一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法

本发明涉及水稻病鉴定领域，尤其涉及一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法。

背景技术：

1、稻瘟病是水稻重要病害之一，可引起大幅度减产，严重时减产40％～50％，甚至颗粒无收。本病在各地均有发生，其中以叶部、节部发生为多，发生后可造成不同程度减产，尤其穗颈瘟或节瘟发生早而重，可造成白穗以致绝产。

2、水稻稻瘟病系由真菌引起，借气流传播。叶瘟初期的侵染菌源主要来自越冬的病稻草及病秕谷。病菌以菌丝体形态在病稻草上越冬，当来年春季气温回升到15℃以上，相对湿度大于93％时，遇雨便会产生大量的分生孢子，借风雨而传播到附近稻田秧苗上。因此，离病稻草进的稻田叶瘟发生早而重。

3、目前对水稻瘟病穗瘟抗性鉴定效果不是很好，很难对患病的水稻进行分辨。

4、有鉴于此，针对现有的问题予以研究改良，提供一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，本发明通过改进稻瘟病穗瘟抗性鉴定的方法，提高了鉴定的准确性和可靠性，有助于筛选出具有优良抗性的水稻品种，并为稻瘟病的防治提供有力支持，旨在通过该技术，达到解决问题与提高实用价值性的目的。

技术实现思路

1、本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，包括稻瘟病穗瘟抗性鉴定方法，所述稻瘟病穗瘟抗性鉴定方法步骤包括：

3、s1、选取水稻植株：在目标生态区多点采集并分离稻瘟病单孢菌株，然后进行稻瘟病菌单孢菌的分离、保存；

4、s2、对水稻植株进行培养：针对采集的不同稻瘟病单孢菌株，提取稻瘟病菌单孢菌的dna，以dna为模板，以稻瘟病菌无毒基因与致病基因设计引物，进行pcr扩增，对稻瘟病菌无毒基因与致病基因进行测定；

5、s3、对稻瘟病穗瘟进行分析：稻瘟病穗瘟的发生与多种因素有关，水稻品种的抗性也是影响稻瘟病穗瘟发生的重要因素；

6、s4、对稻瘟病穗瘟进行评价：通过观察稻穗上的病斑面积、病斑数量以及病斑的扩展速度，可以初步判断穗瘟的严重程度；通过比较不同品种或不同处理措施下稻穗对稻瘟病的抗性表现，可以筛选出具有优良抗性的品种或有效的防治方法；

7、s5、穗瘟发病情况调查和抗性评价。

8、作为上述技术方案的进一步描述：

9、所述水稻培养包括菌株选择，培养基制备，稻瘟病穗瘟培养和苗瘟接种方法；

10、所述菌株选择：从水稻种植田间剪取处于大苞期的水稻茎秆，带回实验室，剪取茎秆节上部2cm，下部56cm，总长约78cm长的茎秆，将3根茎秆放入双层过滤纸的培养皿内，加入无菌水，将培养好的稻瘟病菌孢子用无菌水洗后，调至浓度为1o6个/ml，用移液枪在每根茎秆的茎秆节位点滴入的孢子悬浮液；

11、将培养皿放入^tc的光照培养箱中，并用透明的薄膜包被，以保持培养皿内的湿度，光暗交替培养10天调查病情。

12、作为上述技术方案的进一步描述：

13、所述培养基制备为淀粉培养基和米糠培养基；

14、淀粉培养基：将可溶性淀粉10g、酵母浸膏2g、碳酸钙3g和琼脂18g加入800ml水中，加热至琼脂融化，加水定容至1000ml，调节ph至6.5，在121℃下湿热灭菌25min；

15、米糠培养基：将米糠20g、琼脂20g加入800ml水中，加热至琼脂融化，加水定容至1000ml，调节ph至6.5，在121℃下湿热灭菌25min。

16、作为上述技术方案的进一步描述：

17、所述稻瘟病穗瘟培养为将选择的稻瘟病菌菌株置于可溶性淀粉培养基平板上28℃恒温黑暗培养7d，用灭菌的打孔器打取5mm的菌丝块，备用。将灭菌米糠培养基倒入直径9cm灭菌培养皿，每皿倒入30ml～40ml米糠培养基，制成米糠培养基平板，将菌丝块接种至米糠培养基平板上，28℃恒温黑暗培养10d，用无菌毛笔刷除表面菌丝体，将培养皿置于黑光灯下28℃保湿培养72h，每天光照时间为12h。

18、作为上述技术方案的进一步描述：

19、所述苗瘟接种方法为水稻苗3～4叶期时，接种体中加入吐温80，使其在接种体中的浓度为0.1％(v/v)，傍晚时采用空压机(0.7mpa)进行喷雾接种，鉴定池每平方米喷施接种体80ml，每鉴定池喷施单个稻瘟病菌的接种体，接种后覆盖黑色薄膜，25℃～28℃保湿培育48h后，打开薄膜两端通风，接种72h后移去薄膜，25℃～28℃保湿。

