一种竹节参愈伤组织的扩繁方法

本发明涉及植物组织培养，特别是涉及一种竹节参愈伤组织的扩繁方法。

背景技术：

1、竹节参(panax japonicus c.a.mey)，是五加科人参属植物，是我国珍贵的药用植物，被誉为“草药之王”。其主要的药用成分为皂苷类物质，可用于抗肿瘤、抗糖、抗衰老、抗炎症等。然而由于近年来对野生竹节参的掠夺性采挖，导致其野生资源稀少，资源储量下降。同时，人工栽培是满足竹节参市场需求的主要措施之一，但是传统的种子和根状茎繁殖方式由于其自然生长周期长、种子成苗率低，无法进行大规模的繁殖。

2、植物组织培养技术是20世纪初发展起来的技术，是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞、原生质体等在合适的条件进行离体培养，诱导产生愈伤组织、不定芽等，之后形成完整植株的过程。该技术不受外界环境等各方面因素的影响，可通过人为的控制生长条件，提高苗木的繁殖率、生产次生代谢产物，可在一定程度上保护竹节参资源。通过愈伤组织培养技术，既可以快速繁殖竹节参种苗，又可以直接提取次生代谢产物。但是竹节参的愈伤组织培养还处于初步阶段，以往的研究大多停留在竹节参茎、叶、胚的愈伤组织诱导阶段，少数学者对根的愈伤组织诱导进行研究，尚未建立根的愈伤诱导培养体系。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种竹节参愈伤组织的扩繁方法，采用本发明提供的扩繁方法，愈伤组织诱导率高达88.17％，增殖率高达187.5％。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一种竹节参愈伤组织的扩繁方法，包括以下步骤：

4、1)将竹节参的根进行消毒，得到消毒外植体；

5、2)将所述步骤1)得到的消毒外植体进行愈伤组织诱导培养，得到愈伤组织培养物；

6、所述愈伤组织诱导培养使用的培养基为：ms+1.5～6mg/l naa+1.5～6mg/l6-ba+30g/l蔗糖+3.8g/l结冷胶；

7、3)将所述步骤2)得到的愈伤组织培养物进行增殖培养；

8、所述增殖培养使用的培养基为：ms+1～3mg/l naa+1～3mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+3.8g/l结冷胶；所述naa和6-ba的浓度比为1:3。

9、优选的，所述步骤1)消毒的方法包括以下步骤：将所述竹节参冲洗后依次经乙醇溶液消毒和次氯酸钠溶液消毒。

10、优选的，所述乙醇溶液的体积百分含量为75％，消毒时间为60s；

11、所述次氯酸钠溶液的质量百分含量为5～10％，消毒时间为15～20min。

12、优选的，将所述步骤2)消毒外植体处理成厚度为0.5cm的片再进行愈伤组织诱导培养。

13、优选的，所述步骤2)愈伤组织诱导培养使用的培养基为：ms+3mg/l naa+3mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+3.8g/l结冷胶。

14、优选的，所述愈伤组织诱导的条件包括：在温度为25℃、黑暗和相对湿度为60％下培养30d。

15、优选的，所述步骤3)增殖培养使用的培养基为：ms+1mg/l naa+3mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+3.8g/l结冷胶。

16、优选的，所述增殖培养的条件包括：在温度为25℃、黑暗和相对湿度为60％下培养21d。

17、本发明的有益效果为：

18、(1)10％次氯酸钠溶液消毒15min消毒效果最好，存活率最高，污染率和死亡率相对较低，是竹节参根最佳消毒方法。

19、(2)以竹节参的根为外植体，最佳愈伤组织诱导培养基激素配方为naa浓度为3mg/l，6-ba的浓度为3mg/l。通过极差分析和方差分析发现，各因素对试验指标影响力大小的排序为：naa浓度＞6-ba浓度。

20、(3)最适合愈伤组织增殖的naa和6-ba的比例为1:3，其增殖率最高。

21、(4)最适合愈伤组织增殖的naa和6-ba的配方为：naa的浓度为1mg/l，6-ba的浓度为3mg/l。

22、(5)最适合竹节参愈伤组织继代培养的周期为21d.

23、(6)最适合竹节参愈伤组织增殖培养的固化剂为结冷胶，其愈伤组织更加的松散。

技术特征：

1.一种竹节参愈伤组织的扩繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的扩繁方法，其特征在于，所述步骤1)消毒的方法包括以下步骤：将所述竹节参冲洗后依次经乙醇溶液消毒和次氯酸钠溶液消毒。

3.根据权利要求2所述的扩繁方法，其特征在于，所述乙醇溶液的体积百分含量为75％，消毒时间为60s；

4.根据权利要求1所述的扩繁方法，其特征在于，将所述步骤2)消毒外植体处理成厚度为0.5cm的片再进行愈伤组织诱导培养。

5.根据权利要求1所述的扩繁方法，其特征在于，所述步骤2)愈伤组织诱导培养使用的培养基为：ms+3mg/l naa+3mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+3.8g/l结冷胶。

6.根据权利要求1或5所述的扩繁方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导的条件包括：在温度为25℃、黑暗和相对湿度为60％下培养30d。

7.根据权利要求1所述的扩繁方法，其特征在于，所述步骤3)增殖培养使用的培养基为：ms+1mg/l naa+3mg/l 6-ba+30g/l蔗糖+3.8g/l结冷胶。

8.根据权利要求1或7所述的扩繁方法，其特征在于，所述增殖培养的条件包括：在温度为25℃、黑暗和相对湿度为60％下培养21d。

技术总结本发明提供了一种竹节参愈伤组织的扩繁方法，属于植物组织培养技术领域。包括：将竹节参的根进行清洗、乙醇溶液消毒和次氯酸钠溶液消毒，得到消毒外植体；将消毒外植体进行愈伤组织的诱导培养，得到愈伤组织培养物；将愈伤组织培养物进行增殖培养，得到疏松且易增殖的愈伤组织。采用本发明提供的方法对竹节参的根进行愈伤组织诱导以及增殖培养，愈伤组织诱导率高达88.17％，增殖率高达187.50％。技术研发人员：杨玲,吕思琴,戴蔚翔受保护的技术使用者：深圳北理莫斯科大学技术研发日：技术公布日：2024/9/9