气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素E的方法与流程

本发明属于粮食样本中营养物质检测的，具体涉及气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法。

背景技术：

1、通用术语“维生素e”是指天然存在于植物油中的一系列同分异构体，分别为α-、β-、γ-和δ-生育酚，以及相关的α-、β-、γ-和δ-生育三烯酚，它们与铬酚头部和植基尾部有共同的结构。这些化合物具有抗氧化特性，可以保护脂肪和油免受氧化腐蚀，从而延迟其保质期。维生素e是一种的脂溶性维生素，对维持人体正常生理功能起重要作用，能延缓人体衰老，促进性激素分泌等功能；此外，维生素e也是一种重要的抗氧化剂，能减缓食品氧化变质。氧化应激和慢性炎症是许多慢性疾病发展的重要因素，包括心血管疾病和癌症。由于其具有抗氧化和抗炎作用，生育酚在预防肥胖、心血管疾病、癌症、糖尿病和阿尔茨海默氏病方面具有保护作用。由于这些保护作用，它被用于皮肤科和化妆品行业的许多产品中。而食用植物油是天然维生素e的重要来源，在我国，食用植物油的消费水平在快速增长。维生素e是食用植物油的重要营养质量指标之一，对鉴定食用植物油的质量和营养价值具有重要的意义，因此很有必要建立一种食用植物油中8种维生素e的快速、准确、灵敏的检测方法。

2、玉米胚芽是提炼玉米油的主要原料，玉米油作为市场上常见的植物油，其具有庞大的市场销售量。然而，在对玉米胚芽含有的维生素e进行检测过程中，经常发现所得到的检测结果误差很大，回收率偏低。即使用标样进行检测，得到的结果也是不准确。故，实验室中原先的检测方法不当，包括实验试剂的选择以及实验步骤不当，亦或是存在污染源而影响检测结果。工作人员需要改进出一套准确度更高的检测方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，该方法通过改进检测步骤和实验使用的试剂，从而大大提高了回收率。同时，通过进一步排除污染源，再次净化基质，更大限度提升了回收率。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，该方法包括如下步骤：

4、s01、选取玉米胚芽样本，经研磨后，得到玉米胚芽样本粉末。

5、s02、在玉米胚芽样本粉末中，加入纯净水，涡旋2min，离心4min，弃去液体层，固体层玉米胚芽粉末自然晾干，得到待测玉米胚芽粉末。

6、玉米胚芽样本粉末加入纯净水涡旋离心的目的：

7、经过不断试验得出，影响样本回收率精密度的因素主要有：1、使用了甲醇作为溶剂的标准样品溶液。2、由于根霉菌、黑曲霉菌等空气中的污染菌混入玉米胚芽样本，且相互作用后，生成醇类物质，维生素e和醇类都含有羟基，根据官能团相似相溶原理，维生素e溶于醇类，因此会在玉米胚芽样本净化的过程中，维生素e跟着醇类杂质损失，造成回收率偏低。以上是影响测定玉米胚芽中8种维生素e的精密度的主要因素。

8、因此，在本步骤中，通过在样本中加入水，使得醇类与水相似相溶。通过进一步涡旋，且可保证样本混合液中固体样本部分和液体样本部分均与水充分混合接触，有效除去样本中的醇类。本步骤操作简单，使用到的试剂是水，成本也非常低。本申请中用于配置标准品的溶剂采用了正己烷，正己烷在后续除去油脂部分，也是洗脱剂，故也是本申请改进后的发明点之一。

