一种噬菌体及其应用、以及包括该噬菌体的微生态制剂的制作方法

本申请涉及水产防治的，尤其涉及一种噬菌体及其应用、以及包括该噬菌体的微生态制剂。

背景技术：

1、欧文斯氏弧菌是一种兼性厌氧菌，属于革兰氏阴性菌，通常存在于海洋环境中，也出现在淡水和河口等水域。同时，欧文斯氏弧菌也是一种条件致病菌，当环境条件异常或养殖动物体质下降时，往往会引起欧文斯氏弧菌相关疾病的暴发。欧文斯氏弧菌的致病对象包括水生动物，例如虾类。欧文斯氏弧菌可能导致虾类疾病的发生，例如急性肝胰腺坏死病(ahpnd)，故往往会对虾类养殖产业造成严重影响，进而会对水产养殖产业造成一定的经济损失。

2、目前，对弧菌的防治主要依赖于抗生素和化学药物。然而，随着抗生素和化学药物的滥用，导致的环境污染和“超级细菌”也引发了一系列问题。同时，抗生素和化学药物对水产病害的防治效果并不好，药效短、见效差且容易导致病原菌耐药性增强。

3、随着人们环保意识的提高以及可持续农业发展战略的实施，寻找环保、安全、有效的生物防治措施越来越被人们重视。不同于抗生素和化学药物，水产噬菌体微生态制剂是完全源于自然的黄色环保产品。水产噬菌体微生态制剂具有环境友好、对非靶标生物安全以及对水产病害具有特异性杀菌效果等优点，广泛应用于水产养殖领域和食品安全领域，在养殖业中替代抗生素用于防病抗病以及克服过量使用抗生素带来的致病菌、耐药性问题，已成为当前生物技术研究的热点。

4、然而，噬菌体对宿主具有高度专一性，一般情况下，一种噬菌体只能裂解一种宿主，因此，窄谱噬菌体用于水产噬菌体微生态制剂，不能解决在水产养殖过程中出现的多种细菌病害感染问题。

技术实现思路

1、本申请提供一种噬菌体及其应用、以及包括该噬菌体的微生态制剂。本申请提供的噬菌体噬菌谱广，能更有效地解决水产养殖中出现的多种细菌病害感染问题，同时还具有高度的安全性，在水产生物防治上具有良好的应用前景。

2、第一方面，本申请提供一种噬菌体。

3、本申请从福建省漳州市漳浦县地区南美对虾塘水样分离筛选出一种新的噬菌体，命名为噬菌体13vo501a。经过鉴定，该噬菌体是有尾噬菌体纲caudoviricetes的噬菌体，具体为欧文斯氏弧菌噬菌体13v0501a(vibrio owensii phage 13v0501a)。且全基因组已上传ncbi官网并获得genebank登录号oq622095.1。并将该噬菌体于2023年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc m 2023395，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。

4、本申请提供的噬菌体能同时裂解至少8种不同的宿主，包括能够裂解26株欧文斯氏弧菌、23株副溶血弧菌、15株哈维氏弧菌、9株坎氏弧菌、6株溶藻弧菌、5株霍乱弧菌、4株创伤弧菌、3株灿烂弧菌。同时，噬菌体离开宿主后无法独立生长和繁殖，也无法侵染其他生物，故不会导致生物危害和环境污染。

5、因此，本申请分离筛选到的新噬菌体具有高裂解能力，不仅能够有效抑菌杀菌，而且还具有高度的安全性，在水产生物防治上具有良好的应用前景。

6、可选地，所述噬菌体包括特异性基因片段vo1和特异性基因片段vo2；所述特异性基因片段vo1包括如seq id no 1所示的核苷酸序列；所述特异性基因片段vo2包括如seqid no 2所示的核苷酸序列。

7、可选地，所述特异性基因片段vo1的上游引物为seq id no 3所示的核苷酸序列，下游引物为seq id no 4所示的核苷酸序列。

8、可选地，所述特异性基因片段vo2的上游引物为seq id no 5所示的核苷酸序列，下游引物为seq id no 6所示的核苷酸序列。

9、可选地，所述噬菌体具有较强的耐高温性、耐酸碱性和紫外耐受能力。

10、可选地，所述噬菌体为宽谱噬菌体，能同时裂解至少8种不同种类的弧菌。

11、第二方面，本申请提供了一种微生态制剂。该微生态制剂包括上述噬菌体。

12、第三方面，本申请提供了一种噬菌体。微生态制剂在制备用于防治水产动物弧菌病害的组合物中的应用。

13、可选地，所述弧菌病害为单种弧菌或多种弧菌引起的弧菌病害。

14、综上所述，本申请包括以下至少一种有益技术效果：

15、1.本申请筛选获得的噬菌体于2023年3月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc m 2023395，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，全基因组已上传ncbi官网并获得genebank登录号oq622095.1。

