一种子囊霉素的制备方法与流程

本发明涉及生物发酵技术，尤其涉及一种子囊霉素的制备方法。

背景技术：

1、子囊霉素(ascomycin，fk520)是一种23元大环内酯类化合物，具有免疫抑制和抗真菌活性。目前，子囊霉素及其衍生物作为免疫抑制剂被广泛应用于抑制器官移植后的免疫排斥反应。在治疗多种自身免疫疾病诸如系统性红斑狼疮也发挥着重要作用。同时，在抗真菌、治疗疟疾等方面也占有一席之地。子囊霉素首次发现是由日本藤泽制药公司(fujisawa)在上世纪60年代从含有吸水链霉菌(streptomyces hygroscopicus no.kk317)的土壤中分离得到，其分子式为c43h67no12，易溶于甲醇、丙酮等。其具体结构式如下：

2、

3、当前大规模生产子囊霉素的方法依然是通过吸水链霉菌(streptomyceshygroscopicus)的发酵实现。但是有关该发酵过程调控的相关研究较少，所以在实际生产中往往无法严格控制菌体生长过程，造成最终的发酵水平难以掌控。此外，子囊霉素发酵过程中产生的相似组分去甲基子囊霉素(fk523)在后期提取纯化中难以去除，导致生产成本进一步增加。因此，这种低产量、后期提取纯化复杂带来的高成本发酵方法已成为制约子囊霉素大规模生产的关键因素。

技术实现思路

1、本发明提供一种子囊霉素的制备方法，能够实现对子囊霉素产生菌的菌丝形态进行调控，使其生长为最有利于产生子囊霉素的形态，最终不仅可以有效提高子囊霉素的产量，还能够减少主要副产物fk523的比例。

2、本发明提供一种子囊霉素的制备方法，包括如下步骤：

3、步骤1、将子囊霉素产生菌的孢子接种至菌种活化培养基中进行菌种活化培养得到成熟孢子；

4、步骤2、将成熟孢子接种至种子培养基中进行第一培养，培养36-48h后向种子培养基中加入终浓度为0.5-1.5mg/l的聚二甲基二烯丙基氯化铵进行第二培养得到种子培养液；

5、步骤3、将种子培养液接种至发酵培养基中进行第三培养，至少培养12h后，向发酵培养基中加入终浓度为0.5-2.0mg/l的聚二甲基二烯丙基氯化铵进行第四培养得到子囊霉素。

6、如上所述的制备方法，其中，第一培养的时间为36h；和/或，第三培养的时间为48h。

7、如上所述的制备方法，其中，第二培养的时间为12-24h；和/或，第四培养的时间为120-168h。

8、如上所述的制备方法，其中，步骤3中，种子培养液和发酵培养基的体积比为(1-4)：50。

9、如上所述的制备方法，其中，菌种活化培养基包括：可溶性淀粉2-4g/l、葡萄糖2-3g/l、蛋白胨0.5-1.5g/l、玉米浆干粉0.5-1.5g/l、琼脂15-25g/l；和/或，菌种活化培养基的ph值为6.9-7.1。

10、如上所述的制备方法，其中，种子培养基包括：可溶性淀粉4-6g/l、葡萄糖8-12g/l、黄豆饼粉4-6g/l、蛋白胨1.5-2.5g/l、玉米浆干粉0.5-1.5g/l、氯化钠0.5-1.5g/l；和/或，种子培养基的ph值为6.9-7.1。

11、如上所述的制备方法，其中，发酵培养基包括：可溶性淀粉15-25g/l、糊精30-50g/l、葡萄糖8-12g/l、黄豆饼粉15-25g/l、玉米浆干粉4-6g/l、酵母粉4-6g/l、氯化钠1.5-2.5g/l、碳酸钙1.5-2.5g/l、硫酸铵0.8-1.2g/l、磷酸氢二钾0.8-1.2g/l；和/或，发酵培养基的ph值为6.9-7.1。

12、如上所述的制备方法，其中，子囊霉素产生菌为吸水链霉菌atcc 14891。

13、如上所述的制备方法，其中，种子培养的条件包括：温度为27-29℃，转速为200-250r/min，时间为48-60小时。

14、如上所述的制备方法，其中，发酵培养的条件包括：温度为27-29℃，转速为200-250r/min，时间为168-216小时。

15、本发明提供一种子囊霉素的制备方法，通过菌种活化、种子培养和发酵培养步骤制备子囊霉素，并在适当的时间添加适当的聚二甲基二烯丙基氯化铵，能够实现对子囊霉素产生菌的菌丝形态进行调控，使其生长为最有利于产生子囊霉素的形态并进行最有利于产生子囊霉素的代谢途径。本发明的制备方法制备得到的发酵产品无任何毒副作用，且制备方法工艺简单，不仅可以有效提高子囊霉素的产量，还能够减少主要副产物fk523的比例，从而降低该结构近似物杂质对后续纯化分离过程的影响，最终能够降低生产成本并为大规模工业化生产奠定基础。

技术特征：

1.一种子囊霉素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述第一培养的时间为36h；和/或，所述第三培养的时间为48h。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述第二培养的时间为12-24h；和/或，所述第四培养的时间为120-168h。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述种子培养液和所述发酵培养基的体积比为(1-4)：50。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述菌种活化培养基包括：可溶性淀粉2-4g/l、葡萄糖2-3g/l、蛋白胨0.5-1.5g/l、玉米浆干粉0.5-1.5g/l、琼脂15-25g/l；和/或，所述菌种活化培养基的ph值为6.9-7.1。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养基包括：可溶性淀粉4-6g/l、葡萄糖8-12g/l、黄豆饼粉4-6g/l、蛋白胨1.5-2.5g/l、玉米浆干粉0.5-1.5g/l、氯化钠0.5-1.5g/l；和/或，所述种子培养基的ph值为6.9-7.1。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括：可溶性淀粉15-25g/l、糊精30-50g/l、葡萄糖8-12g/l、黄豆饼粉15-25g/l、玉米浆干粉4-6g/l、酵母粉4-6g/l、氯化钠1.5-2.5g/l、碳酸钙1.5-2.5g/l、硫酸铵0.8-1.2g/l、磷酸氢二钾0.8-1.2g/l；和/或，所述发酵培养基的ph值为6.9-7.1。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述子囊霉素产生菌为吸水链霉菌atcc 14891。

9.根据权利要求1-8任一项所述的制备方法，其特征在于，所述种子培养的条件包括：温度为27-29℃，转速为200-250r/min，时间为48-60小时。

10.根据权利要求1-9任一项所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养的条件包括：温度为27-29℃，转速为200-250r/min，时间为168-216小时。

技术总结本发明提供一种子囊霉素的制备方法，通过菌种活化、种子培养和发酵培养步骤制备子囊霉素，并在适当的时间添加适当的聚二甲基二烯丙基氯化铵，能够实现对子囊霉素产生菌的菌丝形态进行调控，使其生长为最有利于产生子囊霉素的形态并进行最有利于产生子囊霉素的代谢途径。本发明的制备方法制备得到的发酵产品无任何毒副作用，且制备方法工艺简单，不仅可以有效提高子囊霉素的产量，还能够减少主要副产物去甲基子囊霉素的比例，从而降低该结构近似物杂质对后续纯化分离过程的影响，最终能够降低生产成本并为大规模工业化生产奠定基础。技术研发人员：金明义,赵子刚,张葵受保护的技术使用者：北大医药重庆大新药业股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/17