3-硝基丙酸的检测方法及其应用

本发明涉及分析检测，尤其是涉及一种3-硝基丙酸的检测方法及其应用。

背景技术：

1、如下陈述仅提供与本发明有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。

2、3-硝基丙酸（3-nitropropionic acid，3-npa）为一种神经毒素，是引起霉变甘蔗中毒的主要毒性物质，可引起中枢神经系统损害，干扰细胞内酶的代谢，严重可导致脑缺血坏死，对中枢神经系统产生严重损伤。目前有关甘蔗中3-硝基丙酸的检测方法主要是参照卫生行业标准（ws/t10-1996）采用薄层色谱法测定，目前也有采用气相色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法或液相色谱-质谱法等定量测定的报道。

3、监测受试样本血液中3-硝基丙酸含量有助于治疗3-硝基丙酸中毒药物的研发，但是目前对3-硝基丙酸的检测主要针对甘蔗样本进行检测。甘蔗样本与血液样本理化性质差异较大，其中存在的对3-硝基丙酸分离和检测的干扰成分也不同，因此现有技术中的检测方法不适用于血液样本中3-硝基丙酸的监测。并且现有技术中多采用固相萃取法对样本进行预处理，该预处理方法操作繁琐、处理时间长，且固相萃取柱成本高。因此如何简化3-硝基丙酸的检测方法，且适用于血液样本的检测是目前有待解决的问题。

4、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种3-硝基丙酸的检测方法，以缓解现有技术中3-硝基丙酸检测操作繁琐、检测成本高，且缺乏血液样本中3-硝基丙酸的检测方法的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

3、第一方面，提供了一种3-硝基丙酸的检测方法，所述检测方法包括将经过预处理的样本使用高效液相色谱串联质谱检测，将检测值带入标准曲线中，计算得到样本中3-硝基丙酸的含量；

4、所述样本包括血液样本；

5、所述标准曲线采用外标法构建；

6、所述预处理包括将样本与蛋白沉淀试剂混合，分离上清后进行高效液相色谱串联质谱检测，所述蛋白沉淀试剂含有甲醇和/或乙腈；

7、高效液相色谱条件包括：

8、色谱柱采用c18色谱柱；

9、流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为甲酸的水溶液，所述流动相b为乙腈。

10、第二方面，还提供了第一方面的检测方法在制备3-硝基丙酸检测产品中的应用。

11、第三方面，还提供了一种3-硝基丙酸检测产品，所述3-硝基丙酸检测产品包括第一方面中所述的蛋白沉淀试剂和流动相。

12、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

13、本发明检测方法中样本预处理采用含有甲醇和/或乙腈的蛋白沉淀试剂沉淀血液样本中的蛋白，相比于固相萃取法操作更简单，且显著的降低了检测成本。本发明高效液相色谱的流动相中不含有金属盐的离子对试剂，不易污染质谱，对仪器长期稳定性友好。质谱的缺点之一是需要昂贵的内标物质，而本发明检测方法采用外标法构建标准曲线，无需内标物质校准基质干扰。本发明通过优化预处理方法、色谱柱和色谱条件，实现了使用外标法检测血浆中3-硝基丙酸的准确定量。本发明提供的检测方法经方法学验证，定量限可低至1ng/ml，检测限可低至0.1 ng/ml。综上，本发明提供的3-硝基丙酸的检测方法简化了检测步骤、降低了检测成本的同时能够维持极佳的检测效果。

14、基于本发明提供的检测方法，采用本发明提供的3-硝基丙酸检测产品检测血液样本中的3-硝基丙酸，可以为诊断3-硝基丙酸中毒和临床治疗3-硝基丙酸中毒提供参考。并且该产品使用时具有预处理步骤简单，检测时间显著压缩的优势，该优势使毒物鉴定时间更短，为临床救治甘蔗中毒患者争取更多的救治时间，并且能够显著降低前处理耗材成本进而减轻患者负担。

技术特征：

1.一种3-硝基丙酸的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括将经过预处理的样本使用高效液相色谱串联质谱检测，将检测值带入标准曲线中，计算得到样本中3-硝基丙酸的含量；

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白沉淀试剂中甲醇和乙腈的体积比为（0~2）：（0~2）。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a中含有甲酸0.05~0.2%v/v。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，按照梯度洗脱，洗脱程序为：

5. 根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，在0~1.5min，流速为0.2 ml/min；在1.5~1.6min，流速由0.2ml/min变化至0.5ml/min；在1.6~2.2min，流速为0.5 ml/min；在2.2~2.3min，流速由0.5ml/min变化至0.2ml/min；在2.3~5.0min，流速为0.2 ml/min。

6. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为waters acquity behc18色谱柱，规格为2.1mm×150mm×1.7μm。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，质谱条件包括：

8.权利要求1~7任一项所述的检测方法在制备3-硝基丙酸检测产品中的应用。

9. 3-硝基丙酸检测产品，其特征在于，包含权利要求1~7任一项中所述的蛋白沉淀试剂和流动相。

10.根据权利要求9所述的3-硝基丙酸检测产品，其特征在于，还包括（ⅰ）~（ⅳ）中的一种或多种：

技术总结本发明提供了一种3‑硝基丙酸的检测方法及其应用，涉及分析检测技术领域。该检测方法包括将经过预处理的样本使用高效液相色谱串联质谱检测，然后将检测值带入标准曲线中，计算得到样本中3‑硝基丙酸的含量；其中样本包括血液样本；标准曲线采用外标法构建；预处理包括将样本与由含有甲醇和/或乙腈的蛋白沉淀试剂混合，分离上清后进行高效液相色谱串联质谱检测；高效液相色谱条件包括：色谱柱采用C18色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为甲酸的水溶液，流动相B为乙腈。该检测方法缓解了现有技术中缺乏血液样本中3‑硝基丙酸的检测方法，且检测操作繁琐和检测成本高的问题。技术研发人员：李惠玲受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京朝阳医院技术研发日：技术公布日：2024/11/4