猫SAA蛋白的双特异性抗体及其用途的制作方法

本发明涉及免疫学相关。更具体地说，本发明涉及一种猫saa蛋白的双特异性抗体及其用途。

背景技术：

1、急性时相反应(acute-phase response,apr)是由局部炎症所触发的系统性反应，在急性和慢性炎症中都能见到。血清淀粉样蛋白(saa)是apr期间大量产生的主要急性期蛋白质。目前，saa浓度的升高已成为炎症的临床敏感标志物。saa除了表征的炎性因子之外，它可能在炎症过程中起稳态作用。

2、saa是组织淀粉样蛋白a的前体物质，是一种由肝脏细胞产生的急性时相反应蛋白。在正常猫的血清中saa以恒量存在，但在炎症或感染急性期的6-8h内saa可增加数百至上千倍，血液中saa含量在24-48h达到峰值，清除病原体后又可迅速的降低至正常水平，是反映机体感染情况和炎症恢复的灵敏指标，是一种灵敏的诊断细菌或病毒感染的标志物。saa升高见于病毒、支原体、细菌感染，且敏感性高于crp；猫crp在细菌感染，病毒及支原体等病原体感染不升高或仅轻微升高，可为临床提供更好的参考价值。

3、一般来说，高密度脂蛋白(hdls)被认为是抗动脉粥样硬化的。在研究hdl蛋白质组成的实验中发现，急性期蛋白血清淀粉样蛋白a可能掺入到hdl颗粒中。有研究表明saa是心血管死亡率的强有力标志物。

4、在兽医学中，血液中的saa测量可用于亚临床炎症的诊断，监测有感染或炎症条件下的动物的治疗效果，以及监测正在接受手术的患者。目前市面上用于检测saa浓度的工具，主要还是利用酶联免疫分析法(elisa)进行定量。上述监测方法的问题是耗时较长，或者测定结果不太精确。

技术实现思路

1、本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

2、本发明还有一个目的是提供一种猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段及其用途。

3、为此，本发明提供的技术方案为：

4、第一方面，猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，包括：

5、特异性识别和结合猫saa蛋白的第一功能域，所述第一功能域包括抗猫saa双特异性抗体的scfv1，所述scfv1的重链可变区vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq idno:1、2和3所示，所述scfv1的轻链可变区vl cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq idno:4、5和6所示；以及

6、特异性识别和结合猫saa蛋白的第二功能域，所述第二功能域包括抗猫saa双特异性抗体的scfv2区，所述scfv2的重链可变区vh cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seqid no:7、8和9所示，所述scfv2的轻链可变区vl cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seqid no:10、11和12所示。

7、优选的是，所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，所述scfv1的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:13所示，所述scfv1的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:14所示。

8、优选的是，所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，所述scfv2的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:15所示，所述scfv2的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:16所示。

9、优选的是，所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，所述scfv1的重链可变区和轻链可变区通过linker连接，所述scfv2的重链可变区和轻链可变区也通过linker连接，所述linker为(g4s)n。

10、进一步地，所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段中，n为3。

11、第二方面，编码上述猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段的基因。

12、第三方面，包括上述基因的重组载体。

13、第四方面，用于快速诊断猫炎症和组织损伤的组合物，其包含上述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段。

14、第五方面，试剂盒，所述试剂盒包括上述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，所述试剂盒是胶乳增强免疫法或化学发光免疫法体外快速检测猫saa试剂盒。

15、优选的是，所述的试剂盒中，所述试剂盒用于检测猫血浆中的saa蛋白。

16、第六方面，上述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段于制备猫炎症和组织损伤程度评估及预后评估的药物或试剂盒中的用途。

17、本发明至少包括以下有益效果：

18、本发明首先筛选出针对猫saa蛋白高亲和力的两个单克隆抗体，再通过基因工程手段得到一种基因重组的猫saa双特异性抗体，并将其用于leia法检测猫saa，该方法的试剂盒灵敏度更高，检测范围更广，其可用于不同的临床诊断需求。

19、本发明能够快速动态监测猫血浆saa浓度，对猫炎症和组织损伤尽早诊断和治疗具有重要指示意义。

20、本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

技术特征：

1.猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述scfv1的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:13所示，所述scfv1的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:14所示。

3.如权利要求1所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述scfv2的重链可变区vh的氨基酸序列如seq id no:15所示，所述scfv2的轻链可变区vl的氨基酸序列如seq id no:16所示。

4.如权利要求1所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，其特征在于，所述scfv1的重链可变区和轻链可变区通过linker连接，所述scfv2的重链可变区和轻链可变区也通过linker连接，所述linker为(g4s)n。

5.编码如权利要求1至4任一项所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段的基因。

6.包括如权利要求5所述的基因的重组载体。

7.用于快速诊断猫炎症和组织损伤的组合物，其特征在于，其包含如权利要求1至4任一项所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段。

8.试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1至4任一项所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，所述试剂盒是胶乳增强免疫法或化学发光免疫法体外快速检测猫saa试剂盒。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测猫血浆中的saa蛋白。

10.如权利要求1至4任一项所述的猫saa蛋白的双特异性抗体或其功能性片段于制备猫炎症和组织损伤程度评估及预后评估的药物或试剂盒中的用途。

技术总结本发明公开了猫SAA蛋白的双特异性抗体或其功能性片段，包括：特异性识别和结合猫SAA蛋白的第一功能域和第二功能域，第一功能域的VH CDR1、CDR2、CDR3，VL CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1～6所示，第二功能域的VH CDR1、CDR2、CDR3，VL CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:7～12所示。本发明还公开了猫SAA蛋白的双特异性抗体或其功能性片段于制备猫炎症和组织损伤程度评估及预后评估的药物或试剂盒中的用途。本发明能够快速动态监测猫血浆SAA浓度，对猫的炎症和组织损伤尽早诊断和治疗具有重要指示意义。技术研发人员：肖秀孝,刘鹏飞,许可,郑长龙,赵占勇受保护的技术使用者：北京达成生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10