用于分析生物样品的比色皿的制作方法

本发明涉及一种用于分析生物样品的比色皿和一种制造用于分析生物样品的比色皿的方法。

背景技术：

1、确定比色皿内包含的样品的光学性质的分析装置是已知的。在此类装置中，比色皿至少部分装填有用于分析的样品，然后放置在所述装置中。光学（或其他）辐射穿过所述样品，以允许测量所述样品的特性，例如特定组分的存在。

2、在分析装置中检查的常见样品是生物样品，例如血液样品。血液分析用于广泛的医学监测方法，例如监测系统性抗癌疗法的进展。例如，光学分析装置可以分析血液样品以确定白细胞（例如粒细胞和无颗粒白细胞）的存在、不存在和/或量，其存在、不存在和/或量通常用于监测系统性抗癌疗法的进展。血液样品的分析通常需要首先对样品进行离心。在离心过程中，血液被分层。所述层是：（a）含有红细胞的红细胞层；（b） 含有白细胞（例如粒细胞和无颗粒白细胞）的血沉棕黄层；（c）血小板（凝血细胞）层；以及（d）血浆层。然后用光学（或其他辐射）分析血液以获得所述层的图像。典型的光学辐射源是led灯。然后可以从所述图像计算每层的像素计数，以确定每层的细胞计数。

3、比色皿是分析装置的一次性部件，通常每次测量都需要新的比色皿。重要的是，用户可以快速容易地将样品装入比色皿。同样重要的是，比色皿可以低成本制造，可以容易地装载样品并固定在光学分析装置的支架上，并且一旦分析完成，可以容易地从所述支架上取下。已知类型的比色皿的实例可以在例如gb2555403a、ep2096444a1、ep1055112a1、wo2007/008137、us6365104b1和wo2018078324a1（其公开内容各自通过引用并入本文）中看到。

4、其中含有样品的比色皿可以用组合物包被。所述组合物有三个目的。所述组合物（a）有助于所述比色皿收集样品；（b）确保一旦样品被收集，所述样品仍然可处理；以及（c）有助于产生所述样品的清晰图像。传统上，所述包被比色皿的组合物包含草酸钾、吖啶橙、肝素钠和乙二胺四乙酸二钾盐脱水物。用于比色皿的已知组合物的实例可以在例如us6365104b1（其公开内容通过引用并入本文）中看到。

5、需要一种改进的方法来获得比色皿中样品的图像。具体而言，需要一种改进的方法来获得比色皿中血液样品的图像，其中所述图像清楚地显示了血沉棕黄层。

技术实现思路

1、本发明涉及一种用于分析生物样品的比色皿和一种制造用于分析生物样品的比色皿的方法。

2、本发明的代表性特点被阐述在下述条款中，这些条款独立存在，或者可以与本说明书的文本和/或附图中公开的一个或多个特点以任何组合方式组合。

3、本发明如下述条款中所阐述：

4、1. 一种用于分析生物样品的比色皿，所述比色皿包含：

5、收集区室和分析区室，其中所述分析区室的1至60%的表面积被包被在溶液中。

6、2. 根据条款1所述的比色皿，其中所述分析区室的10至50%的表面积、或20至40%的表面积、或30至40%的表面积、或35%的表面积被包被在所述溶液中。

7、3. 根据条款1或条款2所述的比色皿，其中所述分析区室的40至99%的表面积、或50至90%的表面积、或80至40%的表面积、或70至60%的表面积、或65%的表面积未被包被在所述溶液中。

8、4. 根据条款1至3中任一条所述的比色皿，其中：

9、所述分析区室的第一（开口）端被所述溶液包被；

10、所述分析区室的第二（封闭）端被所述溶液包被；并且

11、所述分析区室的第一（开口）端与第二（封闭）端之间的中间区域未被包被在所述溶液中。

12、5. 根据条款4所述的比色皿，其中所述中间区域具有1至5 cm、或1至4 cm、或1.5至2.5 cm的长度，所述长度沿着从所述分析区室的第一（开口）端到第二（封闭）端的轴线测量。

13、6. 根据条款4或条款5所述的比色皿，其中存在于所述分析区室的第一（开口）端处的溶液与存在于所述分析区室的第二（封闭）端处的溶液的比例为5:3（第一开口端处被覆盖的表面积：第二封闭端处被覆盖的表面积）至5:4。

