精磺胺半抗原、人工抗原及其应用

本发明涉及检测，具体地，涉及精磺胺半抗原、人工抗原及其应用。

背景技术：

1、噻嗪类药物作为一类利尿降压药，包括精磺胺、氢氯噻嗪、氯噻嗪、布噻嗪、三氯噻嗪、环戊噻嗪等代表药物，主要适用于心原性水肿、肝原性水肿、肾性水肿及高血压等，通过抑制远端肾小管钠的重吸收进而促进尿液的排泄，达到利尿作用。然而，噻嗪类药物的滥用可能会引起一些不良反应，如低血压、胆囊炎和皮肤狼疮。此外，持续过量使用此类药物可能导致水和电解质紊乱、高尿酸血症、高血糖甚至死亡。因此为加强噻嗪类药物的监管，有必要建立一种操作简便、灵敏度高、准确性强的快速检测方法。

2、精磺胺(4-amino-6-chlorobenzene-1,3-disulfonamide)，化学式为c6h8cln3o4s2，是关键的医药中间体，可用于合成氢氯噻嗪、环戊噻嗪、三氯噻嗪和氯噻嗪等原料药，且作为氢氯噻嗪的降解物，精磺胺常在食品安全抽检中与氢氯噻嗪同时检出。现有技术cn110240576a中公开了氢氯噻嗪半抗原和人工抗原及其制备方法和应用，虽然可快速、便捷地实现氢氯噻嗪的检测，但其仅能实现氢氯噻嗪单一药物的检测，难以满足现实中噻嗪类多种药物违法添加的检测需求。因此，迫切需要开发精磺胺等噻嗪类药物的现场快速精准检测方法。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了精磺胺半抗原、人工抗原及其应用。

2、本发明的第一个目的是提供一种精磺胺半抗原。

3、本发明的第二个目的是提供结构式如式(ⅰ)所示的化合物在制备精磺胺人工抗原中的应用，

4、

5、本发明的第三个目的是提供另一种精磺胺半抗原。

6、本发明的第四个目的是提供结构式如式(ⅱ)所示的化合物在制备精磺胺人工抗原中的应用，

7、

8、本发明的第五个目的是提供一种精磺胺人工抗原。

9、本发明的第六个目的是提供另一种精磺胺人工抗原。

10、本发明的第七个目的是提供所述精磺胺人工抗原在制备检测噻嗪类药物的抗体中的应用。

11、本发明的第八个目的是提供一种精磺胺人工抗原组合。

12、本发明的第九个目的是提供所述精磺胺人工抗原组合在制备检测噻嗪类药物的产品中的应用。

13、为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

14、一种精磺胺半抗原，即精磺胺半抗原dis-2c，其结构式如式(ⅰ)所示，

15、

16、精磺胺半抗原dis-2c用系统命名法命名为：2,2'-((4-氨基-6-氯-1,3-苯并二磺酰基)双(偶氮二基))二乙酸，即2,2'-((4-amino-6-chloro-1,3-phenylenedisulfonyl)bis-(azanediyl))diacetic acid。

17、精磺胺半抗原dis-2c的制备方法，包括以下步骤：精磺胺溶于甲醇，与溴乙酸乙酯在碳酸钾环境下充分反应，所得产物通过柱层析进行分离纯化，所得纯化产物在碱性环境下充分水解，随后将溶液ph调节至酸性，即得；所述柱层析的展开剂为：按体积计，二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺＝(160：40：10)。

18、优选地，所述精磺胺和溴乙酸乙酯的摩尔比为1：(1.4～1.8)。

19、更优选地，所述精磺胺和溴乙酸乙酯的摩尔比为1：1.6。

20、具体的，用5ml甲醇溶解1mmol精磺胺，再与1.6mmol溴乙酸乙酯和4mmol碳酸钾混合，在60℃下搅拌过夜，得到反应物的粗产物；粗产物用旋转蒸发器将甲醇旋干，再通过柱层析进行分离纯化，柱层析的固定相为硅胶粉，展开剂为：按体积计，二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺＝(160：40：10)；将20mg所得纯化产物溶解于2ml甲醇，然后与稀盐酸水溶液在室温下搅拌3h，反应结束后调节ph为6～7，旋干除去溶剂，收集所得沉淀，即得。

21、结构式如式(ⅰ)所示的化合物在制备精磺胺人工抗原中的应用也应在本发明的保护范围之内，

22、

23、另一种精磺胺半抗原，即精磺胺半抗原dis-oh，其结构式如式(ⅱ)所示，

24、

25、精磺胺半抗原dis-oh采用系统命名法命名为：(4-氨基-2-氯-5-氨磺酰基苯基)磺酰基)甘氨酸，即((4-amino-2-chloro-5-sulfamoylphenyl)sulfonyl)glycine。