9、s03、在待测玉米胚芽粉末中加入石油醚，萃取后，取有机相，旋蒸至浸膏状，得到玉米油脂。

10、采用石油醚萃取的目的：

11、在上述得到的粉末中加入石油醚后，维生素e、脂肪酸等非极性成分容易被石油醚溶解萃取出来，通过对石油醚相进行旋蒸浓缩，即可得到玉米样本提取物中的玉米油脂。

12、s04、取玉米油脂，加入正己烷，加盖涡旋分散1min，得到混合样液。

13、加入正己烷的目的：

14、在玉米油脂中加入正己烷，是对各组分起到分散和溶解的作用。

15、s05、氨基固相萃取小柱经正已烷活化后待用。

16、s06、混合样液全部转移至固相萃取小柱中，用正己烷淋洗，抽干氨基固相萃取小柱并弃去以上步骤流出液。

17、用正己烷淋洗的目的：

18、通过将样液转移至氨基固相萃取小柱中，目标组分维生素e组分被吸附在该小柱上，油脂杂质随着正己烷淋洗液除去。

19、淋洗这一步前，样品溶液中不能含醇类杂质，否则维生素e组分会在淋洗这一步随着样品或者标样中带入的醇类杂质流失，回收率差。比如，不能购买市面上维生素e的甲醇溶液标准品，也不能用甲醇配制维生素e标准品。玉米胚芽基质因空气中根霉菌发酵产生的醇类杂质需要去除后才能进行下一步试验。上述两个问题均解决后，才能进一步提高回收率。

20、s07、氨基固相萃取小柱经甲醇洗脱液洗脱，收集于比色管中，后经0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤，得到样本甲醇溶液，滤液供气相色谱－质谱联用仪分析。

21、作为优选，在步骤s07中，甲醇洗脱液的流速为：1ml/min。

22、作为优选，8种维生素e包括α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、4种生育酚异构体和α-生育三烯酚。

23、作为优选，气相色谱条件为：db-5ms石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：300℃；柱温：初始温度为60℃，以40℃/min的速率升温至300℃，保持8min；载气：高纯氦气(纯度≥99.999％)；柱流速：1.0ml/min；进样量：1.0μl；进样方式：不分流进样。

24、作为优选，ei离子源，电离能量70ev；接口温度280℃；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；溶剂延时3min。

25、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

26、本实验建立了固相萃取-气相色谱/质谱法(gc-ms/ms)同时检测玉米胚芽中α/β/γ/δ－生育酚和α/β/γ/δ－生育三烯酚等8种维生素e含量的分析方法，操作相对简单，准确度、灵敏度高。样品中的维生素e经过氨基固相萃取柱净化提取，用气相色谱-质谱技术进行分离分析，外标法定量分析，得出方法的精密度和回收率均满足实验检测要求，且检出限低于现行国标。样品经过固相萃取柱净化处理，具有强抗干扰能力，有效降低了样品基质对检测结果的影响，且能同时检测植物油中8种维生素e，更好地满足日常检测需要，提高了检测效率。

技术特征：

1.气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，其特征在于，在步骤s09中，甲醇洗脱液的流速为：1ml/min。

3.根据权利要求1所述的气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，其特征在于，8种维生素e包括α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、4种生育酚异构体和α-生育三烯酚。

4.根据权利要求1所述的气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，其特征在于，气相色谱条件为：db-5ms石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.25μm）；进样口温度：300℃；柱温：初始温度为60℃，以40℃/min的速率升温至300℃，保持8min；载气：高纯氦气（纯度≥99.999%）； 柱流速：1.0ml/min； 进样量：1.0μl；进样方式：不分流进样。

5.根据权利要求1所述的气相色谱-串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素e的方法，其特征在于，ei离子源，电离能量70ev；接口温度280℃；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；溶剂延时3min。

技术总结本发明公开了气相色谱‑串联质谱法同时测定玉米胚芽中8种维生素E的方法，具体属于粮食样本中营养物质检测的技术领域，主要包括如下步骤：在避光条件下，在研磨得到的玉米胚芽样本粉末中，加入纯净水，涡旋2min，离心4min，得到分层的样本混合液，弃去液体层，固体层经自然晾干，得到待测玉米胚芽粉末。在净化后的玉米胚芽样本粉末中加入石油醚，萃取后，浓缩至浸膏状，得到玉米油脂；取玉米油脂，加入正己烷，加盖涡旋分散1min，得到混合样液，通过对混合样液中的维生素E进行富集，可得到上机分析液。通过使用该方法可排除空气中根霉菌、黑曲霉菌对待测玉米样本的污染影响，从而使得得到的维生素E的检测结果更加准确。技术研发人员：周婷婷,章虎,孙文闪,朱源,徐欣媛,张仲平受保护的技术使用者：绿城农科检测技术有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/2