抗独特型抗体分子及其用途的制作方法

背景技术：

1、iga肾病是世界范围内最普遍的慢性肾小球疾病之一。据保守的流行病学估计，全球发病率为约5-50例/百万(儿童)和10-40例/百万(成人)。这种疾病的发病率呈现出区域性偏差，亚洲和美洲的发病率更高，日本和中国地区的疾病负担尤其高。日本经活检证实的iga肾病病例预计为约350,000例。在美国，这种预计为约100,000例，因此它是成人中最常诊断的1°肾小球疾病。虽然iga肾病是相对进展缓慢的疾病，但它导致终末期肾病(esrd)，即20％-50％的患者在20年-30年跨度内出现肾衰竭。考虑到需要通过肾活检(一种在各种临床环境中不定地实践的方案)来确认疾病，这些数字可能被严重低估。该疾病具有复杂的发病机理，包括遗传、流行病学和潜在的环境因素对疾病病因、病理和进展的影响。它同样具有从无症状到终末期肾衰竭(esrd)的不同临床表现。iga肾病是由iga沉积引起的，通常以免疫复合物的形式沉积在肾脏的血管系膜中。

2、正在开发用于治疗iga肾病的抗体药物产品。需要开发新的药剂和测定来评估临床前样品和临床样品中的抗体药物产品。

技术实现思路

1、本公开至少部分地提供了结合至抗april抗体(例如，西贝瑞单抗(sibeprenlimab))并包含本文所公开的一种或多种功能和结构特性的抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子为抗独特型(抗id)抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子结合至和/或降低(例如，抑制、阻断或中和)抗april抗体的一种或多种生物活性。在一个实施方案中，抗体分子包含如本文所述的重链可变区(vh)和/或轻链可变区(vl)。在一个实施方案中，抗体分子包含如本文所述的vh的一个或多个重链cdr(hcdr)和/或vl的一个或多个轻链cdr(lcdr)。还提供了编码抗体分子的核酸分子、载体、细胞、组合物、试剂盒以及制备和使用抗体分子的方法。本文所公开的抗体分子适用于检测和测量样品和受试者中的抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)。

2、因此，在一个方面，本公开提供了具有一种或多种(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12种或全部)以下特性的抗体分子(例如，抗独特型抗体分子)，例如本文所述的抗体分子：

3、a)以高亲和力，例如以例如通过本文所述的方法所确定的约1μg/ml或更低，例如约900ng/ml或更低、800ng/ml或更低、700ng/ml或更低、600ng/ml或更低、500ng/ml或更低、400ng/ml或更低、

4、300ng/ml或更低、200ng/ml或更低、100ng/ml或更低、90ng/ml或更低、80ng/ml或更低、70ng/ml或更低、60ng/ml或更低、

5、50ng/ml或更低、40ng/ml或更低、30ng/ml或更低、20ng/ml或更低、10ng/ml或更低、5ng/ml或更低、2ng/ml或更低、1ng/ml或更低，例如在1ng/ml与1μg/ml之间，例如在1ng/ml与1μg/ml之间、在1ng/ml与500ng/ml之间、在1ng/ml与200ng/ml之间、在1ng/ml与100ng/ml之间、在1ng/ml与50ng/ml之间、在1ng/ml与20ng/ml之间、在1ng/ml与10ng/ml之间、在1ng/ml与5ng/ml之间、在2ng/ml与1μg/ml之间、在5ng/ml与1μg/ml之间、在10ng/ml与1μg/ml之间、在20ng/ml与1μg/ml之间、在50ng/ml与1μg/ml之间、在100ng/ml与1μg/ml之间、在200ng/ml与1μg/ml之间、在500ng/ml与1μg/ml之间、在2ng/ml与500ng/ml之间、在5ng/ml与200ng/ml之间、在10ng/ml与100ng/ml之间、在15ng/ml与50ng/ml之间、在20ng/ml与30ng/ml之间、在20ng/ml与25ng/ml之间，例如约1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml、

6、25ng/ml、30ng/ml、40ng/ml、50ng/ml、60ng/ml、70ng/ml、

7、80ng/ml、90ng/ml、100ng/ml、110ng/ml、120ng/ml、

8、130ng/ml、140ng/ml或150ng/ml的半最大有效浓度(ec50)结合至抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)；

