白毛多花蒿内酯A-K及其药物组合物和其制备方法与应用

：本发明属于药物。具体地涉及化合物白毛多花蒿内酯a-k(1-11)及其制备方法和应用，含其的药物组合物及其应用。

背景技术

0、背景技术：

1、肝癌(hepatic carcinoma)目前仍然是最常见最致命的恶性肿瘤之一，肝癌具有恶行程度高，进展迅速，预后差等特点，其死亡率几乎接近发病率，患者5年的生存率仅为12.1％。目前，临床用于治疗的肝癌的药物仅有九个，包括多激酶抑制剂索拉菲尼(sorafenib)、乐伐替尼(lenvatinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、卡博替尼(cabozantinib)、多纳非尼、重组lgg1单克隆抗体雷莫芦单抗(ramucirumab)以及两个免疫检查点抑制剂纳武单抗(nivolumab)和帕姆单抗(pembrolizumab)以及中药阿克拉定(icaritin)。但因上述药物作用靶点单一，易产生耐药性且有一定的毒副作用；因此，迫需开发新型有效且副作用低的抗肝癌药物。天然产物结构多样，具有多种生物活性，毒性低，特别是一些化合物在抗肿瘤方面具有独特的优势。

2、白毛多花蒿为菊科蒿属一年或多年生草本植物，为多花蒿一变种，多分布于中国(贵州、青海、四川、西藏以及云南等省份)、印度、缅甸和泰国北部等地。

3、目前为止，现有文献中尚无有关白毛多花蒿内酯a-k(1-11)的报道，没有其作为有效成分的药物组合物的报道，也没有其药物组合物在制备或治疗肝癌药物中的应用的报道。

技术实现思路

0、技术实现要素：

1、本发明的目的在于提供一类新的具有药用价值的式(i)所示的白毛多花蒿内酯a-k(1-11)及其制备方法和应用，含白毛多花蒿内酯a-k(1-11)的药物组合物及其应用，该类化合物对肝癌细胞株具有明显的抑制活性，能够用于制备抗肝癌药物。

2、为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

3、本发明提供了一系列倍半萜二聚体类化合物，白毛多花蒿内酯a-k(1-11)，具有如下式(i)所示结构：

4、

5、本发明提供了上述化合物1-11的制备方法；白毛多花蒿的干燥地上部分(48.0kg)，粉碎，用90％乙醇冷浸提取三次，每次3天，合并乙醇提取液，减压回收乙醇浸膏，随后进行硅胶柱层析，用丙酮-石油醚梯度洗脱(0:100,10:90,20:80,30:70,40:60,50:50)，tlc展开流份合并，得到七个流份fr.a-fr.g；流份fr.d(270.0g)经mci chp 20p柱层析，用水-甲醇梯度洗脱(70:30,50:50,30:70,10:90)得到四个流份fr.d-1-fr.d-4；流份fr.d-2(45.0g)经硅胶柱层析，用乙酸乙酯-石油醚梯度洗脱(10:90,20:80,30:70,40:60和50:50)得到五个流份fr.d-2a-fr.d-2e；流份fr.d-2b(29.7g)经rp-c18柱层析，用水-甲醇梯度洗脱(70:30,50:50,30:70,10:90)得到四个流份fr.d-2b-1-fr.d-2b-4；流份fr.d-2b-2(7.0g)经硅胶柱层析，用丙酮-石油醚(20:80)等度洗脱得到七个流份fr.d-2b-2a-fr.d-2b-2g；流份fr.d-2b-2e(1.4g)经硅胶柱层析，用乙酸乙酯-石油醚(20:80)等度洗脱后，随后经半制备hplc得到化合物7(12.0mg)；fr.d-2b-2e(1.3g)经硅胶柱层析后再经hplc分离得到化合物1(6.7mg)和4(12.0mg)；流份fr.d-2b-2f(36.0mg)经半制备hplc纯化得到化合物8(12.0mg)；流份fr.d-2b-3(18.5g)经硅胶柱层析，用甲醇-氯仿(5:95)等度洗脱得到四个流份fr.d-2b-3a-fr.d-2b-3d；流份fr.d-2b-3b(14.0g)经mci chp 20p柱层析，用水-甲醇梯度洗脱(50:50,40:60,30:70,20:80,0:100)后，再多次经硅胶柱层析和半制备hplc纯化得到化合物9(11.0mg)和10(7.0mg)；fr.d-2b-3d(480.0mg)先后经硅胶柱层析和半制备hplc分离后得到化合物3(10.6mg)和6(8.0mg)；流份fr.d-2c(5.0g)经两次硅胶柱层析后，得到六个流分fr.d-2c-4c-1-fr.d-2c-4c-6；流份fr.f-2c-4c-2(128.0mg)经半制备hplc纯化得到化合物2(8.2mg)和5(17.5mg)；流份fr.d-2c-4b(104mg)经半制备hplc分离后得到化合物11(12.0mg)。

