核苷制剂的制作方法

本发明的说明书涉及一种核苷制剂，其包含核苷或其磷酸酯(phosphate)；以及来自rala肽家族的两亲性细胞穿透肽。本发明的说明书还涉及制备核苷制剂的方法以及核苷制剂在治疗中的用途。

背景技术：

1、核苷类似物是一类重要的抗病毒剂，现在常用于治疗病毒感染和癌症。核苷类似物一旦进入体内就会被磷酸化，并作为链终止剂掺入增长的dna链中。

2、核苷类似物存在三个主要问题，以吉西他滨所带来的问题为例：

3、1)有害的副作用，如骨髓抑制、肝肾问题和恶心，因为药物广泛分布在体内并进入其他非肿瘤细胞因而限制了可以给予患者的剂量；2)极短的药物稳定性和半衰期(经测定为几分钟)，需要高剂量输注，进一步增加了毒性风险；以及3)药物抗性突变迅速出现，导致总体临床反应率低。

4、核苷类似物吉西他滨是用于治疗多种不同类型癌症的化疗药物，最早在1995年批准使用。对于胰腺癌、以及治疗先前疗法失败的患者的其他癌症，采用吉西他滨作为一线疗法。胰腺癌的5年生存率仍然仅为约9％(国家统计局，英国癌症诊断分期生存率，2019)，并且胰腺癌造成全世界每年将近450,000例死亡，占所有癌症死亡数的4.5％(据globocan2018估算)。吉西他滨一旦进入体内就会通过分子转运蛋白转运到细胞中。然后经过三次磷酸化，产生药理活性形式的吉西他滨三磷酸酯(dfdctp)。然后当癌细胞复制时，吉西他滨三磷酸酯掺入dna中，产生不可修复的错误，导致抑制了进一步dna的合成并且细胞最终死亡。

5、遗憾的是，吉西他滨的总体临床反应率低，为6％(ioka t,et al.jpn j clinoncol.2013feb；43(2):139-45)。此外，已经鉴定出多种药物抗性机制与以下因素有关：细胞摄取所需的活性转运蛋白的突变；使吉西他滨失活的代谢酶的上调；以及将吉西他滨转化为活性三磷酸酯形式的细胞酶的下调(kim ha,et al.breast.2008feb；17(1):19-26)。

6、毫无疑问，需要这样的核苷类似物的制剂：其将改善细胞摄入、旁路抗性机制、增加累积并改善半衰期和药物稳定性。此外，可将诸如吉西他滨之类的药物的活性形式(例如三磷酸酯形式)递送至细胞中的药物递送系统可能会自动避开导致药物抗性的一些机制(galmarini cm,et al.int j pharm.2010aug 16；395(1-2):281-9)。

7、rala肽家族是由重复rala单元组成的两亲性肽，其能够在体外和体内克服基因递送的生物屏障。术语“rala”在文献中的使用不一致，但通常是指由大概少于约50个氨基酸残基的重复rala单元组成的两亲性肽或肽组。cohen-avrahami m等人(j.phys.chem.b2011,115:10 189-1 097以及colloids surf b biointerfaces.2010jun1；77(2):131-8)公开了被称为“rala”的两亲性16聚体肽。nouri fs等人(biomacromolecules 2013,14,2033-40)使用术语“rala”描述了30聚体rala肽，mccarthy ho等人(j controlrelease.2014sep10；189:141-9)也是如此，但描述的是不同的30聚体肽。wo 2014/087023和wo 2015/189205将术语“rala”定义为落入本文所述发明的范围内的一组肽的通用术语。

8、rala肽家族已被用于递送遗传物质，例如质粒dna(mccarthy ho,et al.,jcontrol release.2014sep 10；189:141-9)和(ali aa,et al.,nanomedicine.2017apr；13(3):921-932)、mrna(udhayakumar et al.,adv healthc mater.2017jul；6(13))、sirna(mulholland ej,et al.,jcontrol release.2019dec 28；316:53-65)以及小分子，例如双膦酸盐类(jena ln,et al.,j.nanobiotechnology.2021may 4；19(1):127)和磷酸钙(sathy bn et al.,j.mater.chem.b.2017mar 7；5(9):1753-1764)。

9、特异性rala肽wearlaralaralarhlaralaralracea(seq id_no 1)是30个氨基酸、无毒的肽，在生理ph下带有+6个电荷，在细胞的内涵体中建立的酸性条件下转化为+8螺旋细胞穿透构象。已经表明，当在水中与某些有效负载例如dna和mrna复合时，其能够自发地自组装成纳米颗粒(mccarthy ho,et al.,j control

10、release.2014sep 10；189:141-9和udhayakumar et al.,adv healthc

11、mater.2017jul；6(13))。这种ph依赖性变化使肽和货物(cargo)能够在细胞内逃逸，产生高效的细胞摄入和货物递送，而在细胞外的生理ph7.4下没有任何相关毒性。已经表明，纳米颗粒在一定的温度范围内和随着时间的推移是极其稳定的，并且rala肽本身不会引起免疫应答。

12、本技术描述了核苷类和/或它们的磷酸酯的改进制剂，将它们与来自rala肽家族的两亲性细胞穿透肽一起配制。当在水中混合时，该制剂能够自发形成纳米颗粒。该制剂能够改善靶选择性递送，具有降低脱靶毒性的潜力，同时改善药代动力学，增强药效动力学，并且避开耐药性机制，从而促进以较低剂量实现更有效的治疗效果。这些改进的性质可为针对新的适应症使用核苷类似物家族的化合物及其磷酸酯提供可能性。当核苷或其磷酸酯为吉西他滨的药理活性形式吉西他滨三磷酸酯时，与现有的吉西他滨制剂相比，所述纳米颗粒具有优越的肿瘤选择性递送，具有更长的循环半衰期，并且在静脉内施用后，在实体瘤中产生了比体内其他部位高2倍的药物累积。

技术实现思路

1、本说明书部分地描述了一种核苷制剂，其包含：核苷或其磷酸酯；以及两亲性细胞穿透肽，其包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：wearlaralaralarhlaralaralracea(seq

2、id_no 1)或与其具有至少80％的序列同一性或同源性的序列。

3、本说明书还部分地描述了一种核苷制剂，其包含：吉西他滨或其磷酸酯；以及两亲性细胞穿透肽，其包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列组成：wearlaralaralarhlaralaralracea(seq id_no 1)或与其具有至少80％的序列同一性或同源性的序列。

4、本说明书还部分地描述了如本文所述的核苷制剂及其制备方法，其中所述制剂为纳米颗粒制剂。

5、本说明书还部分地描述了如本文所述的核苷制剂在治疗中的用途、特别是在治疗病毒感染和治疗癌症中的用途。