一种基于磁珠阳选策略分离罗非鱼CD166+细胞的方法

本发明涉及细胞分选领域，特别是涉及一种基于磁珠阳选策略分离罗非鱼cd166+细胞的方法。

背景技术：

1、免疫磁珠分选是一种非常有效的细胞分离手段。通常分为标记目的细胞的阳性分选策略，以及标记非目的细胞的阴性分选策略。阴性细胞分选虽然特异性较好，但是得率不高，且样本利用率底下。阳性细胞分选策略由于使用单标志物分选，细胞特异性并不好。

2、罗非鱼作为一种重要的经济鱼类，其生长、发育、疾病防控等方面的研究具有重要意义。cd166作为一种细胞表面标志分子，在罗非鱼的生物学功能中扮演着关键角色。因此，分离罗非鱼cd166+细胞对于深入研究其生物学特性及功能至关重要。

3、然而，现有的细胞分离方法存在操作复杂、分离效率低以及纯度不高等问题，难以满足罗非鱼cd166+细胞研究的需要。因此，本发明旨在提供一种基于磁珠阳选策略的罗非鱼cd166+细胞分离方法，以解决现有技术中的不足。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种基于磁珠阳选策略分离罗非鱼cd166+细胞的方法，以解决上述现有技术存在的问题。利用免疫磁珠法能够分选罗非鱼外周血全淋巴细胞中的cd166+细胞群，该方法分选的cd166细胞，经流式细胞仪检测，阳性率可达约80％左右，还具有操作简单的优势。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供了一种基于磁珠阳选策略分离罗非鱼cd166+细胞的方法，包括以下步骤：

4、将罗非鱼cd166单抗与生物素偶联，得到生物素标记的cd166单抗；

5、将罗非鱼外周血单细胞悬液与所述生物素标记的cd166单抗混合，进行孵育，得到孵育产物；

6、将所述孵育产物与磁珠混合，进行磁性分离，得到所述罗非鱼cd166+细胞。

7、优选的，所述罗非鱼外周血单细胞悬液中细胞浓度为106cell/ml。

8、优选的，所述罗非鱼外周血单细胞悬液与所述生物素标记的cd166单抗的体积比为50：1。

9、优选的，所述孵育的时间为60min。

10、优选的，所述罗非鱼外周血单细胞悬液的制备方法包括以下步骤：

11、将罗非鱼外周血细胞悬液、体积百分含量为51％的percoll分层液和体积百分含量为34％的percoll分层液混合，收集所得混合液中体积百分含量为51％的percoll分层液和体积百分含量为34％的percoll分层液的交界面，并进行离心，得到所述罗非鱼外周血单细胞悬液。

12、优选的，所述罗非鱼外周血细胞悬液、所述体积百分含量为51％的percoll分层液和所述体积百分含量为34％的percoll分层液的体积比为1：1：1。

13、本发明公开了以下技术效果：

14、本发明利用免疫磁珠法分选罗非鱼外周血全淋巴细胞中的cd166+细胞群。在本发明具体实施例中，结果显示磁珠法能够有效地分离cd166+细胞群，分选的cd166细胞，经流式细胞仪检测，阳性率可达约80％左右。

技术特征：

1.一种基于磁珠阳选策略分离罗非鱼cd166+细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述罗非鱼外周血单细胞悬液中细胞浓度为106cell/ml。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述罗非鱼外周血单细胞悬液与所述生物素标记的cd166单抗的体积比为50：1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述孵育的时间为60min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述罗非鱼外周血单细胞悬液的制备方法包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述罗非鱼外周血细胞悬液、所述体积百分含量为51％的percoll分层液和所述体积百分含量为34％的percoll分层液的体积比为1：1：1。

技术总结本发明涉及细胞分选领域，特别是涉及一种基于磁珠阳选策略分离罗非鱼CD166<supgt;+</supgt;细胞的方法。本发明利用磁珠阳选策略分选罗非鱼外周血全淋巴细胞中的CD166<supgt;+</supgt;细胞群，具体为：将罗非鱼CD166单抗与生物素偶联，得到生物素标记的CD166单抗；将罗非鱼外周血单细胞悬液与所述生物素标记的CD166单抗混合，进行孵育，得到孵育产物；将所述孵育产物与磁珠混合，进行磁性分离，得到罗非鱼CD166<supgt;+</supgt;细胞。在本发明具体实施例中，结果显示该方法能够有效地分离CD166<supgt;+</supgt;细胞群，分选的CD166细胞，经流式细胞仪检测，阳性率可达约80％左右。技术研发人员：汪志文,张湘东,夏洪丽,鲁义善,夏立群受保护的技术使用者：广东海洋大学深圳研究院技术研发日：技术公布日：2024/9/2