9、b)特异性结合至抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)上的独特型，例如与由本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)识别的表位相同、类似或重叠的表位；

10、c)体外、离体或体内降低(例如，抑制、阻断或中和)抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)的一种或多种生物活性；

11、d)显示与本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)相同或类似的结合亲和力或特异性或两者；

12、e)显示与包含本文所述的重链可变区和/或轻链可变区(例如，本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)的重链可变区和/或轻链可变区)的抗体分子相同或类似的结合亲和力或特异性或两者；

13、f)显示与包含本文所述的一个或多个(例如，两个或三个)重链cdr和/或一个或多个(例如，两个或三个)轻链cdr(例如，本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)的一个或多个(例如，两个或三个)重链cdr和/或一个或多个(两个或三个)轻链cdr)的抗体分子相同或类似的结合亲和力或特异性或两者；

14、g)显示与包含本文所述的氨基酸序列的抗体分子相同或类似的结合亲和力或特异性或两者；

15、h)显示与包含由本文所述的核苷酸序列编码的氨基酸序列的抗体分子相同或类似的结合亲和力或特异性或两者；

16、i)抑制，例如竞争性抑制第二抗体分子与抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)的结合，其中第二抗体分子为本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)；

17、j)与第二抗体分子竞争结合至抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)，其中第二抗体分子为本文所述的单克隆抗体(例如，mab1h4)；

18、k)具有本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)的一种或多种生物特性；

19、l)具有本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)的一种或多种结构特性；或

20、m)具有本文所述的单克隆抗体(例如，mab 1h4)的一种或多种药代动力学特性。

21、在一个方面，本公开提供了一种能够结合至抗april抗体(例如，西贝瑞单抗)的分离的抗体分子，其包含：包含seq id no:1的hcdr1氨基酸序列、hcdr2氨基酸序列和hcdr3氨基酸序列的重链可变区(vh)；和包含seq id no:2的lcdr1氨基酸序列、lcdr2氨基酸序列和lcdr3氨基酸序列的轻链可变区(vl)。在一个实施方案中，hcdr1氨基酸序列包含seq idno:11的氨基酸序列或与其具有不超过1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。在一个实施方案中，hcdr2氨基酸序列包含seq id no:12的氨基酸序列或与其具有不超过1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。在一个实施方案中，hcdr3氨基酸序列包含seq id no:13的氨基酸序列或与其具有不超过1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。在一个实施方案中，lcdr1氨基酸序列包含seq id no:14的氨基酸序列或与其具有不超过1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。在一个实施方案中，lcdr2氨基酸序列包含seq id no:15的氨基酸序列或与其具有不超过1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。在一个实施方案中，lcdr3氨基酸序列包含seq idno:16的氨基酸序列或与其具有不超过1、2或3个氨基酸差异的氨基酸序列。

22、在一个实施方案中，vh包含seq id no:1的氨基酸序列或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列。在一个实施方案中，vh包含seq id no:1的氨基酸序列。

23、在一个实施方案中，vl包含seq id no:2的氨基酸序列或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列。在一个实施方案中，vl包含seq id no:2的氨基酸序列。

24、在一个实施方案中，vh包含seq id no:1的氨基酸序列或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列；并且vl包含seq id no:2的氨基酸序列或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸残基的氨基酸序列。在一个实施方案中，vh包含seqid no:1的氨基酸序列并且vl包含seq id no:2的氨基酸序列。

25、在一个实施方案中，抗体分子包含两个vh和两个vl，例如本文所述的两个vh和两个vl。

26、在一个实施方案中，抗体分子包含抗原结合片段。在一个实施方案中，抗原结合片段包含fab、f(ab')2、fv、scfv或sc(fv)2。

27、在一个实施方案中，抗体分子包含igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。在一个实施方案中，抗体分子包含κ或λ轻链的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗体分子包含igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区；和κ或λ轻链的轻链恒定区。在一个实施方案中，抗体分子包含igg1的重链恒定区(例如，本文所述的igg1重链恒定区)和κ轻链的轻链恒定区(例如，本文所述的κ轻链恒定区)。在一个实施方案中，抗体分子包含igg2的重链恒定区(例如，本文所述的igg2重链恒定区)和κ轻链的轻链恒定区(例如，本文所述的κ轻链恒定区)。

