一种刺五加遗传转化体系的构建方法

本发明涉及植物遗传转化领域，特别是涉及一种刺五加遗传转化体系的构建方法。

背景技术：

1、刺五加(acanthopanax senticosus(rupr.maxim.)harms)是五加科五加属的一种“药食同源”植物。刺五加的根和根茎是主要的药用部位，具有益气健脾和补气安神等药理作用。当前刺五加的栽培苗木多为野生资源的种子繁育而来，刺五加新品种选育尤其是分子育种刚刚起步，高效的遗传体系是分子育种的问题。

2、目前对于不同植物构建遗传转化体系的方法有很多，并且大多构建方法步骤相似，但是针对不同的植物的遗传特性、对环境的适应性和要求等存在差异，而刺五加虽然是常见的一种中药材植物，但是发明人根据常规遗传转化体系构建对培养基组分、培养条件等进行优化，愈伤组织再分化苗的获得率较低低，并且长势较差，根量少，成活率低，难以满足对于刺五加后期栽培种植的要求，因此，构建一种高效的刺五加遗传体系，解决目前刺五加遗传体系构建存在至关重要。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种刺五加遗传转化体系的构建方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法能够得到稳定遗传的抗性刺五加幼苗，为刺五加育种奠定基础。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种刺五加遗传转化体系的构建方法，包括以下步骤：

4、采用真空或者超声条件下农杆菌浸染刺五加新鲜茎段和叶片，之后转入共培养培养基共培养，再脱菌和筛选抗性愈伤组织；其中，在浸染和共培养阶段，在农杆菌浸染液和共培养培养基中添加氯化镧；

5、将筛选得到的抗性愈伤组织继续培养，得到抗性刺五加苗。

6、优选的是，所述真空或者超声的时间为20min。

7、优选的是，在农杆菌浸染液中，农杆菌的od600值为0.6，氯化镧的浓度为20mg/l。

8、优选的是，所述共培养培养基包括以下浓度的组分：1/2ms+20mg/l氯化镧。

9、优选的是，所述脱菌和筛选抗性愈伤组织包括以下步骤：采用加入头孢霉素和特美汀的灭菌水进行脱菌处理，后移至含头孢霉素和潮霉素的lb固体培养基中暗培养直至诱导出抗性愈伤组织。

10、优选的是，所述抗性愈伤组织继续培养的条件为：采用不含任何植物激素的固体ms基础培养，常温条件下培养。

11、本发明还提供一种刺五加增根壮苗的方法，利用所述方法构建的抗性刺五加苗，在壮苗培养基中常温培养，所述壮苗培养基包括以下组分：1/2ms+naa+hys或者1/2ms+hys。

12、优选的是，所述壮苗培养基为如下任意一项：

13、(1)1/2ms+0.5mg/l naa+5mg/l hys；

14、(2)1/2ms+5mg/l hys。

15、本发明公开了以下技术效果：

16、本发明通过对刺五加遗传转化过程中农杆菌浸染以及筛选抗性愈伤组织的条件进行改进和优化，得到最佳构建刺五加遗传转化体系的条件，并且通过该方法构建的遗传转化体系能够得到抗性刺五加幼苗，长势好且产生了大量的不定根，有利于抗性刺五加幼苗的成活。经观察和统计，本发明筛选得到的阳性抗性刺五加幼苗100％成活，这对于后期刺五加育种和栽培高效提供大量种质资源奠定基础。

技术特征：

1.一种刺五加遗传转化体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述真空或者超声的时间为20min。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在农杆菌浸染液中，农杆菌的od600值为0.6，氯化镧的浓度为20mg/l。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述共培养培养基包括以下浓度的组分：1/2ms+20mg/l氯化镧。

5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述脱菌和筛选抗性愈伤组织包括以下步骤：采用加入头孢霉素和特美汀的灭菌水进行脱菌处理，后移至含头孢霉素和潮霉素的lb固体培养基中暗培养直至诱导出抗性愈伤组织。

6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述抗性愈伤组织继续培养的条件为：采用不含任何植物激素的固体ms基础培养，常温条件下培养。

7.一种刺五加增根壮苗的方法，其特征在于，利用权利要求1-6任一项所述方法构建的抗性刺五加苗，在壮苗培养基中常温培养，所述壮苗培养基包括以下组分：1/2ms+naa+hys或者1/2ms+hys。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述壮苗培养基为如下任意一项：

技术总结本发明公开了一种刺五加遗传转化体系的构建方法，属于植物遗传转化领域。本发明采用真空或者超声条件下农杆菌浸染刺五加茎段和叶片，之后转入共培养培养基共培养，再脱菌和筛选抗性愈伤组织；其中，在浸染和共培养阶段，在农杆菌浸染液和共培养培养基中添加氯化镧；将筛选得到的抗性愈伤组织继续培养，得到抗性刺五加苗。本发明成功构建刺五加遗传转化体系，并得到稳定遗传的抗性刺五加幼苗，抗性刺五加幼苗不定根量大，长势好，这对刺五加育种和栽培具有重要意义。技术研发人员：范桂枝,仝亚倩,唐中华,高兴蕾受保护的技术使用者：东北林业大学技术研发日：技术公布日：2024/9/29