14、7. 根据条款1至6中任一条所述的比色皿，其中所述分析区室包含：

15、四个相对侧壁，

16、端壁，和

17、一个开口端，

18、其中所述溶液存在于所述四个相对侧壁中的至多一者上。

19、8. 根据条款7所述的比色皿，其中所述溶液：

20、存在于所述分析区室的第一（开口）端处的侧壁上；

21、存在于所述分析区室的第二（封闭）端处的侧壁上；并且

22、不存在于所述分析区室的第一（开口）端与第二（封闭）端之间的侧壁的中间区域处。

23、9. 根据条款8所述的比色皿，其中所述中间区域具有1至5 cm、或1至4 cm、或1.5至2.5 cm的长度，所述长度沿着从所述分析区室的第一（开口）端到第二（封闭）端的轴线测量。

24、10. 根据条款8或条款9所述的比色皿，其中存在于所述分析区室的第一（开口）端处的侧壁末端处的溶液与存在于所述分析区室的第二（封闭）端处的侧壁末端处的溶液的比例为5:3（第一开口端处被覆盖的面积：第二封闭端处被覆盖的面积）至5:4。

25、11. 根据条款1至10中任一条所述的比色皿，其中所述溶液是成像溶液。

26、12. 根据条款11所述的比色皿，其中所述成像溶液包含：

27、至少一种成像剂；和任选的

28、水；其余为水。

29、13. 根据条款12所述的比色皿，其中所述成像剂是吖啶橙、季铵盐型阳离子异染性染料例如greifswalder蓝、包柔蓝、罗丹宁蓝、甲苯胺蓝、夜蓝、霍夫曼紫、碱性橙21、持久性染料例如细胞持久性花青染料、syto染料、oxayne染料、菲啶（嵌入）染料、吲哚染料、咪唑染料中的一者或多者或其任何组合。

30、14. 根据条款12或条款13所述的比色皿，其中所述成像剂具有0.01至0.030 mg/ml、或0.015至0.025 mg/ml、或0.019至0.021 mg/ml、或0.020 mg/ml的浓度。

31、15. 根据条款11至14中任一条所述的比色皿，其中所述成像溶液包含吖啶橙和水，或由其组成；任选地其中所述水是蒸馏水。

32、16. 根据条款11至15中任一条所述的比色皿，其中所述成像溶液包含0.01至0.030 mg/ml、或0.015至0.025 mg/ml、或0.019至0.021 mg/ml、或0.020 mg/ml的吖啶橙；其余为水；任选地其中所述水是蒸馏水。

33、17. 根据条款11至16中任一条所述的比色皿，其中所述成像溶液包含0.020 mg/ml的吖啶橙；其余为水；任选地其中所述水是蒸馏水

34、18. 根据条款11至17中任一条所述的比色皿，其中所述成像溶液具有3至6、或3.5至4.5、或4的ph。

35、19. 根据条款1至18中任一条所述的比色皿，其中所述收集区室被包被在收集溶液中；

36、任选地，其中所述第一样品区室的75至100%的表面积、或100%的表面积被包被在所述收集溶液中。

37、20. 根据条款19所述的比色皿，其中所述收集溶液包含：

38、抗凝血剂；

39、凝集剂；和

40、润湿剂；和任选的

41、水；任选地其中所述水是蒸馏水。

42、21. 根据条款19或条款20所述的比色皿，其中所述收集溶液包含：

43、5至25 mg/ml的抗凝血剂；

44、5至25 mg/ml的凝集剂；和

45、0.05至0.25 mg/ml的润湿剂；和任选的

46、水；任选地其中所述水是蒸馏水。

47、22. 根据条款19至21中任一条所述的比色皿，其中所述收集溶液包含第一抗凝血剂和第二抗凝血剂，其中所述第一抗凝血剂和所述第二抗凝血剂不同。

48、23. 根据条款20至22中任一条所述的比色皿，其中所述抗凝血剂是乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、草酸钾、草酸钾铵、肝素、柠檬酸盐、水蛭素中的一者或多者或其任何组合。

49、24. 根据条款20至23中任一条所述的比色皿，其中所述凝集剂是聚乙烯吡咯烷酮、蛋白水解酶例如菠萝蛋白酶、胃蛋白酶和/或胰蛋白酶、聚乙二醇中的一者或多者或其任何组合。

50、25. 根据条款20至24中任一条所述的比色皿，其中所述润湿剂是公知的表面活性剂（即离子型、非离子型和/或阳离子型）、普朗尼克p-123、silwet l600、脂肪醇乙氧基化物、烷基酚乙氧基化物、脂肪酸烷氧基化物中的一者或多者或其任何组合。