28、在一个实施方案中，抗体分子包含fc区。

29、在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:3的氨基酸18-458的重链。在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:4的氨基酸18-464的重链。在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:5的氨基酸18-235的轻链。

30、在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:3的氨基酸18-458的重链和含有seq id no:5的氨基酸18-235的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:4的氨基酸18-464的重链和含有seq id no:5的氨基酸18-235的轻链。

31、在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:3的氨基酸序列的重链。在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:4的氨基酸序列的重链。在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:5的氨基酸序列的轻链。

32、在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:3的氨基酸序列的重链和含有seq id no:5的氨基酸序列的轻链。在一个实施方案中，抗体分子包含含有seq id no:4的氨基酸序列的重链和含有seq id no:5的氨基酸序列的轻链。

33、在一个实施方案中，抗体分子为mab 1h4、1a5或6a3。在一个实施方案中，抗体分子mab 1h4。

34、在一个实施方案中，抗体分子为小鼠抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子为人源化抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子为单克隆抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子为合成抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子为纯化的抗体分子，例如从杂交瘤上清液、细胞(例如，expi293细胞)的瞬时转染或稳定表达的细胞系(例如，cho细胞)纯化的抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子以0.2mg/ml至5mg/ml，例如0.5mg/ml至1.5mg/ml的浓度例如由杂交瘤产生。在一个实施方案中，抗体分子为钌化的抗体分子。

35、在一个实施方案中，抗体分子为抗独特型(抗id)抗体分子。在一个实施方案中，抗体分子结合至抗april抗体的一个或多个(例如，2、3、4、5或6个)cdr。在一个实施方案中，抗体分子结合至抗april抗体的vh、vl或两者。在一个实施方案中，抗体分子不结合、基本上不结合至抗april抗体的fc区。

36、在一个实施方案中，抗体分子在例如如本文所述的结合elisa测定中结合抗体-april抗体。在一个实施方案中，抗体分子在例如如本文所述的桥接elisa测定中结合抗体-april抗体。在一个实施方案中，抗体分子以例如通过elisa所确定的小于500ng/ml，例如小于400ng/ml、300ng/ml、200ng/ml、150ng/ml、120ng/ml、100ng/ml、90ng/ml、80ng/ml、70ng/ml、60ng/ml、50ng/ml、40ng/ml、35ng/ml、30ng/ml、25ng/ml、20ng/ml、15ng/ml、10ng/ml、5ng/ml、2ng/ml、1ng/ml或0.1ng/ml，例如1ng/ml至150ng/ml、2ng/ml至100ng/ml、5ng/ml至50ng/ml或10ng/ml至25ng/ml的ec50结合至抗april抗体。

37、在一个实施方案中，抗体分子减少(例如中和、抑制或阻断)抗april抗体与april的结合。在一个实施方案中，抗体分子结合至不与april结合的抗april抗体。在一个实施方案中，抗体分子不结合或基本上不结合至与april结合的抗april抗体。在一个实施方案中，抗体分子结合至不与april结合的抗april抗体，并且不结合或基本上不结合至与april结合的抗april抗体。在一个实施方案中，抗体分子结合至不与april结合的抗april抗体和与april结合的抗april抗体。

38、在一个实施方案中，抗体分子桥接两种抗april抗体，例如同时结合至两种抗april抗体。在一个实施方案中，抗体分子与抗april抗体分子竞争结合至april。

39、在一个实施方案中，抗april抗体结合至人april。在一个实施方案中，抗april抗体包含西贝瑞单抗的一个或多个(例如，2、3、4、5或6个)cdr。在一个实施方案中，抗april抗体包含西贝瑞单抗的vh、vl或两者。在一个实施方案中，抗april抗体为西贝瑞单抗。

40、在一个方面，本公开提供了一种检测抗april抗体的方法，该方法包括使本文所述的抗体分子与样品接触；以及确定抗体分子与样品之间(例如，抗体分子与样品中的抗april抗体之间)复合物的形成，从而检测抗april抗体。

