一种彩色马蹄莲再生的组培培养基和再生组培方法

本发明属于植物繁殖栽培，具体涉及一种彩色马蹄莲再生的组培培养基和再生组培方法。

背景技术：

1、目前，彩色马蹄莲种球产业化生产的方式为组培快繁。常用的方法是以带芽无菌仔球为外植体，消毒、灭菌后，诱导产生不定芽，再经过增殖后，壮芽、壮苗和生根培养后，获得试管苗。随着黄花马蹄莲基因组测序的完成，对彩色马蹄莲基因功能的验证亟需进行，建立基于愈伤组织的再生体系，是开展彩色马蹄莲基因研究的前提。但是，中国专利cn201910992841.8一种诱导彩色马蹄莲产生愈伤组织的培养基及其在建立彩色马蹄莲再生体系中的应用中提供了一种以彩色马蹄莲仔球为外植体，诱导产生愈伤组织建立再生体系的方法，但存在诱导周期长、诱导率和增殖系数不高等问题。

2、因此，急需对彩色马蹄莲的再生组培培养基进行改进，建立彩色马蹄莲再生体系，以缩短诱导周期，提高诱导率和繁殖系数。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种彩色马蹄莲再生的组培培养基和再生组培方法，应用本发明提供的组培培养基以彩色马蹄莲的无菌仔球薄片为外植体进行彩色马蹄莲的再生高效组培快繁，可以提高彩色马蹄莲的繁殖系数。

2、为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：

3、本发明提供了一种彩色马蹄莲再生的组培培养基，所述组培培养基包括诱导培养基、壮芽培养基和结球与生根培养基；

4、所述诱导培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.5～4.0mg/l 6-ba、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；

5、所述壮芽培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～2.5mg/l 6-ba、0～0.5mg/lnaa、0.5～2.0mg/l碳纳米管、40～60g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；

6、所述结球与生根培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.5～2.0mg/lnaa、0.5～2.0mg/l碳纳米管、40～60g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂。

7、本发明提供了一种彩色马蹄莲的丛生芽组培方法，所述丛生芽组培方法采用上述技术方案所述的诱导培养基，包括以下步骤：

8、将彩色马蹄莲的无菌仔球薄片接种于诱导培养基上进行诱导培养，得到丛生芽。

9、优选的，所述无菌仔球薄片的长和宽均为0.3～0.8cm，厚度为0.1～0.2cm。

10、优选的，所述诱导培养为暗培养；所述诱导培养的时间为30～35d；所述诱导培养为25±1℃。

11、本发明提供了一种彩色马蹄莲的再生组培方法，所述再生组培方法采用上述技术方案的壮芽培养基和结球与生根培养基，包括以下步骤：

12、将上述技术方案所述丛生芽转接于壮芽培养基中进行壮芽培养，得到丛生小苗；

13、将所述丛生小苗转接于结球与生根培养基中进行结球生根培养，得到组培苗。

14、优选的，所述壮芽培养为光照培养；所述壮芽培养的时间为30～35d；所述光照培养的时间为12～16h/d，所述光照培养的强度为800～1200lx。

15、优选的，所述结球生根培养为光照培养，所述光照培养的时间为12～16h/d，所述光照培养的强度为800～1200lx；所述结球生根培养的时间为30～35d。

16、优选的，所述丛生芽包括丛生芽块，所述丛生芽块的直径为1.5～2.0cm。

17、优选的，所述壮芽培养和结球生根培养的温度均为25±1℃。

18、优选的，得到组培苗后，还包括炼苗和移栽。

19、本发明的有益效果：本发明提供了一种彩色马蹄莲再生的组培培养基，所述组培培养基包括诱导培养基、壮芽培养基和结球与生根培养基；

20、所述诱导培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.5～4.0mg/l 6-ba、30g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；

21、所述壮芽培养以ms培养基为基本培养基，还包括：1.0～2.5mg/l 6-ba、0～0.5mg/lnaa、0.5～2.0mg/l碳纳米管、40～60g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂；

22、所述结球与生根培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.5～2.0mg/lnaa、0.5～2.0mg/l碳纳米管、40～60g/l蔗糖和6.5～7.0g/l琼脂。

23、在组培培养基中，添加的naa(萘乙酸)和6-ba(6-苄氨基嘌呤)能刺激细胞分裂，促进能促进生根和芽的形成，诱导彩色马蹄莲丛生芽的形成；碳纳米管具有壮芽的作用，促进彩色马蹄莲丛生芽的分化和生根；在6-ba、naa、和碳纳米管的共同作用下利于诱导彩色马蹄莲丛生小苗形成、增殖、分化和生根。实施例结果表明：利用本发明的组培培养基可以获得大量的彩色马蹄莲组培苗，提高彩色马蹄莲的繁殖系数。

技术特征：

1.一种彩色马蹄莲再生的组培培养基，其特征在于，所述组培培养基包括诱导培养基、壮芽培养基和结球与生根培养基；

2.一种彩色马蹄莲的丛生芽组培方法，其特征在于，所述丛生芽组培方法采用权利要求1所述的诱导培养基，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的再生组培方法，其特征在于，所述无菌仔球薄片的长和宽均为0.3～0.8cm，厚度为0.1～0.2cm。

4.根据权利要求2所述的再生组培方法，其特征在于，所述诱导培养为暗培养；所述诱导培养的时间为30～35d；所述诱导培养的温度为25±1℃。

5.一种彩色马蹄莲的再生组培方法，其特征在于，所述再生组培方法采用权利要求1所述的壮芽培养基和结球与生根培养基，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的再生组培方法，其特征在于，所述壮芽培养为光照培养；所述壮芽培养的时间为30～35d；所述光照培养的时间为12～16h/d，所述光照培养的强度为800～1200lx。

7.根据权利要求5所述的再生组培方法，其特征在于，所述结球生根培养为光照培养，所述光照培养的时间为12～16h/d，所述光照培养的强度为800～1200lx；所述结球生根培养的时间为30～35d。

8.根据权利要求5所述的再生组培方法，其特征在于，所述丛生芽包括丛生芽块，所述丛生芽块的直径为1.5～2.0cm。

9.根据权利要求5所述的再生组培方法，其特征在于，所述壮芽培养和结球生根培养的温度均为25±1℃。

10.根据权利要求5所述的再生组培方法，其特征在于，得到组培苗后，还包括炼苗和移栽。

技术总结本发明属于植物繁殖栽培技术领域，具体涉及一种彩色马蹄莲再生的组培培养基和再生组培方法。本发明提供了一种彩色马蹄莲再生的组培培养基，所述组培培养基包括诱导培养基、壮芽培养和结球与生根培养基；在本发明提供的组培培养基和组培方法中，选择无菌仔球薄片作为外植体，以MS培养基为基础培养基，添加了适当浓度的6‑BA、NAA和碳纳米管，再加之适宜的温度和光照共同作用，利于诱导彩色马蹄莲无菌仔球薄片的增殖和分化，提高彩色马蹄莲的繁殖系数，获得大量的生长一致的彩色马蹄莲组培苗。技术研发人员：付娇娇,郑玉红,韩福贵受保护的技术使用者：江苏省中国科学院植物研究所技术研发日：技术公布日：2024/10/17