抑制AGT基因表达的双链寡核苷酸、其缀合物及用途的制作方法

本公开涉及小核酸药物递送，具体涉及一种抑制agt基因表达的双链寡核苷酸、其缀合物及用途。

背景技术：

1、血管紧张素原（agt），也被称为serpina8或anhu，是serpin家族的成员并且是肾素-血管紧张素-醛固酮系统（raas）的组分，raas在血压调节中起着关键作用。肾脏的近肾小球细胞将肾素分泌至循环中。它主要在肝脏中产生，并且释放到循环中，在此处肾素将其转化为血管紧张素i。随后通过血管紧张素转化酶（ace）将血管紧张素i转化成血管紧张素ii。血管紧张素ii是引起血管收缩的肽激素，其进而可以增加血压。血管紧张素ii也刺激肾上腺皮质的激素醛固酮的分泌。醛固酮使肾脏增加钠和水的重吸收，导致体内流体体积的增加，进而可以增加血压。raas途径的过度刺激或活动可导致高的血压。慢性高的血压被称为高血压。高血压患者的高的血压需要心脏更加努力地使血液循环通过血管。

2、高血压是各种疾病、病症和病状的主要危险因素。尽管可用于治疗高血压的抗压药数量大，但超过三分之二的受试者用一种抗压药不能得到控制并且需要两种或更多种选自不同药物类别的抗压药。由于依从性和副作用随着用药增加而增加，这进一步降低了具有受控血压的受试者的数量。

3、因此，本公开提供一种抑制agt基因表达的双链寡核苷酸及其缀合物，对于改善高血压患者的病程、缓解、预防和/或治疗由agt基因介导的疾病或病症具有重要意义。

技术实现思路

1、本公开提供一种抑制agt基因表达的双链寡核苷酸及其缀合物，所述双链寡核苷酸及其缀合物可诱导沉默复合体（risc）-介导的血管紧张素原（agt）基因的rna转录物的切割，抑制agt基因的表达，从而有助于缓解、预防和/或治疗由血管紧张素原（agt）基因介导的疾病或病症。

2、在本公开的第一方面，本公开提供一种双链寡核苷酸，其特征在于，所述双链寡核苷酸包括正义链和反义链；

3、所述反义链包含5’-gguacucucauuguggaugac-3’中的至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个或至少21个连续核苷酸的核苷酸序列，或包含与该连续核苷酸之间具有1、2或3个核苷酸差异的核苷酸序列。

4、所述正义链包含至少17个核苷酸且所述正义链与所述反义链互补或基本互补形成双链体区；所述基本互补是指所述正义链和所述反义链在所述双链体区的错配不超过3个核苷酸。

5、所述双链寡核苷酸中的每个核苷酸独立地选自经修饰的核苷酸；其中，所述反义链中核苷酸序列的第2、6、9-12、14和16位的核苷酸中的至少四个核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸或2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸。

6、在本公开的一些实施方式中，所述反义链包含与5’-gguacucucauuguggaugac-3’具有0个、1个、2个或3个核苷酸差异的序列。

7、在本公开的一些实施方式中，所述反义链包含与5’-gguacucucauuguggaugac-3’具有0个或1个核苷酸差异的序列。

8、在本公开的一些实施方式中，所述反义链选自5’-gguacucucauuguggaugac-3’。

9、在本公开的一些实施方式中，所述正义链包括5’-cauccacaaugagaguacc-3’中的至少17个、至少18个或至少19个连续核苷酸的核苷酸序列，或包含与该连续核苷酸之间具有1、2或3个核苷酸差异的核苷酸序列。

10、在本公开的一些实施方式中，所述正义链包括与5’-cauccacaaugagaguacc-3’具有0个、1个、2个或3个核苷酸差异的核苷酸序列。

11、在本公开的一些实施方式中，所述正义链包括与5’-cauccacaaugagaguacc-3’具有0个或1个核苷酸差异的序列。

12、在本公开的一些实施方式中，所述正义链选自5’-cauccacaaugagaguacc-3’。

13、根据本公开的实施例，所述正义链和/或反义链包含具有至少1个或至少2个核苷酸的3'突出端和/或5'突出端。

14、在本公开的一些实施方式中，所述反义链包含具有至少1个或至少2个核苷酸的3'突出端。

15、在本公开的一些实施方式中，所述反义链包含具有2个核苷酸的3'突出端。

16、根据本公开的实施例，所述正义链和/或所述反义链独立地包含一个或多个硫代磷酸酯键。

17、在本公开的一些实施方式中，所述正义链在5'末端的末端核苷酸之间包含两个连续的硫代磷酸酯键。

18、在本公开的一些实施方式中，所述反义链在3'末端和5'末端的末端核苷酸之间分别包含两个连续的硫代磷酸酯键。

19、根据本公开的实施例，所述双链寡核苷酸中的所有核苷酸独立地选自经修饰的核苷酸。

20、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸中的每个核苷酸独立地选自下列经修饰的核苷酸：

21、2'-卤代修饰的核苷酸、2'-脱氧修饰的核苷酸、2'-o-任选取代的c1-6烷基修饰的核苷酸、2'-o-(ch2)n-o-r1修饰的核苷酸、2'-o-si(r2)3修饰的核苷酸、2'-氨基修饰的核苷酸、脱碱基核苷酸、或者类核苷酸；所述类核苷酸选自pna、mna、bna、lna、gna、tna和una中的一种或多种；