41、在一个实施方案中，该方法还包括使抗体分子与参考样品接触以及确定抗体分子与参考样品之间复合物的形成。

42、在一个实施方案中，抗april抗体通过elisa测定(例如，药代动力学elisa)进行检测。在一个实施方案中，elisa为例如如本文所述的结合elisa。在一个实施方案中，elisa为例如如本文所述的桥接elisa。在一个实施方案中，在抗药物测定中检测抗april抗体。在一个实施方案中，在毒理学测定中检测抗april抗体。在一个实施方案中，在gxp测定中检测抗april抗体。

43、在一个方面，本公开提供了一种评估样品的方法，该方法包括使本文所述的抗体分子与样品接触；以及确定抗体分子与样品之间(例如，抗体分子与样品中的抗april抗体之间)复合物的形成，从而评估样品。

44、在一个实施方案中，该方法还包括使抗体分子与参考样品接触以及确定抗体分子与参考样品之间复合物的形成。

45、在一个实施方案中，在elisa测定(例如，药代动力学elisa)中评估样品。在一个实施方案中，elisa为例如如本文所述的结合elisa。在一个实施方案中，elisa为例如如本文所述的桥接elisa。在一个实施方案中，在抗药物测定中评估样品。在一个实施方案中，在毒理学测定中评估样品。在一个实施方案中，在gxp测定中检测抗april抗体。

46、在一个方面，本公开提供了一种检测抗april抗体的方法，该方法包括使本文所述的抗体分子与受试者接触(例如，将本文所述的抗体分子施用于受试者)；以及确定抗体分子与受试者之间(例如，抗体分子与受试者中的抗april抗体之间)复合物的形成，从而检测抗april抗体。

47、在一个方面，本公开提供了一种评估受试者的方法，该方法包括使本文所述的抗体分子与受试者接触(例如，将本文所述的抗体分子施用于受试者)，以及确定抗体分子与受试者之间(例如，抗体分子与受试者中的抗april抗体之间)复合物的形成，从而评估受试者。

48、在一个方面，本公开提供了一种抗体分子，该抗体分子结合至与由如本文所述的抗体分子识别的表位相同或重叠的表位。

49、在一个方面，本公开提供了一种组合物(例如，药物组合物)，该组合物包含本文所述的抗体分子和药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。在一个实施方案中，组合物适用于体外、离体或体内检测抗april抗体。

50、在一个方面，本公开提供了一种试剂盒，该试剂盒包含本文所述的抗体分子和使用该抗体分子的说明书。

51、在一个方面，本公开提供了一种核酸(例如，分离的核酸)，该核酸编码本文所述的抗体分子的一个或多个(例如，2、3、4、5或6个)cdr，或vh、vl或两者。

52、在一个实施方案中，核酸为人源化的。在一个实施方案中，核酸为密码子优化的。

53、在一个实施方案中，核酸包含seq id no:8的核苷酸52-1374，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的核苷酸序列。

54、在一个实施方案中，核酸包含seq id no:9的核苷酸52-1392，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的核苷酸序列。

55、在一个实施方案中，核酸包含seq id no:10的核苷酸52-705，或与其具有至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性或与其相差不超过1、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的核苷酸序列。

56、在一个实施方案中，核酸包含seq id no:8的核苷酸序列。在一个实施方案中，核酸包含seq id no:9的核苷酸序列。在一个实施方案中，核酸包含seq id no:10的核苷酸序列。

57、在一个方面，本公开提供了一种载体(例如，表达载体)，该载体包含如本文所述的核酸。在一个实施方案中，表达载体包含可操作地连接到核酸的启动子。

58、在一个方面，本公开提供了一种细胞(例如，宿主细胞)，该细胞包含如本文所述的核酸或如本文所述的载体。

59、在一个方面，本公开提供了一种产生抗体分子的方法，该方法包括在适用于基因表达的条件下培养如本文所述的宿主细胞。在一个实施方案中，该方法还包括分离或纯化抗体分子。

60、本公开考虑了前述方面和/或实施方案中的任一者或多者的所有组合，以及与具体实施方式和实施例中阐述的实施方案中的任一个或多个实施方案的组合。

61、本文的组合物和方法的其他特征、目的和优点将从说明书和附图以及权利要求书变得显而易见。