20、本发明具有如下有益效果：

21、本发明中，通过改进稻瘟病穗瘟抗性鉴定的方法，有效提高了鉴定的准确性。具体来说，本方法不仅涉及稻瘟病单孢菌株的采集、分离和保存，还涵盖了水稻植株的培养、稻瘟病穗瘟的分析、评价以及发病情况调查等多个方面。

22、在菌株选择方面，本发明采用特定的茎秆培养方法，通过点滴稻瘟病菌孢子悬浮液，模拟田间自然感染条件，使得菌株的致病性得到更好的保留。同时，培养基的制备也充分考虑了稻瘟病菌的生长需求，采用淀粉培养基和米糠培养基相结合的方式，既满足了稻瘟病菌的营养需求，又有利于其生长繁殖。

23、在稻瘟病穗瘟的培养和接种方面，本发明采用菌丝块接种至米糠培养基平板上的方法，并通过黑光灯照射和保湿培养，使得稻瘟病菌充分感染水稻植株。此外，苗瘟接种方法也充分考虑了接种体的浓度和接种方式，保证了接种的均匀性和有效性。

24、在评价方面，本发明通过观察稻穗上的病斑面积、病斑数量以及病斑的扩展速度，结合比较不同品种或不同处理措施下的抗性表现，能够更准确地评价水稻品种的稻瘟病抗性。同时，通过穗瘟发病情况调查，还可以进一步了解稻瘟病的发病规律和影响因素，为制定有效的防治措施提供科学依据。

25、综上所述，本发明通过改进稻瘟病穗瘟抗性鉴定的方法，提高了鉴定的准确性和可靠性，有助于筛选出具有优良抗性的水稻品种，并为稻瘟病的防治提供有力支持。

技术特征：

1.一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，包括稻瘟病穗瘟抗性鉴定方法，其特征在于：所述稻瘟病穗瘟抗性鉴定方法步骤包括：

2.根据权利要求1所述的一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，其特征在于：所述水稻培养包括菌株选择，培养基制备，稻瘟病穗瘟培养和苗瘟接种方法；

3.根据权利要求2所述的一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，其特征在于：所述培养基制备为淀粉培养基和米糠培养基；

4.根据权利要求2所述的一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，其特征在于：所述稻瘟病穗瘟培养为将选择的稻瘟病菌菌株置于可溶性淀粉培养基平板上28℃恒温黑暗培养7d，用灭菌的打孔器打取5mm的菌丝块，备用。将灭菌米糠培养基倒入直径9cm灭菌培养皿，每皿倒入30ml～40ml米糠培养基，制成米糠培养基平板，将菌丝块接种至米糠培养基平板上，28℃恒温黑暗培养10d，用无菌毛笔刷除表面菌丝体，将培养皿置于黑光灯下28℃保湿培养72h，每天光照时间为12h。

5.根据权利要求2所述的一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，其特征在于：所述苗瘟接种方法为水稻苗3～4叶期时，接种体中加入吐温80，使其在接种体中的浓度为0.1％(v/v)，傍晚时采用空压机(0.7mpa)进行喷雾接种，鉴定池每平方米喷施接种体80ml，每鉴定池喷施单个稻瘟病菌的接种体，接种后覆盖黑色薄膜，25℃～28℃保湿培育48h后，打开薄膜两端通风，接种72h后移去薄膜，25℃～28℃保湿。

技术总结本发明公开了一种提高稻瘟病穗瘟抗性鉴定准确性的方法，包括稻瘟病穗瘟抗性鉴定方法，选取水稻植株：在目标生态区多点采集并分离稻瘟病单孢菌株，然后进行稻瘟病菌单孢菌的分离、保存，对水稻植株进行培养：针对采集的不同稻瘟病单孢菌株，提取稻瘟病菌单孢菌的DNA，以DNA为模板，以稻瘟病菌无毒基因与致病基因设计引物，进行PCR扩增，对稻瘟病菌无毒基因与致病基因进行测定，本发明中，通过改进稻瘟病穗瘟抗性鉴定的方法，有效提高了鉴定的准确性。具体来说，本方法不仅涉及稻瘟病单孢菌株的采集、分离和保存，还涵盖了水稻植株的培养、稻瘟病穗瘟的分析、评价以及发病情况调查等多个方面。技术研发人员：张金霞,王书玉,黄金华,刘贺梅,孙建权,胡秀明,殷春渊,王和乐,张倩倩,邵性宽,胡胜利,王东海受保护的技术使用者：新乡市农业科学院技术研发日：技术公布日：2024/9/26