檀香AREB6基因的应用的制作方法

本发明属于植物基因工程领域，涉及檀香areb6基因的应用，特别涉及檀香areb6基因在檀香体内提高檀香醇生物合成产量的应用。

背景技术：

1、檀香(santalum album l.)是一种生长缓慢的常绿林木，原产于印度、斯里兰卡及印尼群岛的热带山区。檀香心材(sandalwood)是享誉全球的顶级高档雕刻用材，从其心材中提取的精油有“液体黄金”之称。因此，檀香是世界上最珍贵的木本植物之一，具有良好的经济效益。研究檀香精油的形成机制对于檀香的分子育种和通过代谢工程合成檀香精油具有重要意义。

2、檀香醇(santalols)是檀香精油的主要成分。α-檀香醇占檀香醇的主体。近年来，檀香醇生物合成甲羟戊酸(mevalonic acid，mva)途径上游基因saaact、sahmgs、samk、sapmk和下游关键酶基因sassy、sacyp736a167已被鉴定，但这些关键基因的分子调控机制鲜有报道，更没有报道高表达能够显著提高檀香醇合成量的基因应用的报道。

3、α-檀香醇的cas号为：115-71-9。

4、α-檀香醇的结构式为：

5、如果能够通过转基因育种或者基因调控来提高檀香体内檀香醇产量，将具备较大的经济效益。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本发明第一方面提供了一种提高檀香组织中α-檀香醇含量的方法，所述方法为：通过基因工程操作，使檀香组织中高表达檀香areb6基因。

2、在一些实施方式中，所述檀香的品种为老山檀香。

3、在一些实施方式中，所述檀香areb6基因编码的蛋白序列如seq id no.2所示。

4、在一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：

5、步骤1：把檀香areb6基因转入农杆菌基因表达质粒，得到重组质粒；

6、步骤2：把所述重组质粒转入农杆菌，得到可以表达檀香areb6基因的重组农杆菌；

7、步骤3：用所述重组农杆菌转化檀香植株，使所述檀香植株中α-檀香醇含量提高；或者

8、用所述重组农杆菌转化檀香愈伤组织，使所述檀香愈伤组织中α-檀香醇含量提高。

9、本发明第二方面提供了一种生物材料在制备用于提高檀香组织中α-檀香醇含量的制剂中的用途，所述生物材料是如下b1、b2、b3、b4、b5、b6和b7中的任一种；

10、b1：檀香areb6基因编码的蛋白；

11、b2：融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列中含有b1中所述的檀香areb6基因编码的蛋白的氨基酸序列与功能性蛋白片段或惰性蛋白片段的氨基酸序列；

12、b3：基因，所述基因的编码序列能够编码b1中所述的檀香areb6基因编码的蛋白或b2中所述的融合蛋白；

13、b4：基因表达盒，所述基因表达盒中的基因产物为b1中所述的檀香areb6基因编码的蛋白或b2中所述的融合蛋白；

14、b5：基因工程载体，所述基因工程载体中含有b4中所述的基因表达盒；

15、b6：细胞，所述细胞中含有b5中所述的基因工程表达载体，所述基因工程载体的基因表达盒中的编码蛋白组成型表达、组织特异性表达或人工诱导型表达；以及

16、b7：组合物，所述组合物中含有b1中所述的檀香areb6基因编码的蛋白，b2中所述的融合蛋白，b5中所述的基因工程表达载体或b6中所述的细胞。

17、在一些实施方式中，所述功能性蛋白片段为用于分离纯化蛋白的标签肽或荧光蛋白标签。

18、在一些实施方式中，所述檀香areb6基因编码的蛋白序列如seq idno.2所示。

19、在一些实施方式中，所述檀香的品种为老山檀香。

20、本发明第三方面提供了一种用于评估檀香组织合成α-檀香醇能力的qpcr引物组合，所述引物组合中，上游引物序列如seq id no.5所示，下游引物序列如seq id no.6所示。

21、在一些实施方式中，所述檀香的品种为老山檀香。

技术特征：

1.一种提高檀香组织中α-檀香醇含量的方法，所述方法为：通过基因工程操作，使檀香组织中高表达檀香areb6基因。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述檀香的品种为老山檀香。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述檀香areb6基因编码的蛋白序列如seq id no.2所示。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

5.一种生物材料在制备用于提高檀香组织中α-檀香醇含量的制剂中的用途，所述生物材料是如下b1、b2、b3、b4、b5、b6和b7中的任一种；

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述功能性蛋白片段为用于分离纯化蛋白的标签肽或荧光蛋白标签。

7.如权利要求5或6所述的用途，其特征在于，所述檀香areb6基因编码的蛋白序列如seq id no.2所示。

8.如权利要求5-7中任一项所述的用途，其特征在于，所述檀香的品种为老山檀香。

9.一种用于评估檀香组织合成α-檀香醇能力的qpcr引物组合，所述引物组合中，上游引物序列如seq id no.5所示，下游引物序列如seq id no.6所示。

10.如权利要求9所述的引物组合，其特征在于，所述檀香的品种为老山檀香。

技术总结本发明公开了一种提高檀香组织中α‑檀香醇含量的方法，步骤为：把蛋白序列如SEQ ID NO.2所示的檀香AREB6基因转入农杆菌基因表达质粒，得到重组质粒；把重组质粒转入农杆菌，得到可以表达檀香AREB6基因的重组农杆菌；用重组农杆菌转化檀香植株，使檀香植株中α‑檀香醇含量提高；或者用重组农杆菌转化檀香愈伤组织，使檀香愈伤组织中α‑檀香醇含量提高。技术研发人员：孟森,陆俊锟,覃方锉,王胜坤,李香,周云清受保护的技术使用者：中国林业科学研究院热带林业研究所技术研发日：技术公布日：2024/8/27