51、26. 根据条款19至25中任一条所述的比色皿，其中所述收集溶液包含：

52、（a）5至25 mg/ml、或7.5至20 mg/ml、或10至15 mg/ml、或13 mg/ml的抗凝血剂；和/或

53、（b）5至25 mg/ml、或7.5至20 mg/ml、或9至11 mg/ml、或10 mg/ml的凝集剂；和/或

54、（c）0.050至0.250 mg/ml、或0.075至0.120 mg/ml、或0.900至0.125 mg/ml、或0.1mg/ml的润湿剂。

55、27. 根据条款19至26中任一条所述的比色皿，其中所述收集溶液包含2至10 mg/ml、或4至8 mg/ml、或5至7 mg/ml、或6 mg/ml的第一抗凝血剂和3至11 mg/ml、或5至9 mg/ml、或6至8 mg/ml、或7 mg/ml的第二抗凝血剂；其中所述第一抗凝血剂和所述第二抗凝血剂不同。

56、28. 根据条款19至27中任一条所述的比色皿，其中所述收集溶液包含乙二胺四乙酸二钾盐脱水物、草酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、普朗尼克p-123和水，或由其组成；任选地其中所述水是蒸馏水。

57、29. 根据条款19至28中任一条所述的比色皿，其中所述收集溶液包含：

58、（a）3至11 mg/ml、或5至9 mg/ml、或6至8 mg/ml、或7 mg/ml的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物试剂；

59、（b）2至10 mg/ml、或4至8 mg/ml、或5至7 mg/ml、或6 mg/ml的草酸钾；

60、（c）5至25 mg/ml、或7.5至20 mg/ml、或9至11 mg/ml、或10 mg/ml的聚乙烯吡咯烷酮；和

61、（d）0.050至0.250 mg/ml、或0.075至0.120 mg/ml、或0.900至0.125 mg/ml、或0.1mg/ml的普朗尼克p-123；

62、其余为水；任选地其中所述水是蒸馏水。

63、30. 根据条款19至29中任一条所述的比色皿，其中所述收集溶液包含7 mg/ml的乙二胺四乙酸二钾盐脱水物试剂、6 mg/ml的草酸钾、10 mg/ml的聚乙烯吡咯烷酮和0.1mg/ml的普朗尼克p-123，其余为水；任选地其中所述水是蒸馏水。

64、31. 一种形成根据条款1至30中任一条所述的比色皿的方法，所述方法包括下述步骤：

65、（a）提供具有收集区室和分析区室的比色皿；

66、（b）提供收集溶液；

67、（c）提供成像溶液；

68、（d）将所述收集溶液分配到所述收集区室上；

69、（e）将所述成像溶液分配到所述分析区室上；

70、（f）将所述收集溶液在所述收集区室上干燥；和

71、（g）将所述成像溶液在所述分析区室上干燥；

72、任选地其中步骤（f）和（g）同时进行。

73、32. 根据条款31所述的方法，其中所述分析区室的1至60%的表面积、或10至50%的表面积、或20至40%的表面积、或30至40%的表面积、或35%的表面积被包被在所述成像溶液中。

74、33. 根据条款31或条款32所述的方法，其中所述收集区室的75至100%的表面积、或100%的表面积被所述收集溶液包被。

75、34. 根据条款31至33中任一条所述的方法，其中将10至20 µl、或12.5至17.5 µl、或15 µl的所述收集溶液分配到所述收集区室上。

76、35. 根据条款31至34中任一条所述的方法，其中将10至20 µl、或12.5至17.5 µl、或15 µl的所述成像溶液分配到所述分析区室上。

77、36. 根据条款31至35中任一条所述的方法，其中在步骤（f）和/或步骤（g）期间使用40至80℃、或50至70℃、或60℃的温度加热来干燥所述溶液。

78、37. 根据条款31至36中任一条所述的方法，其中在步骤（f）和/或步骤（g）期间的干燥步骤进行1至20分钟、或5至15分钟、或10分钟的时间段。

79、38. 根据条款32至38中任一条所述的方法，其中所述分析区室具有四个相对侧壁，并且将所述成像溶液分配到所述四个侧壁中的至多一者上。

80、39. 根据条款1至30中任一条所述的比色皿，其用于分析生物样品，任选为血液样品。