢彤岩受保护的技术使用者：中国水产科学研究院黑龙江水产研究所技术研发日：技术公布日：2024/8/27