神经内分泌肿瘤中的尿激酶型纤溶酶原激活物受体(UPAR)-PET/CT的制作方法

本发明涉及一种正电子发射显像剂，其用于通过癌症的pet显像进行的神经内分泌肿瘤(nen)患者的预后，其中所述显像剂包含通过螯合剂nota或dota与放射性核素68ga或64cu偶联的upar结合肽。本发明还涉及包含用于治疗或缓解受试者的神经内分泌肿瘤(nen)的放射性药物的组合物，其中所述放射性药物包含放射性核素和upar结合肽。最后，本发明涉及所述显像剂作为治疗用放射性药物的伴随诊断的用途。

背景技术：

1、神经内分泌肿瘤(nens)起源于神经内分泌细胞，主要发现于胃肠道、胰腺和肺。被诊断有nen的患者的临床病程范围从惰性到高度侵袭性。原发肿瘤的起源、转移的存在以及肿瘤形态学和增殖活性(即ki-67)是已知的预后因素。根据who分类，患者分为net g1(ki67<3％)、net g2(ki67 3-20％)、net g3(ki67>20％且分化良好)和nec(ki67>20％且分化不良)(1)。为了进一步改进预后并指导治疗决策，非侵入性监测肿瘤标志物可能会有用。pet非常适合这项任务，因为可以应用不同的特定放射性示踪剂以非侵入性的方式可视化全身肿瘤标志物的表达。特别是在nen，用于生长抑素受体表达(例如64cu-dotatate或68ga-dotatate)和葡萄糖代谢(18f-fdg)的放射性示踪剂可用于诊断、预后和治疗选择(2,3)。此外，使用例如靶向生长抑素受体的177lu-dotatate的肽受体放射性核素治疗(prrt)被批准用于低级别nen，而在高级别nen中较低的生长抑素受体表达会限制其应用。

2、因此，与nen相关的改进的预后工具将是有利的，尤其是更有效和/或可靠的nen亚型治疗将是有利的。

技术实现思路

1、尿激酶纤溶酶原激活物受体(upar)是一种有前途的诊断和预后生物标志物，也是治疗的靶点，已在几种癌症实体中被广泛研究(4)，但从未与nen相关。upar锚定在细胞膜表面，并使其配体尿激酶纤溶酶原激活物(upa)的蛋白水解活性局部化。在正常组织中，upar表达有限，然而在癌症中，upar表达上调。除upa之外，upar还与其他蛋白质相互作用，其中包括整合素家族膜蛋白。总的来说，upar参与促进细胞增殖、运动、侵袭、蛋白水解和血管生成(4-6)。由于其在癌症中的必要作用，我们组开发了pet放射性示踪剂68ga-nota-ae105，其采用用于upar的高亲和力拮抗剂(7-9)。在i期研究中调查了安全性和生物分布，还示出了68ga-nota-ae105在原发肿瘤和转移瘤中的累积，以及与离体的肿瘤样品中upar表达的相互关系(7)。最近，我们报道了68ga-nota-ae105 upar pet能够区分前列腺癌的低风险和中等风险特征(10)。此外，我们之前已经在前列腺癌和结肠直肠癌的临床前试验中示出了针对prrt的upar的高效性(11,12)。因此，作为侵袭性疾病标志物的upar可能在高分级nen中显示上调，并可能为这些患者的prrt提供靶点。

2、这项nen患者研究的目的是使用upar-pet(以68ga-nota-ae105 pet/ct为例)评估肿瘤摄取和临床结果。我们假设具有68ga-nota-ae105的upar-pet/ct将显示在nen中的积累，并且upar示踪剂的摄取将与无进展生存期(pfs)和总生存期(os)相关(参见实施例5)。

3、令人惊讶的是，发现与常用的神经内分泌肿瘤的pet方式如fdg-pet(见图6-参照图)，和生长抑素受体显像例如64cu-dotatate(见图7-参照图)相比，upar-pet是一种更强的预后工具(更高的风险比(hr))(图4a-4b)。64cu-dotatate对于os来说并不显著。