22、其中，n选自1或2，r1选自任选取代的c1-6烷基或任选取代的c1-6烷氧基；

23、每个r2独立地选自任选取代的c1-6烷基；

24、所述任选取代指的是所述烷基上的一个或多个氢原子被取代基取代，所述取代基独立地选自c1-3烷基、c1-3烷氧基或卤素。

25、在本公开的一些实施方式中，所述2'-卤代修饰的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸。

26、在本公开的一些实施方式中，所述2'-o-任选取代的c1-6烷基修饰的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸。

27、在本公开的一些实施方式中，所述2'-o-(ch2)n-o-r1修饰的核苷酸选自2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸、2'-o-乙氧基甲基修饰的核苷酸或2'-o-2,2,2-三氟乙氧基甲基修饰的核苷酸。

28、在本公开的一些实施方式中，所述2'-o-(ch2)n-o-r1修饰的核苷酸选自2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸。

29、在本公开的一些实施方式中，所述2'-o-si(r2)3修饰的核苷酸选自2'-o-tbdms修饰的核苷酸、2'-o-tips修饰的核苷酸或2'-o-tom修饰的核苷酸。

30、根据本公开的实施例，所述双链寡核苷酸中的每个核苷酸独立地选自下列经修饰的核苷酸：

31、2'-氟修饰的核苷酸、2'-脱氧修饰的核苷酸、2'-o-甲基修饰的核苷酸、2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸或2'-o-乙氧基甲基修饰的核苷酸。

32、在本公开的一些实施方式中，所述正义链和/或所述反义链含有至少一个2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸或2'-o-乙氧基甲基修饰的核苷酸。

33、在本公开的一些实施方式中，所述正义链和/或所述反义链含有至少一个2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸。

34、根据本公开的实施例，按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链中核苷酸序列的第7-10位的核苷酸中的至少三个核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸独立地选自2'-o-甲基修饰的核苷酸或2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸；所述反义链中核苷酸序列的第2、6、9-12、14和16位的核苷酸中的至少四个核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸或2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸。

35、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸的每个核苷酸独立地选自经修饰的核苷酸，其中所述正义链和所述反义链的修饰选自下列（1）-（4）中的任一种：

36、（1）按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链中核苷酸序列的第7-10位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；所述反义链中核苷酸序列的第2、6、9、14和16位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；

37、（2）按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链中核苷酸序列的第7-10位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；所述反义链中核苷酸序列的第2、6、12、14和16位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；

38、（3）按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链中核苷酸序列的第7-10位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；所述反义链中核苷酸序列的第2、6、9、14和16位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，第15位的核苷酸选自2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；

39、（4）按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链中核苷酸序列的第7-10位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；所述反义链中核苷酸序列的第2、6、12、14和16位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，第15位的核苷酸选自2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；

40、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸选自组1-组4中的至少一组：

41、

42、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸选自sirna。

43、在本公开的一些实施方式中，所述双链寡核苷酸正义链选自5’-cauccacaaugagaguacc-3’， 按照5'末端到3'末端的方向，所述正义链中核苷酸序列的第7-10位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸；所述反义链选自5’-gguacucucauuguggaugac-3’，按照5'末端到3'末端的方向，所述反义链中核苷酸序列的第2、6、9、14和16位的核苷酸选自2'-氟代修饰的核苷酸，第15位的核苷酸选自2'-o-甲氧基乙基修饰的核苷酸，其余位置的核苷酸选自2'-o-甲基修饰的核苷酸。

44、在本公开的第二方面，本公开提供一种sirna缀合物，其特征在于，所述缀合物包括：本公开第一方面所述的双链寡核苷酸和一个或多个能够与细胞受体结合的配体，所述配体缀合到所述双链寡核苷酸上。

45、根据本公开的实施例，所述配体特异性靶向肝组织。

46、在本公开的一些实施方式中，所述配体选自与去唾液酸糖蛋白受体亲和的配体。

47、在本公开的一些实施方式中，所述配体包含半乳糖或其衍生物。

48、在本公开的一些实施方式中，所述半乳糖的衍生物选自n-乙酰基半乳糖胺。

49、在本公开的一些实施方式中，所述正义链5'末端、所述正义链的中间位置、所述正义链3'末端、所述反义链5'末端、所述反义链的中间位置和所述反义链3'末端中的至少一个位置缀合有所述配体。

