一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法

本发明涉及动物模型，具体涉及一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法。

背景技术：

1、临床的卵巢早衰(premature ovarian failure，pof)是指卵巢功能提前减退，常见为女性在40岁以前出现闭经，以闭经，不育，雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病。pof不仅影响卵母细胞的数量和质量，还会降低妊娠率和活产率，增加流产率，明显影响女性的生活质量。pof病因多种多样，具体发病机制尚不清楚，为了寻找病因和有效的治疗方法，就必须建立与人类临床表现和发病机制相似的动物模型。pof的病因与遗传学、免疫疾病、药物、手术和心理因素密切相关。因此，在针对相关药物的开发和研究卵巢功能早衰发生机制的应用中，应尽量根据实际目的和要求来采用相似因素造成的卵巢功能早衰模型。如根据免疫因素构建的自身免疫性pof模型、心理因素构建精神应激的pof模型和遗传因素构建的半乳糖(gal)-pof模型。卵巢功能早衰患者也存在药源性引起的卵巢早衰，目前药物诱导模型是研究pof的经典动物模型。目前现有的药物诱导卵巢早衰造模方法存在周期长、不良反应大、动物死亡率高、成本大、成功率低等问题。

2、鬼臼毒素(podophyllotoxin，ppt)属于芳基四氢萘木脂素类成分，大多来源于八角莲属、山荷叶属(diphylleia)、桃儿七属等植物。目前在临床上主要利用其抗病毒效果治疗尖锐湿疣、疱疹等疾病，还可以用来抗菌、抗病毒及抗氧化。此外，鬼臼毒素还具有抑制细胞分裂作用，其衍生物vp-16和vm-26是抗肿瘤的代表性药物。本申请研究发现其对卵巢具有毒性作用，导致卵巢损伤，可诱发pof的发生，依此提出一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法。

技术实现思路

1、针对现有技术中药物诱导卵巢早衰造模方法周期长、不良反应大、动物死亡率高、成本大、成功率低的问题，本发明基于鬼臼毒素提出一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，具体技术方案如下：

2、一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，包括以下步骤，取健康大鼠，依照一日鬼臼毒素与大鼠体重比值为10-20mg/kg的用药量，使用鬼臼毒素制剂对大鼠进行灌胃，重复给药四天得到卵巢早衰大鼠模型。

3、进一步的，健康大鼠为6-8周龄动情周期的雌性sd鼠。

4、进一步的，健康大鼠在给药前进行一周的适应性饲养，12h昼夜交替，环境温度为21-25℃，湿度为30-40％。

5、进一步的，在制剂时，将鬼臼毒素溶于2％dmso的溶剂中配置成鬼臼毒素试剂，然后施用。

6、进一步的，鬼臼毒素试剂配置包括以下步骤：

7、s1、按照大鼠体重比一日鬼臼毒素试剂剂量为200g：2ml的比值计算鬼臼毒素试剂量，依据大鼠一日鬼臼毒素用药量和一日鬼臼毒素试剂剂量计算四天总的鬼臼毒素用药量和总的鬼臼毒素试剂剂量；

8、s2、用分析天平称取四天总的固态粉末状鬼臼毒素用药量；

9、s3、用移液枪移取dmso放入ep管中，dmso为总的鬼臼毒素试剂剂量的2％，把称取的鬼臼毒素溶于装有dmso的ep管中进行混匀、震荡、离心；

10、s4、将混合后的鬼臼毒素-dmso混剂转移至离心管中，用0.5％ cmc-na溶剂定容至总的鬼臼毒素试剂剂量后进行震荡混匀。

11、本发明的有益效果在于：

12、造模简单，灌胃给予鬼臼毒素4天，通过卵巢病理观察，可以看出模拟出的动物模型的卵巢组织出现明显受损，卵泡颗粒细胞破坏且出现卵泡闭锁等症状；本模型指标稳定性好，可重复强，利用鬼臼毒素成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，为基础研究建立稳定的卵巢早衰模型奠定了良好的基础；为卵巢早衰模型的构建提供了一种可靠的方法。

技术特征：

1.一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，其特征在于：包括以下步骤，取健康大鼠，依照一日鬼臼毒素与大鼠体重比值为10-20mg/kg的用药量，使用鬼臼毒素制剂后对大鼠进行灌胃，重复给药四天得到卵巢早衰大鼠模型。

2.根据权利要求1所述的一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，其特征在于：健康大鼠为6-8周龄动情周期的雌性sd鼠。

3.根据权利要求2所述的一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，其特征在于：健康大鼠在给药前进行一周的适应性饲养，12 h昼夜交替，环境温度为21-25℃，湿度为30-40%。

4.根据权利要求1所述的一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，其特征在于：在制剂时，将鬼臼毒素溶于2%dmso的溶剂中配置成鬼臼毒素试剂，然后施用。

5.根据权利要求4所述的一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，其特征在于：鬼臼毒素试剂配置包括以下步骤，

技术总结本发明涉及一种卵巢早衰大鼠模型的建立方法，包括以下步骤，取健康大鼠，依照一日鬼臼毒素与大鼠体重比值为10‑20mg/Kg的用药量，使用鬼臼毒素制剂后对大鼠进行灌胃，给药四天得到卵巢早衰大鼠模型。本发明通过将鬼臼毒素制剂后对大鼠进行灌胃得到卵巢早衰大鼠模型，造模简单，造模时间短，通过卵巢病理观察，可以看出模拟出的动物模型的卵巢组织出现明显受损，卵泡颗粒细胞破坏凋亡且出现卵泡闭锁等症状；所得模型指标稳定性好，可重复强，利用鬼臼毒素成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，为基础研究建立稳定的卵巢早衰模型奠定了良好的基础，为卵巢早衰模型的构建提供了一种可靠的方法。技术研发人员：刘传鑫,段佳佳,孙佳星,杜沛霈受保护的技术使用者：河南科技大学第一附属医院技术研发日：技术公布日：2024/11/4