6、本发明提供了上述化合物1-11在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。

7、本发明同时还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括上述的式(i)化合物1-11的至少一种和药学上可接受的载体。同时，本发明提供了所述药物组合物的制备方法，以制备化合物的上述方法得到化合物1-11，取化合物1-11中的至少一种，加入药学上可接受的载体即可。

8、并此，还提供了所述的药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。

9、当所述化合物1-11中的至少一种用于制备抗肝癌药物时，本发明优选将所述化合物1-11直接使用，或以药物组合物的形式使用。

10、本发明提供的药物组合物，包括上述化合物1-11中的至少一种和药学上可接受的载体。在本发明中，所述药学上可接受的载体优选为固体、半固体或液体稀释剂，填料以及药物制品辅剂。本发明对所述药学上可接受的载体没有特殊的限定，选用本领域熟知的、对人和动物无毒且惰性的药学上可接受的载体即可。

11、本发明对所述药物组合物的制备方法没有特殊的限定，直接将化合物1-11中的至少一种与药学上可接受的载体混合即可，本发明对所述混合的过程没有特殊的限定，选用本领域熟知的过程能够得到药物组合物即可。

12、本发明提供了上述技术方案所述药物组合物在制备抗肝癌药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的限定，选用本领域熟知的方法即可。

13、在本发明中，当所述药物组合物用于制备抗肝癌药物时，所述组合物在药物中的含量优选为0.1～99％；在所述药物组合物中，所述化合物1-11中的至少一种在药物组合物中的含量优选为0.5～90％。本发明的药物组合物优选以单位体重服用量的形式使用。在本发明中，所制备的药物优选可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。

14、与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：

15、1.本发明提供了一系列新的倍半萜二聚体类化合物白毛多花蒿内酯a-k(1-11)。本发明发现白毛多花蒿干燥地上部分的乙醇提取物对三株肝癌细胞(hepg 2、huh7和sk-hep-1)具有一定的抑制活性，进一步从中分离得到六个对三株肝癌细胞株具有抑制活性的倍半萜二聚体类化合物白毛多花蒿内酯a-k(1-11)。

16、2.本发明提供了制备新化合物1-11的新的方法，该方法原料易得，易于操作，适于工业化生成。

17、3.本发明提供了新化合物1-11作为有效成分的药物组合物，为新的抗肝癌药物提供了具有较好药用作用的新的药物。

18、4.本发明的化合物1-11对三株肝癌细胞(hepg2、sk-hep-1和huh7)均有抑制活性；对于hepg2细胞，化合物5和8具有较强的抑制活性，其ic50值分别为14.2和18.8μm，化合物6-7和9-10亦表现出一定的抑制活性，其ic50值范围为20.5-26.7μm；对于huh7细胞，化合物1-2、5-10表现出的ic50值范围为7.9-20.5μm，特别是化合物7展现出比阳性药物索拉菲尼更强的抑制活性，其ic50值为7.9μm；化合物5、8-10表现出的抑制活性与药物索拉菲尼相当，其ic50值得范围为9.0-11.5μm。对于sk-hep-1细胞，化合物5展现出的抑制活性比药物索拉菲尼更强，其ic50值为8.8μm，化合物7-8和10的抑制活性与索拉菲尼相当，其ic50值分别为9.4、11.3和9.1μm。以上结果表明白毛多花蒿中分离得到的化合物1-11可作为药物用于治疗肝癌相关的疾病。