50、在本公开的一些实施方式中，所述配体的数量选自一个，一个所述配体缀合到所述正义链的3'末端。

51、在本公开的一些实施方式中，所述配体选自如式(201)所示的结构或其药学上可接受的盐：

52、

53、其中，*代表所述配体与所述双链寡核苷酸的缀合位点；

54、j选自1、2、3或4；

55、每个z独立地选自羟基或巯基；

56、每个h独立地选自1、2或3；

57、每个i独立地选自1、2或3；

58、每个r3独立地选自h、任选取代的c1-6烷基或任选取代的c1-6烷氧基；

59、每个l独立地选自任选取代的c2-20亚烷基或；rla和rlb独立地选自任选取代的c1-10亚烷基，k选自1、2、3、4或5；

60、每个y独立地选自o、s或nh；

61、在本公开的一些实施方式中，j选自1、2或3；

62、在本公开的一些实施方式中，j选自3；

63、在本公开的一些实施方式中，z选自羟基；

64、在本公开的一些实施方式中，h选自1；

65、在本公开的一些实施方式中，i选自1；

66、在本公开的一些实施方式中，r3选自h；

67、在本公开的一些实施方式中，每个l独立地选自c1-10亚烷基或；其中，rla和rlb独立地选自c1-5亚烷基，k为1、2或3；

68、在本公开的一些实施方式中，k选自1；

69、在本公开的一些实施方式中，每个l独立地选自、、、、、、、、、、、、、或；

70、在本公开的一些实施方式中，y选自o。

71、在本公开的一些实施方式中，所述配体选自如式(202)所示的结构或其药学上可接受的盐：

72、；

73、在本公开的一些实施方式中，所述配体选自如下任一结构或其药学上可接受的盐：

74、，

75、在本公开中命名为(cr01008)×3。

76、在本公开的具体实施方式中，所述sirna缀合物选自1）-4）中的至少一项：

77、1）所述sirna缀合物的正义链为：cmsamsumcmcmamcfafafufgmamgmamgmumamcmcm_(cr01008)×3，

78、所述反义链为gmsgfsumamcmufcmumcfamumumgmufgmgfamumgmsamscm；或者

79、2）所述sirna缀合物的正义链为：cmsamsumcmcmamcfafafufgmamgmamgmumamcmcm_(cr01008)×3，

80、所述反义链为gmsgfsumamcmufcmumcmamumufgmufgmgfamumgmsamscm；或者

81、3）所述sirna缀合物的正义链为：cmsamsumcmcmamcfafafufgmamgmamgmumamcmcm_(cr01008)×3，

82、所述反义链为gmsgfsumamcmufcmumcfamumumgmufg(moe)gfamumgmsamscm；或者

83、4）所述sirna缀合物的正义链为：cmsamsumcmcmamcfafafufgmamgmamgmumamcmcm_(cr01008)×3，

84、所述反义链为gmsgfsumamcmufcmumcmamumufgmufg(moe)gfamumgmsamscm。

85、在本公开的第三方面，本公开提供如下任意项在制备用于缓解、治疗和/或预防agt介导的疾病或病症的药物中的用途：

86、（i）本公开第一方面所述的双链寡核苷酸；和/或

87、（ii）本公开第二方面所述的缀合物；

88、在本公开的一些实施方式中，所述疾病或病症包括高血压、临界性高血压、原发性高血压、继发性高血压、高血压危症、高血压急迫状态、孤立性收缩期和舒张期高血压、妊娠相关的高血压、糖尿病性高血压、顽固性高血压、难治性高血压、阵发性高血压、肾血管性高血压、戈德布拉特氏高血压、高眼压症、青光眼、肺动脉高压、门静脉高压、系统性静脉高血压、收缩期高血压、不稳定性高血压；高血压性心脏病、高血压性肾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、血管病、糖尿病性肾病、糖尿病性视网膜病、慢性心力衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、肾小球硬化症、主动脉缩窄、主动脉瘤和心室纤维化。

89、在本公开的第四方面，本公开提供一种药物组合物，所述药物组合物包括如下任意项以及药学上可接受的辅料或助剂：

90、（i）本公开第一方面所述的双链寡核苷酸；和/或

91、（ii）本公开第二方面所述的缀合物。

92、在本公开的一些实施方式中，所述药物组合物用于调节血管紧张素原agt的表达。

93、本公开提供的双链寡核苷酸及其缀合物能可诱导沉默复合体（risc）-介导的血管紧张素原（agt）基因的rna转录物的切割，抑制agt基因的表达。本公开提供的双链寡核苷酸及其缀合物有助于缓解、预防和/或治疗由血管紧张素原（agt）基因介导的疾病或病症。