一种索玛鲁肽侧链及其手性异构体的高效液相色谱检测方法与流程

：本发明属于药物分析，具体涉及检测索玛鲁肽侧链及其手性异构体的高效液相色谱法。

背景技术

0、背景技术：

1、索玛鲁肽(semaglutide)是由丹麦诺和诺德公司(novonordisk)开发的新一代glp-1(胰高血糖素样肽-1)类似物，分子式为c187h291n45o59，分子量为4113.58，cas号为910463-68-2，结构如式i所示。索玛鲁肽是基于利拉鲁肽基本结构而开发的长效剂型，其治疗2型糖尿病的效果更好。

2、2017年12月5日，fda批准诺和诺德的索玛鲁肽上市，用于辅助饮食和运动以改善2型糖尿病患者的血糖控制。2019年9月20日，fda正式批准其用于结合饮食和运动以改善2型糖尿病患者的血糖控制。

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4、式i索马鲁肽结构式

5、索玛鲁肽侧链是合成索玛鲁肽的重要原料，cas号为1118767-16-0，结构如式ii所示。索玛鲁肽侧链手性直接影响索玛鲁肽的手性，而索玛鲁肽侧链与其手性异构体(结构如式iii所示)分离的方法至今未见报道，因此，提供一种高效简便的分离索玛鲁肽侧链及其手性异构体的方法是本领域急需解决的技术问题。

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7、式ii索马鲁肽侧链结构式

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9、式iii索马鲁肽侧链手性异构体结构式

技术实现思路

0、技术实现要素：

1、本发明的目的是提供一种快速、简便、高效的检测索玛鲁肽侧链及其手性异构体的色谱分离方法。

2、一方面，本发明提供了索玛鲁肽侧链的衍生方法，具体路线如scheme1所示。

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4、scheme1索玛鲁肽侧链衍生物合成路线

5、本发明采用的衍生技术方案如下：将索玛鲁肽侧链与n-羟基丁二酰亚胺反应制得中间体1，然后再与l-苯丙氨酸反应制得索玛鲁肽侧链l-苯丙氨酸衍生物。

6、进一步，将索玛鲁肽侧链手性异构体与n-羟基丁二酰亚胺反应制得中间体，继而与l-苯丙氨酸反应制得索玛鲁肽侧链手性异构体的l-苯丙氨酸衍生物。

7、另一方面，本发明提供了索玛鲁肽侧链及其手性异构体的检测方法。

8、本发明采用的检测方法如下：先将索玛鲁肽侧链以l-苯丙氨酸衍生后，选用大赛璐as-h色谱柱，以加入三氟乙酸的异丙醇、乙醇和正己烷混合溶液为流动相，流动相的体积比为异丙醇:乙醇:正己烷:三氟乙酸＝10～15:10～15:80～70:0.1，流速为0.4～0.6ml/min进行等度洗脱，。

9、进一步，所述大赛璐as-h色谱柱为多糖涂敷型手性柱，其固定相为硅胶表面涂敷直链淀粉-三[(s)-α-苯乙基氨基甲酸酯]。

10、更进一步，所述大赛璐as-h色谱柱的规格为250mm*4.6mm*5um。

11、进一步，所述色谱柱的柱温选自20～30℃，优选25℃。

12、进一步，所述流动相为加入三氟乙酸的异丙醇、乙醇和正己烷的混合溶液。

13、更进一步，所述流动相的体积比为异丙醇:乙醇:正己烷:三氟乙酸＝10～15:10～15:80～70:0.1，优选异丙醇:乙醇:正己烷:三氟乙酸＝10:10:80:0.1。

14、更进一步，所述流动相流速为0.4～0.6ml/min，优选0.5ml/min。

15、进一步，选用乙腈做为配制待测样品的稀释剂。

16、进一步，进样量为0.5～2ul，优选1ul。

17、进一步，所述检测波长为200～210nm，优选200nm。

18、进一步，在我们的检测条件下，最先出峰的是衍生试剂l-苯丙氨酸，其后出峰的是索玛鲁肽侧链手性异构体的l-苯丙氨酸衍生物，最后出峰的是索马鲁肽侧链的l-苯丙氨酸衍生物，相邻峰之间的分离度均大于1.5，完全符合基线分离的要求。

19、本发明的有益效果在于，本发明通过提供一种先将索马鲁肽侧及其手性异构体衍生再用高效液相色谱检测的方法，该化合物衍生后提高了其吸收强度同时改善化合物的保留性质，实现良好的分离效果，从而能够准确地测定出索马鲁肽侧链衍生物及其手性异构体的含量，进而判断索马鲁肽侧链及其手性异构体的含量。该方法快速、简便、高效，可以较好地控制索马鲁肽侧链的手性质量以及稳定性。

技术特征：

1.一种索玛鲁肽侧链及其手性异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，以l-苯丙氨酸为衍生试剂，先索玛鲁肽侧链及其手性异构体衍生，然后选用大赛璐as-h色谱柱，以加入三氟乙酸的异丙醇、乙醇和正己烷混合溶液为流动相，流动相的体积比为异丙醇:乙醇:正己烷:三氟乙酸＝10～15:10～15:80～70:0.1，流速为0.4～0.6ml/min进行等度洗脱，柱温为20～30℃。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述大赛璐as-h色谱柱为多糖涂敷型手性柱，其固定相为硅胶表面涂敷直链淀粉-三[(s)-α-苯乙基氨基甲酸酯]。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，检测波长为200～210nm。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，选用乙腈为配制待测样品的稀释剂。

技术总结本发明公开一种索玛鲁肽侧链及其手性异构体的高效液相色谱检测方法。该方法以L‑苯丙氨酸为衍生试剂，先索玛鲁肽侧链及其手性异构体衍生，然后选用大赛璐AS‑H色谱柱，以加入三氟乙酸的异丙醇、乙醇与正己烷的混合溶液为流动相进行等度洗脱。本发明采用的检测方法，能够将索玛鲁肽侧链及其手性异构体的衍生物基线分离，从而实现索玛鲁肽侧链中手性异构体含量的检测，具有快速、简便、高效等特点。技术研发人员：陈玉玉,钱银洁,徐俊杰受保护的技术使用者：尚科生物医药（上海）有限公司技术研发日：技术公布日：2024/10/10