番茄的组培方法及应用

本技术涉及植物基因工程，特别涉及一种番茄的组培方法及应用。

背景技术：

1、番茄(solanum lycopersicum mill.)是全球普遍栽培的蔬菜农作物之一，具有重要经济和研究价值。番茄圣尼斯红果(san marzano)是一种意大利番茄品种，以其优美的外观、浓郁的口感和多样的用途而闻名，是一种备受追捧的番茄品种。

2、以转基因和基因编辑等技术打破生殖隔离、连锁累赘等因素的限制，可以实现目标性状的快速精准改良(杜敏敏，周明，邓磊，李传友，李常保，番茄分子育种现状与展望——从基因克隆到品种改良，园艺学报，2017，44(03):581-600)，而再生体系的建立是成功进行遗传转化的前提和基础。研究表明，番茄再生体系因基因型、外植体、激素种类及浓度等而异(王全华，葛晨辉，曹守军，等，番茄组织再生及其遗传转化体系的优化，青岛农业大学学报，2007，24(1)：24～27)。如裴华丽等建立了三个番茄品种的组培再生体系，证实基因型及外植体是影响番茄组织培养效果的重要因素，在同一种培养基上3个不同番茄品种的分化率差异较大，诱导不定芽分化的最佳培养基组分浓度各不相同(裴华丽，李美芹，刘永光，等，不同基因型番茄高效组培再生体系的建立，北方园艺，2013，3:373-379)。虽然有关番茄组织培养与遗传转化的报道较多，但由于番茄的再生能力因基因型的不同而存在着较大的差异，因此，需对每个特定的品种建立一套高频再生系统(乔宁宁，邹爱兰，陈崇顺，番茄宝大906高频再生系统的建立及其潮霉素选择压的测定，江苏农业科学，2013，41(002):39-42)。

3、申请内容

4、本技术是鉴于上述问题而进行的，其目的在于提供一种番茄组培方法，该方法有利于提升番茄的组培再生效率。

5、具体如下，本技术第一方面提供了一种番茄组培方法，将番茄外植体侵染处理后进行培养；

6、所述侵染处理包括将番茄外植体添加至侵染菌液漫泡；

7、所述侵染菌液的od600为0.05～0.2。

8、根据本技术的一些实施方式，所述侵染菌液包括农杆菌和侵染培养基。

9、根据本技术的一些实施方式，所述侵染培养基包括：ms培养基。

10、根据本技术的一些实施方式，所述侵染菌液的od600为0.05～0.1。

11、根据本技术的一些实施方式，所述培养包括分化培养和继代培养中的至少一种。

12、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养的培养基包括基本培养基和植物激素。

13、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养选用的基本培养基包括ms培养基。

14、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养选用的植物激素包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和玉米素中的至少一种。

15、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中植物激素的浓度为0.05mg/l～3.0mg/l。

16、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养的培养基包括基本培养基和植物激素。

17、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养选用的基本培养基包括ms培养基。

18、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养选用的植物激素包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和玉米素中的至少一种。

19、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中植物激素的浓度为0.05mg/l～3.0mg/l。

20、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养选用的植物激素包括6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸。

21、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中6-苄氨基腺嘌的浓度为1.5mg/l～2.5mg/l。

22、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中6-苄氨基腺嘌的浓度为1.5mg/l～2.0mg/l。

23、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中萘乙酸的浓度为0.1mg/l～0.5mg/l。

24、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中萘乙酸的浓度为0.1mg/l～0.3mg/l。

25、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养选用的植物激素包括玉米素；

26、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中玉米素的浓度为1.5mg/l～2.5mg/l。

27、根据本技术的一些实施方式，所述分化培养过程中玉米素的浓度为1.5mg/l～2.0mg/l。

28、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养选用的植物激素包括6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸。

29、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中6-苄氨基腺嘌的浓度为1.5mg/l～2.5mg/l。

30、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中6-苄氨基腺嘌的浓度为1.5mg/l～2.0mg/l。

31、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中萘乙酸的浓度为0.01mg/l～0.1mg/l。

32、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中萘乙酸的浓度为0.01mg/l～0.05mg/l。

33、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养选用的植物激素包括玉米素。

34、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中玉米素的浓度为0.5mg/l～1.5mg/l。

35、根据本技术的一些实施方式，所述继代培养过程中玉米素的浓度为0.5mg/l～1.0mg/l。

36、根据本技术的一些实施方式，所述培养的条件还包括：温度为20℃～25℃，光照周期为光培养12h～18h和暗培养6h～12h，培养30天～60天。

37、根据本技术的一些实施方式，所述光照周期为光培养12h～16h和暗培养8h～12h。

38、根据本技术的一些实施方式，所述漫泡的时间为3min～7min。

39、根据本技术的一些实施方式，所述漫泡的时间为5min～7min。

40、根据本技术的一些实施方式，所述番茄外植体为番茄下胚轴或子叶。

41、根据本技术的一些实施方式，所述番茄包括番茄圣尼斯红果品种。

42、根据本技术的一些实施方式，所述番茄包括番茄圣尼斯红果品种的分离材料9e206。

43、基于番茄圣尼斯红果品种创制的分离材料9e206，是一个性状优良的番茄育种骨干材料，叶色深绿，果实形状正圆偏扁，外观光滑，单果重约250克，硬，商品性好。

44、根据本技术的一些实施方式，所述番茄外植体经过预培养。

45、根据本技术的一些实施方式，所述预培养的条件包括：温度为20℃～25℃，光照周期为光培养12h～18h和暗培养6h～12h，培养30天～60天。

46、根据本技术的一些实施方式，所述番茄外植体由番茄苗经过处理得到。

47、根据本技术的一些实施方式，所述番茄苗经种植番茄种子得到。

48、根据本技术的一些实施方式，所述种植条件包括温度为20℃～25℃，光照周期为光培养12h～18h和暗培养6h～12h。

49、根据本技术的一些实施方式，所述番茄种子经次氯酸钠溶液消毒后再进行种植。

50、根据本技术的一些实施方式，所述次氯酸钠溶液的质量分数为18％～20％。

51、本技术第二方面提供了本技术第一方面所述的番茄组培方法在制备番茄新品种中的应用。

52、本技术至少具备如下有益效果：

53、本技术系统地研究了不同外植体材料、不同激素浓度和不同农杆菌浓度对番茄再生体系的影响，筛选出适宜番茄离体培养的最佳培养条件，建立一套优化的组培再生体系，为下一步进行外源基因的遗传转化、改善番茄果实品质奠定基础。

54、适当的菌液浓度有利于转化效率的提高；该浓度可以显著提高番茄外植体的成活率和转化效率。该方法在保证转化效率的同时，极大地缩短了转化周期。该方法适用于各种外植体类型，普适性好。

技术实现思路