4、因此，本发明的目的涉及提供改进的nen预后工具。

5、具体而言，本发明的目的还在于为患有nen的患者提供改进的治疗方案。

6、因此，本发明的一个方面涉及一种正电子发射显像剂，用于通过癌症的pet显像进行的神经内分泌肿瘤(nen)患者的预后，

7、其中所述显像剂包含通过螯合剂nota或dota与放射性核素68ga或64cu偶联的upar结合肽；且

8、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体。

9、在一个方面，本发明涉及一种正电子发射显像剂，用于通过癌症的pet显像进行的神经内分泌肿瘤(nen)患者的无复发生存期(rfs)和/或总生存期(os)的预后，

10、其中所述显像剂包含通过螯合剂nota与放射性核素68ga偶联的upar结合肽；且

11、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体；

12、其中upar结合变体选自由以下组成的组

13、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

14、·(ser)-(leu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(gln)-(tyr)(leu)-(trp)-(ser)、

15、·(d-glu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-tyr)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

16、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

17、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(ser)-(d-arg)-(tyr)-leu)-(trp)-(ser)、

18、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(ser)-(d-arg)-(tyr)-leu)-(trp)-(ser)、

19、·(d-thr)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

20、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-([β]-2-萘基-l-丙氨酸)-(ser)、

21、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

22、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)([β]-1-萘基-l-丙氨酸)-(ser)、

23、·(d-glu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(tyr)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

24、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(leu)-(leu)-(trp)-(d-his)、

25、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(leu)-(trp)-(ile)、

26、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)([β]-1-萘基-l-丙氨酸)-(d-his)、

27、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(3-吲哚基乙基)甘氨酸)-(n-(2-甲氧基乙基)甘氨酸)、

28、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-苄基甘氨酸)-(n-(2[β]乙氧基乙基)甘氨酸)、

29、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(甲基萘基)甘氨酸)-(n-(2-甲氧基乙基)甘氨酸)，和

30、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(ile)；

31、其中高于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或靶肝比(ttr)量化水平指示不良的无复发生存期(rfs)预后和/或不良的总生存期(os)预后；和

32、其中等于或低于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或靶肝比(ttr)量化水平指示良好的无复发生存期(rfs)预后和/或良好的总生存期(os)预后。

33、两种upar-pet示踪剂64cu-dota-ae105和68ga-nota-ae105共享相同的结合部分，肽ae105。此外，它们都已经在人类和动物中进行了测试(见参考文献(7)、(28)和wo2014/086364a1)，并在乳腺癌、膀胱癌和前列腺癌中显示了类似的吸收。因此，不囿于理论，据信包含以下的pet示踪剂对nen病患者也将以类似方式起作用：

34、-作为放射性核素的64cu或68ga；

35、-作为螯合剂的dota或nota；和

36、-根据本发明所述的upar结合肽。

37、本发明的另一个方面涉及一种正电子发射显像剂，用于通过癌症的pet显像进行的神经内分泌肿瘤(nen)患者的预后，

38、其中所述显像剂包含通过螯合剂nota与放射性核素68ga偶联的upar结合肽；且

39、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)(ae105)或其upar结合变体。

40、这样的显像剂已在实施例部分进行了测试。

41、本发明的另一个方面是提供一种通过pet显像进行体内显像的方法，用于评估患者神经内分泌肿瘤(nen)的预后，所述方法包括：

42、a)提供先前已施用过根据本发明所述的显像剂的受试者；

43、b)通过体内pet显像检测来自步骤a)的施用的显像剂的放射性同位素的放射性发射；

44、c)生成表示所述放射性发射的位置和/或量的图像；

45、d)确定所述受试者中upar表达的分布和程度，其中所述表达与所述体内显像剂发射的所述信号相关；和

46、e)将确定的upar表达的分布和程度与阈值水平进行比较；

47、·其中高于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或tlr量化水平指示不良的无复发生存期(rfs)预后和/或不良的总生存期(os)预后；和

48、·其中等于或低于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或tlr量化水平指示良好的无复发生存期(rfs)预后和/或良好的总生存期(os)预后。

49、本发明的另一个方面是根据本发明所述的正电子发射显像剂通过表达upar的肿瘤的体内pet显像进行的在神经内分泌肿瘤(nen)患者的预后中的用途，

50、其中所述显像剂包含通过螯合剂nota或dota与放射性核素68ga或64cu偶联的upar结合肽；

51、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体。

52、优选地，所述显像剂包含通过螯合剂nota与放射性核素68ga偶联的upar结合肽。

53、如上所述，本发明的方法和根据本发明使用的组合物也可以用作伴随诊断。因此，本发明的另一个方面涉及一种正电子发射显像剂，用作通过癌症的pet显像进行的神经内分泌肿瘤(nen)患者的伴随诊断，

54、其中所述显像剂包含通过螯合剂nota或dota与放射性核素68ga或64cu偶联的upar结合肽；且

55、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体；

56、其中

57、o高于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或靶肝比(tlr)量化水平指示upar结合药物，例如是放射性药物的upar结合药物，将有效对抗所述nen；和