16、2.本申请筛选获得的噬菌体为有尾噬菌体，头部形状为正廿面体，具有较强的耐高温性、一定的耐酸性、较强的耐碱性以及较强的紫外耐受能力。

17、3.本申请筛选获得的噬菌体可以同时裂解8种不同种的宿主菌，不仅对欧文斯氏弧菌有较好的裂解效果，而且能够裂解124株弧菌的91株，其中能裂解26株欧文斯氏弧菌、23株副溶血弧菌、15株哈维氏弧菌、9株坎氏弧菌、6株溶藻弧菌、5株霍乱弧菌、4株创伤弧菌和3株灿烂弧菌。

18、4.相较于其他噬菌体，本申请筛选获得的噬菌体(噬菌体13vo501a)裂解能力更强，宿主谱更广，能在实际运用中更有效地解决水产养殖中出现的多种细菌病害感染问题。

19、5.在实际运用中，本申请筛选获得的噬菌体(噬菌体13vo501a)作为宽谱噬菌体具有明显的优势，能显著降低南美对虾的死亡率，从而降低水产养殖中欧文斯氏弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌3种弧菌带来的危害。

20、6.本申请提供的微生态制剂对南美对虾生长未有影响，且对南美对虾欧文斯氏弧菌病害有明显的预防与治疗效果。

技术特征：

1. 一种噬菌体，其特征在于，所述噬菌体的保藏编号为cctcc m 2023395。

2. 根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体是有尾噬菌体纲caudoviricetes的噬菌体，全基因组在ncbi官网的genebank登录号为 oq622095.1。

3. 根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体包括特异性基因片段vo1和特异性基因片段vo2；所述特异性基因片段vo1包括如seq id no 1所示的核苷酸序列；所述特异性基因片段vo2包括如seq id no 2所示的核苷酸序列。

4. 根据权利要求3所述的噬菌体，其特征在于，所述特异性基因片段vo1的上游引物为seq id no 3所示的核苷酸序列，下游引物为seq id no 4所示的核苷酸序列。

5. 根据权利要求3所述的噬菌体，其特征在于，所述特异性基因片段vo2的上游引物为seq id no 5所示的核苷酸序列，下游引物为seq id no 6所示的核苷酸序列。

6.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体具有较强的耐高温性、耐酸碱性和紫外耐受能力。

7.根据权利要求1所述的噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为宽谱噬菌体，能同时裂解至少8种不同种类的弧菌。

8.一种微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂包括权利要求1-7中任一项所述的噬菌体。

9.一种权利要求1-7中任一项所述的噬菌体、权利要求8所述微生态制剂在制备用于防治水产动物弧菌病害的组合物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述弧菌病害为单种弧菌或多种弧菌引起的弧菌病害。

技术总结本申请涉及水产防治的技术领域，具体涉及一种噬菌体及其应用、以及包括该噬菌体的微生态制剂。该噬菌体的保藏编号为CCTCC M 2023395，是有尾噬菌体纲的噬菌体，全基因组在NCBI官网的GeneBank登录号为OQ622095.1。本申请提供的噬菌体能同时裂解至少8种不同的宿主，包括能够裂解26株欧文斯氏弧菌、23株副溶血弧菌、15株哈维氏弧菌、9株坎氏弧菌、6株溶藻弧菌、5株霍乱弧菌、4株创伤弧菌、3株灿烂弧菌。因此，本申请分离筛选到的新噬菌体具有高裂解能力，不仅能够有效抑菌杀菌，而且还具有高度的安全性，在水产生物防治上具有良好的应用前景。技术研发人员：陈德国,林茂,敬科举,蒋诗涛,刘裴清,童桂香,房文红受保护的技术使用者：厦门昶科生物工程有限公司技术研发日：技术公布日：2024/9/29