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一种提高CAR-T细胞功能的培养基及其应用的制作方法

  • 国知局
  • 2024-11-21 11:50:18

本发明涉及一种培养基,尤其涉及一种提高car-t细胞功能的培养基及其应用。

背景技术:

1、car-t细胞疗法是嵌合抗原受体t细胞免疫疗法,因具有特异性识别肿瘤抗原、特异性强,非mhc限制性、疗效高,car-t细胞可复制扩增、杀伤效应强等优点,被认为是治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。

2、car-t细胞对肿瘤的杀伤过程主要包括两种途径:一种是car-t细胞通过免疫突触与肿瘤细胞结合后,分泌细胞溶素和颗粒酶b等物质,细胞溶素在肿瘤细胞的膜上形成孔洞后,car-t细胞通过孔洞将颗粒酶b输送到肿瘤细胞内部,引起半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶的连锁反应,使肿瘤细胞发生裂解;另一种是car-t细胞表面存在tnf配体,结合靶细胞后,可以诱导靶细胞凋亡。此外,car-t细胞还可以通过自分泌细胞因子的方式促进自身的活性进一步增强对肿瘤的杀伤能力。

3、car-t细胞是体外通过慢病毒转染等方式将car的dna构建体整合至患者自身外周血分离出的t细胞中,再通过体外扩增后,回输至淋巴细胞清除预处理后的患者体内发挥抗肿瘤作用。现有体外扩增培养基存在car-t细胞存活率、增殖率低,以及培养后car-t细胞杀瘤活性低等技术问题。因此,亟需提供一种新型的car-t细胞培养基。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足,本发明的目的之一在于提供一种提高car-t细胞功能的培养基,该培养基能够有效提升car-t细胞的存活率、增殖率;又能够有效提升培养后car-t细胞的中央记忆t细胞占比。

2、本发明的目的之二在于提供一种提高car-t细胞功能的培养基在car-t细胞培养中的应用,采用本发明培养基培养后car-t细胞,在体外对肿瘤细胞具有较强的特异性杀伤作用。

3、本发明的目的之一采用如下技术方案实现:

4、一种提高car-t细胞功能的培养基,由基础培养基和添加在基础培养基中的以下成分组成:麦角苄酯、il-2、il-15、碱性成纤维细胞生长因子、炔雌醇、转铁蛋白、维生素c。

5、进一步地,以终浓度计,所述添加成分在基础培养基中的浓度为:麦角苄酯110-130ng/ml、il-2 60-80ng/ml、il-15 3-7ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子10-20ng/ml、炔雌醇1-6μg/ml、转铁蛋白5-12μg/ml、维生素c 35-50μg/ml。

6、进一步地,所述基础培养基为dmem无血清培养基。

7、本发明的目的之二采用如下技术方案实现:

8、上述提高car-t细胞功能的培养基在car-t细胞培养中的应用,包括以下步骤:将car-t细胞接种于所述培养基中培养13-15d。

9、进一步地,所述car-t细胞在培养基中的浓度为4×105-6×105个/ml。

10、进一步地,所述培养的条件为37℃,5% co2。

11、进一步地,所述培养中还需要每2-3d更换一次培养基。

12、相比现有技术,本发明的有益效果在于:

13、(一)改进培养基的配方

14、本发明提供了一种新型提高car-t细胞功能的培养基,该培养基配方中添加了麦角苄酯、炔雌醇等成分。

15、(二)取得了预料不到的技术效果

16、本发明的试验结果表明:

17、(1)麦角苄酯、炔雌醇的加入能够有效提升car-t细胞的存活率、增殖率。

18、(2)麦角苄酯、炔雌醇的加入还能够有效提升培养后car-t细胞的中央记忆t细胞占比,进而提高car-t细胞治疗的效率以及持久性。

19、(3)采用本发明培养基培养后car-t细胞,在体外对肿瘤细胞具有较强的特异性杀伤作用。

技术特征:

1.一种提高car-t细胞功能的培养基,其特征在于,由基础培养基和添加在基础培养基中的以下成分组成:麦角苄酯、il-2、il-15、碱性成纤维细胞生长因子、炔雌醇、转铁蛋白、维生素c。

2.如权利要求1所述提高car-t细胞功能的培养基,其特征在于,以终浓度计,所述添加成分在基础培养基中的浓度为:麦角苄酯110-130ng/ml、il-2 60-80ng/ml、il-15 3-7ng/ml、碱性成纤维细胞生长因子10-20ng/ml、炔雌醇1-6μg/ml、转铁蛋白5-12μg/ml、维生素c35-50μg/ml。

3.如权利要求1所述提高car-t细胞功能的培养基,其特征在于,所述基础培养基为dmem无血清培养基。

4.如权利要求1-3任一项所述提高car-t细胞功能的培养基在car-t细胞培养中的应用,其特征在于,包括以下步骤:将car-t细胞接种于所述培养基中培养13-15d。

5.如权利要求4所述提高car-t细胞功能的培养基在car-t细胞培养中的应用,其特征在于,所述car-t细胞在培养基中的浓度为4×105-6×105个/ml。

6.如权利要求4所述提高car-t细胞功能的培养基在car-t细胞培养中的应用,其特征在于,所述培养的条件为37℃,5% co2。

7.如权利要求4所述提高car-t细胞功能的培养基在car-t细胞培养中的应用,其特征在于,所述培养中还需要每2-3d更换一次培养基。

技术总结本发明涉及一种培养基,尤其涉及一种提高CAR‑T细胞功能的培养基及其应用。上述提高CAR‑T细胞功能的培养基由基础培养基和添加在基础培养基中的以下成分组成:麦角苄酯、IL‑2、IL‑15、碱性成纤维细胞生长因子、炔雌醇、转铁蛋白、维生素C。麦角苄酯、炔雌醇的加入能够有效提升CAR‑T细胞的存活率、增殖率;还能够有效提升培养后CAR‑T细胞的中央记忆T细胞占比,进而提高CAR‑T细胞治疗的效率以及持久性。此外,采用本发明培养基培养后CAR‑T细胞,在体外对肿瘤细胞具有较强的特异性杀伤作用。技术研发人员:王泰华,史辛艺,张钢,李荣荣,崔晓慧,杜淑凤受保护的技术使用者:深圳泰华赛尔生物科技有限公司技术研发日:技术公布日:2024/11/18

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