58、o等于或低于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或靶肝比(tlr)量化水平指示upar结合药物，例如是放射性药物的upar结合药物，将不能有效对抗所述nen。

59、在另一个方面，本发明涉及一种正电子发射显像剂，用作通过癌症的pet显像进行的神经内分泌肿瘤(nen)患者的伴随诊断，

60、其中所述显像剂包含通过螯合剂nota或dota与放射性核素68ga或64cu偶联的upar结合肽；且

61、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体；

62、其中

63、o高于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或靶肝比(tlr)量化水平指示upar结合药物，例如upar结合放射性药物将有效对抗所述nen；和

64、o等于或低于阈值水平的suv最大值和/或suv平均值和/或靶肝比(tlr)量化水平指示upar药物，例如upar结合放射性药物将不能有效对抗所述nen；其中所述upar结合变体选自由以下组成的组

65、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

66、·(ser)-(leu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(gln)-(tyr)(leu)-(trp)-(ser)、

67、·(d-glu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-tyr)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

68、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

69、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(ser)-(d-arg)-(tyr)-leu)-(trp)-(ser)、

70、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(ser)-(d-arg)-(tyr)-leu)-(trp)-(ser)、

71、·(d-thr)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

72、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-([β]-2-萘基-l-丙氨酸)-(ser)、

73、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

74、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)([β]-1-萘基-l-丙氨酸)-(ser)、

75、·(d-glu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(tyr)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

76、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(leu)-(leu)-(trp)-(d-his)、

77、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(leu)-(trp)-(ile)、

78、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)([β]-1-萘基-l-丙氨酸)-(d-his)、

79、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(3-吲哚基乙基)甘氨酸)-(n-(2-甲氧基乙基)甘氨酸)、

80、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-苄基甘氨酸)-(n-(2[β]乙氧基乙基)甘氨酸)、

81、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(甲基萘基)甘氨酸)-(n-(2-甲氧基乙基)甘氨酸)，和

82、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(ile)。

83、本发明的另一个方面涉及一种组合物，其包含用于治疗或缓解受试者的神经内分泌肿瘤(nen)的放射性药物，

84、其中所述放射性药物包含放射性核素和upar结合肽；且

85、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体；且

86、其中所述受试者已被诊断有upar表达的神经内分泌肿瘤(nen)；并且其中所述upar表达高于预定的阈值水平，

87、其中使用根据本发明所述的正电子发射显像剂确定所述阈值水平。

88、本发明的另一个方面涉及一种组合物，其包含用于治疗或缓解受试者的神经内分泌肿瘤(nen)的放射性药物；

89、其中所述放射性药物包含放射性核素和upar结合肽；且

90、其中upar结合肽是(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)或其upar结合变体；且

91、其中upar结合变体选自由以下组成的组

92、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

93、·(ser)-(leu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(gln)-(tyr)(leu)-(trp)-(ser)、

94、·(d-glu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-tyr)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

95、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

96、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(ser)-(d-arg)-(tyr)-leu)-(trp)-(ser)、

97、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(ser)-(d-arg)-(tyr)-leu)-(trp)-(ser)、

98、·(d-thr)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

99、·(d-asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)-([β]-2-萘基-l-丙氨酸)-(ser)、

100、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(arg)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

101、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)([β]-1-萘基-l-丙氨酸)-(ser)、

102、·(d-glu)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(tyr)-(tyr)-(leu)-(trp)-(ser)、

103、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(leu)-(leu)-(trp)-(d-his)、

104、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(leu)-(trp)-(ile)、

105、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(tyr)-(leu)([β]-1-萘基-l-丙氨酸)-(d-his)、

106、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(3-吲哚基乙基)甘氨酸)-(n-(2-甲氧基乙基)甘氨酸)、

107、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-苄基甘氨酸)-(n-(2[β]乙氧基乙基)甘氨酸)、

108、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(甲基萘基)甘氨酸)-(n-(2-甲氧基乙基)甘氨酸)，和

109、·(asp)-([β]-环己基-l-丙氨酸)-(phe)-(d-ser)-(d-arg)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(d-phe)-(n-(2,3-二甲氧基苄基)甘氨酸)-(ile)；

110、其中所述受试者已被诊断有upar表达的神经内分泌肿瘤(nen)；并且其中所述upar表达高于预定的阈值水平，

111、其中使用根据本发明所述的正电子发射显像剂确定所述阈值水平。