26、精磺胺半抗原dis-oh的制备方法与精磺胺半抗原dis-2c的制备方法基本相同，区别在于：碳酸钾替换为氢化钠；展开剂替换为：按体积计，二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺＝180：30：10。

27、结构式如式(ⅱ)所示的化合物在制备精磺胺人工抗原中的应用也应在本发明的保护范围之内，

28、

29、一种精磺胺人工抗原，由所述精磺胺半抗原dis-2c偶联载体蛋白得到，其结构式如式(ⅲ)所示，

30、

31、其中，protein为载体蛋白。

32、优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。

33、一种精磺胺人工抗原，由所述精磺胺半抗原dis-oh偶联载体蛋白得到，其结构式如式(ⅳ)所示，

34、

35、其中，protein为载体蛋白。

36、优选地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或鸡卵白蛋白。

37、任一所述精磺胺人工抗原在制备检测噻嗪类药物的抗体中的应用也应在本发明的保护范围之内。

38、任一所述精磺胺人工抗原在检测噻嗪类药物中的应用也应在本发明的保护范围之内，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。

39、一种精磺胺人工抗原组合，包含包被原和免疫原，所述包被原由所述精磺胺半抗原dis-2c或所述精磺胺半抗原dis-oh偶联鸡卵白蛋白得到；所述免疫原由所述精磺胺半抗原dis-oh偶联牛血清白蛋白得到。

40、优选地，所述包被原由所述精磺胺半抗原dis-2c偶联鸡卵白蛋白得到。

41、所述精磺胺人工抗原组合在制备检测噻嗪类药物的产品中的应用也应在本发明的保护范围之内。

42、所述精磺胺人工抗原组合在检测噻嗪类药物中的应用也应在本发明的保护范围之内，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。

43、一种检测噻嗪类药物的免疫分析方法，使用所述精磺胺人工抗原组合进行检测，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。

44、一种检测噻嗪类药物的elisa试剂盒，包含精磺胺人工抗原组合，所述精磺胺人工抗原组合，包含包被原和免疫原，所述包被原由所述精磺胺半抗原dis-2c或所述精磺胺半抗原dis-oh偶联鸡卵白蛋白得到；所述免疫原由所述精磺胺半抗原dis-oh偶联牛血清白蛋白得到。

45、优选地，所述包被原由所述精磺胺半抗原dis-2c偶联鸡卵白蛋白得到。

46、优选地，所述试剂盒还包含抗体，所述抗体由所述免疫原免疫动物得到。

47、更优选地，所述抗体为单克隆抗体。

48、优选地，所述试剂盒还包含酶标板、噻嗪类药物的标准品和底物显色液。本发明所涉及的噻嗪类药物，包括但不限于精磺胺、氢氯噻嗪、布噻嗪、环戊噻嗪、三氯噻嗪和氯噻嗪。

49、更优选地，所述酶标板上包被有所述包被原。

50、更优选地，所述底物显色液包含过氧化脲和四甲基联苯胺。

51、更优选地，所述试剂盒还包含终止液、洗涤液、封闭液、酶标二抗和酶标二抗稀释液。

52、进一步优选地，所述终止液体积分数为8％～12％ h2so4。

53、最优选地，所述终止液体积分数为10％ h2so4。

54、进一步优选地，所述洗涤液为含有体积分数为0.5％～1.0％吐温-20、质量分数为0.01％～0.03％叠氮化钠防腐剂、0.1mol/l～0.3mol/l的磷酸盐缓冲液，ph值为7.2～7.6。

55、最优选地，所述洗涤液为含有体积分数为0.8％吐温-20、质量分数为0.02％叠氮化钠防腐剂、0.2mol/l的磷酸盐缓冲液，ph值为7.4。

56、进一步优选地，所述封闭液为含有质量分数为1％～3％酪蛋白、0.1mol/l～0.3mol/l的磷酸盐缓冲液，ph值为7.1～7.5。

57、最优选地，所述封闭液为含有质量分数为2％酪蛋白、0.2mol/l的磷酸盐缓冲液，ph值为7.3。

58、进一步优选地，所述酶标二抗为辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体或羊抗鼠抗体。

59、进一步优选地，所述酶标二抗稀释液为0.1mol/l～0.3mol/l磷酸盐缓冲液。

60、最优选地，所述酶标二抗稀释液为0.2mol/l磷酸盐缓冲液。

61、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

62、本发明提供了两种精磺胺半抗原，并制备得到精磺胺的抗体，效价高，稳定性强，亲和力高，为建立噻嗪类药物的免疫检测方法提供了核心原材料。本发明还建立了广谱性噻嗪类药物的间接竞争elisa免疫分析方法，灵敏度高，对精磺胺的最低检测限lod为0.015ng/ml，对6种噻嗪类药物的ic50范围为0.76～358.76ng/ml，在噻嗪类药物的残留检测中具有良好的应用前景。