一种非奈利酮含量的检测方法与流程

本发明涉及药物分析，尤其涉及一种非奈利酮含量的检测方法。

背景技术：

1、非奈利酮是一种新型非甾体类盐皮质激素受体(mr)拮抗剂，相比传统的甾体类mr受体拮抗剂具有更高的亲和力和选择性，ic50为18nm。分子模拟研究表明，非奈利酮可与mr形成特殊的结合模式，特异性的改变mr蛋白12螺旋的位置，从而抑制mr以及类固醇受体共激活因子-1的募集，发挥其心肾保护作用。同时，非奈利酮的优势还表现在其本身的理化性质，更低的亲脂性使得其不易穿过血脑屏障，更合理的组织渗透和分布使得其相比传统的mr拮抗剂依普利酮有更强的心脏保护作用。

2、非奈利酮(finerenone)的化学名为(4s)-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-甲酰胺，由拜耳公司首次开发，并于2021年07月09日经美国fda批准上市，2022-06-28在中国批准上市，用于治疗ii型糖尿病所致的成人慢性肾病、慢性肾病、2型糖尿病、肾脏疾病等。

3、现有技术中尚无非奈利酮药含量的检测方法报道，因此，开发非奈利酮含量的分析方法，对于有效控制非奈利酮原料药或其制剂的质量十分重要，对于非奈利酮原料药或制剂的制备工艺也具有指导意义。

技术实现思路

1、针对现有技术中不能对非奈利酮含量进行有效检测的问题，本发明提供一种非奈利酮含量的检测方法。

2、为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是：

3、一种非奈利酮含量的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，包括如下步骤：

4、(1)供试品溶液和对照品溶液的配制：

5、取非奈利酮供试品，用稀释剂配制成供试品溶液；

6、取非奈利酮对照品，用稀释剂配制成对照品溶液；

7、(2)对所述对照品溶液和供试品溶液进行检测，其中，所述高效液相色谱的条件为：

8、色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱，4.6mm*150mm，3.5μm；

9、流动相a：体积浓度0.05％～0.15％的三氟乙酸水溶液；

10、流动相b：乙腈；

11、柱温：35℃～45℃；

12、uv检测器，检测波长：250nm～260nm；

13、梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

14、0min，75％～85％流动相a，25％～15％流动相b；

15、3min，45％～55％流动相a，55％～45％流动相b；

16、6min，4％～6％流动相a，96％～94％流动相b；

17、6.1min，75％～85％流动相a，25％～15％流动相b；

18、10min，75％～85％流动相a，25％～15％流动相b。

19、相对于现有技术，本发明提供的非奈利酮含量的检测方法，采用辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6mm*150mm，3.5μm)色谱柱，以三氟乙酸水溶液-乙腈作为流动相，通过特定的梯度洗脱方式，能够快速、准确地对非奈利酮进行定量检测，出峰时间快，仅6～10min即可完成检测，准确度高，大大提高了非奈利酮的检测效率；且非奈利酮可与其他杂质峰达到很好的分离效果。本发明能够用更为简便的方法实现对非奈利酮的定量检测，且方法简单，操作简便，分离效果好，灵敏度高，检测限低，从而为提高和更好地控制非奈利酮原料药及其制剂的质量提供有效保障，有利于保证非奈利酮产品质量的一致性和稳定性，从而有利于提高非奈利酮产品用药的临床安全性和有效性。

20、需要说明的是，非奈利酮的化学名称为s-4-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-5-乙氧基-2,8-二甲基-1,4-二氢-1,6-萘啶-3-甲酸2-氰基乙酯。

21、进一步地，所述色谱柱的型号为aglient zorax edipse xdb-cz，4.6mm*150mm，3.5μm。

22、优选的色谱柱，可以使非奈利酮的峰形、非奈利酮与杂质的分离度及检测的灵敏度俱佳，且基线干扰较小，从而有利于非奈利酮与杂质有效分离，且结果准确可靠，重复性好。

23、进一步地，流动相a为体积浓度0.1％的三氟乙酸水溶液。

24、优选的流动相在不产生基线干扰的前提下，能够更好地分离非奈利酮和杂质，并且有效改善峰形，使检测结果的准确度及精密度更高。

25、优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

26、0min，80％流动相a，20％流动相b；

27、3min，50％流动相a，50％流动相b；

28、6min，5％流动相a，95％流动相b；

29、6.1min，80％流动相a，20％流动相b；

30、10min，80％流动相a，20％流动相b。

31、优选的梯度洗脱顺序，可以提高主成分与杂质峰之间的分离度和检测的灵敏度，使检测结果定量准确，且精密度高。

32、进一步地，检测波长为255nm。

33、优选的检测波长可提高检测的准确度。

34、进一步地，柱温为40℃。

35、进一步地，流速为0.9ml/min～1.1ml/min。

36、优选的，流速为1.0ml/min。

37、进一步地，进样体积为10μl。

38、优选的检测条件可使非奈利酮与杂质之间达到更高的分离度，进而提高检测的准确度，并缩短非奈利酮的出峰时间，提高检测效率。

39、进一步地，所述供试品溶液的浓度为0.048mg/ml～0.052mg/ml。

40、进一步地，所述供试品溶液的浓度为0.05mg/ml。

41、优选的供试品浓度有利于使非奈利酮及杂质的峰形更好，柱效高，积分更准确，从而有利于对非奈利酮的含量进行更准确的计算。

42、进一步地，所述对照品溶液的浓度为0.048mg/ml～0.052mg/ml。

43、优选的，所述对照品溶液的浓度为0.05mg/ml。

44、进一步地，所述稀释剂为体积浓度85％～95％的甲醇水溶液。

45、优选的，所述稀释剂为体积浓度90％的甲醇水溶液。

46、本发明提供的检测方法，能够实现对非奈利酮含量的准确定量检测，有利于对非奈利酮原料及其制剂的质量进行有效控制，从而保证非奈利酮产品的质量，弥补了现有技术无法对非奈利酮含量进行检测的空白，具有较高的实用价值。

技术特征：

1.一种非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行检测，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的型号为aglient zorax edipse xdb-cz，4.6mm*150mm，3.5μm。

3.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，流动相a为体积浓度0.1％的三氟乙酸水溶液。

4.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：

5.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，检测波长为255nm。

6.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，柱温为40℃。

7.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，流速为0.9ml/min～1.1ml/min。

8.如权利要求7所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，流速为1.0ml/min。

9.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，进样体积为10μl。

10.如权利要求1所述的非奈利酮含量的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液和对照品溶液的浓度均为0.048mg/ml～0.052mg/ml；和/或

技术总结本发明涉及药物分析技术领域，具体公开一种非奈利酮含量的检测方法。按照下述高效液相色谱条件进行检测：色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶色谱柱，4.6mm*150mm，3.5μm；流动相A：体积浓度0.05％～0.15％的三氟乙酸水溶液；流动相B：乙腈；检测波长250～260nm，柱温：35～45℃，梯度洗脱。本发明提供的方法能够快速、准确地对非奈利酮进行定量检测，出峰时间快，仅6～10min即可完成检测，准确度高，大大提高了非奈利酮的检测效率，从而为提高和更好地控制非奈利酮原料药及其制剂的质量提供有效保障，有利于保证非奈利酮产品质量的一致性和稳定性，从而有利于提高非奈利酮产品用药的临床安全性和有效性。技术研发人员：李媛,杨轩,崔兵兵,徐莉,徐明月,杨娴,曹柳,李磊受保护的技术使用者：石家庄四药有限公司技术研发日：技术公布日：2024/11/4