一种盐酸黄连素中基因毒性杂质3,4-二羟基苯甲醛的检测方法与流程

本申请涉及化学检测领域，尤其是涉及一种盐酸黄连素中基因毒性杂质3,4-二羟基苯甲醛的检测方法。

背景技术：

1、盐酸黄连素作为一种广泛应用于临床的生物碱类药物，因其显著的抗菌、抗炎、降血糖等多种药理活性而备受关注。然而，其生产过程中不可避免地会引入或生成少量基因毒性杂质，例如3,4-二羟基苯甲醛，作为潜在的基因毒性杂质，其存在不仅直接影响药物的安全性评估，还可能对长期用药患者的健康构成潜在威胁。

2、传统的杂质检测方法，如薄层色谱（tlc）和气相色谱（gc），在灵敏度、分辨率及特异性方面已难以满足当前对低浓度基因毒性杂质的精准检测需求。尤其是对于3,4-二羟基苯甲醛这类结构相似、极性较强的小分子杂质，其与主药盐酸黄连素的分离和定量分析更是面临巨大挑战。因此，开发一种高效、准确且灵敏的检测方法显得尤为重要。

3、近年来，液相色谱-质谱联用（lc-ms）技术凭借其高灵敏度、高分辨率及优异的选择性，成为痕量杂质检测领域的重要工具。该技术通过液相色谱的高效分离能力与质谱的高特异性识别能力相结合，能够有效应对复杂基质中的痕量分析难题，特别是在药物杂质分析领域展现出显著优势。但目前未见有将lc-ms技术应用于盐酸黄连素中3,4-二羟基苯甲醛分析检测的报道。

技术实现思路

1、本申请提供一种盐酸黄连素中基因毒性杂质3,4-二羟基苯甲醛的检测方法，其采用液相色谱-质谱联用法实现对杂质的高效、精准检测。

2、本申请提供的一种盐酸黄连素中基因毒性杂质3,4-二羟基苯甲醛的检测方法，具体采用液相色谱-质谱联用法：

3、取供试品加水溶解稀释，加入萃取剂，涡旋，取上清液进行浓缩离心，挥干，加入丹酰氯溶液与中和溶液，进行衍生化反应，离心，取上清液为供试品溶液；

4、取3,4-二羟基苯甲醛加水稀释，加入萃取剂，涡旋，取上清液进行浓缩离心，挥干，加入丹酰氯溶液与中和溶液，进行衍生化反应，离心，取上清液为对照品溶液；

5、取供试品溶液和对照品溶液分别进样测试。

6、本申请中，液相色谱检测按中国药典通则0512进行，质谱检测按中国药典通则0431进行。

7、优选的，所述中和溶液为饱和碳酸钠乙腈溶液。

8、优选的，所述萃取剂为甲基叔丁基醚。

9、优选的，所述丹酰氯溶液的浓度为10～30μg/ml。

10、优选的，所述衍生化反应的温度为50～60℃，时间为25～45min。

11、优选的，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以水为流动相a，以乙腈为流动相b进行梯度洗脱；色谱柱柱温为35℃，流速为每分钟0.35 ml，进样量2μl。

12、优选的，洗脱梯度变化如下：

13、0～1min：80％a→80％a，20％b→20％b；

14、1～2min：80％a→5％a，20％b→95％b；

15、2～4min：5％a→5％a，95％b→95％b；

16、4～4.1min：5％a→80％a，95％b→20％b；

17、4.1～5min:80％a→80％a，20％b→20％b。

18、优选的，质谱条件为：采用电喷雾离子源，以m/z 605.092→170.200为定量离子对，以m/z 605.092→171.200和605.092→156.100为定性离子对，碰撞能量分别为32 ev、65ev和93ev，去簇电压为126v，扫描时间为150msec，质谱采集时间为2.5min～3.6min。

19、优选的，质谱条件为：采用正离子检测模式，喷雾电压为5000v，离子源温度为500℃，气帘气为28psi，雾化气为50psi，辅助气为55psi。

20、综上所述，本申请具有如下有益效果：

21、3,4-二羟基苯甲醛在检测中响应性、稳定性较低，不易检测，本申请通过丹酰氯溶液对进行衍生化处理，可显著提高对该目标化合物的检测灵敏度和稳定性。该检测方法具有优异的专属性、溶液稳定性、准确度、精密度及耐用性,本发明的检测方法的色谱条件能够使盐酸黄连素的色谱峰与杂质3,4-二羟基苯甲醛的色谱峰分离较好,并且具有较好的线性相关性,平均回收率为83.33%～101.29%,平均相对标准偏差rsd<8.71%(n=6)。

技术特征：

1.一种盐酸黄连素中基因毒性杂质3,4-二羟基苯甲醛的检测方法，其特征在于，采用液相色谱-质谱联用法：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述中和溶液为饱和碳酸钠乙腈溶液。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述萃取剂为甲基叔丁基醚。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述丹酰氯溶液的浓度为10～30μg/ml。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述衍生化反应的温度为50～60℃，时间为25～45min。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以水为流动相a，以乙腈为流动相b进行梯度洗脱。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，色谱柱柱温为35℃，流速为每分钟0.3～0.4ml，进样量1～2μl。

8.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，洗脱梯度变化如下：

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，质谱条件为：采用电喷雾离子源，以m/z 605.092→170.200为定量离子对，以m/z 605.092→171.200和605.092→156.100为定性离子对，碰撞能量分别为32ev、65ev和93ev，去簇电压为126v，扫描时间为150msec，质谱采集时间为2.5min～3.6min。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，质谱条件为：采用正离子检测模式，喷雾电压为5000v，离子源温度为500℃，气帘气为28psi，雾化气为50psi，辅助气为55psi。

技术总结本申请公开了一种盐酸黄连素中基因毒性杂质3,4‑二羟基苯甲醛的检测方法，具体采用液相色谱‑质谱联用法：取供试品加水溶解稀释，加入萃取剂，涡旋，取上清液进行浓缩离心，挥干，加入丹酰氯溶液与中和溶液，进行衍生化反应，离心，取上清液为供试品溶液；取3,4‑二羟基苯甲醛加水稀释，加入萃取剂，涡旋，取上清液进行浓缩离心，挥干，加入丹酰氯溶液与中和溶液，进行衍生化反应，离心，取上清液为对照品溶液；取供试品溶液和对照品溶液分别进样测试。本申请的检测方法具有良好的线性相关性、准确度、和精密度。技术研发人员：陶泉玮,吴洪海,易继亮,左敏娟,庄佳丽,汤丹旸,张中玲,张妙勇,童林林,唐鑫江,陈爽,刘裕,方珺婷,胡桂芳受保护的技术使用者：杭州先导医药科技有限责任公司技术研发日：技术公布日：2024/11/4