一种针对TXNDC12的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

本发明属于单克隆抗体，尤其涉及一种稳定表达可特异性针对txndc12的单克隆抗体的杂交瘤细胞株、该特异性针对txndc12的单克隆抗体，以及该杂交瘤细胞株和该单克隆抗体的具体应用。

背景技术：

1、含硫氧还蛋白结构域蛋白12(txndc12)，又称erp16、erp18、erp19或htlp19，是蛋白二硫异构酶家族成员，在癌症发生发展中起重要作用。txdc12在胃癌、肝癌等肿瘤组织中表达上调，可促进肿瘤细胞迁移、侵袭。而txndc12在结直肠癌中的作用尚不明确。

2、发明人前期研究发现txndc12促进结直肠癌细胞迁移，其在结肠癌患者肿瘤组织中表达提示预后不良。因此，txndc12可能成为结肠癌潜在治疗靶点。而开发用于检测、靶向txndc12的单克隆抗体，可为癌症的诊断、治疗提供新的思路和工具，具有重要的意义及应用价值。

技术实现思路

1、为解决上述技术难题，本发明提供了一种针对txndc12的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。本发明中的杂交瘤细胞株为anti-txndc12，保藏编号为cgmcc no.46002，产生的抗体为抗txndc12重组单克隆抗体1b4，亚型鉴定为igg2b。本发明采用带有his标签的txndc12全长蛋白免疫icr小鼠，因为其携带的标签分子量较小，相对于mbp、gst等大分子标签来说免疫原性较低，产生的抗体特异性较好，此外采用的icr小鼠相关融合稳定性高，排异性小，后期产生的抗体稳定性较好。实验发现，本发明中的抗体能有效检测结肠癌细胞及结肠癌组织中的txndc12，特异性好，此外还可阻断txndc12，抑制结肠转移。

2、为达上述目的，本发明采用如下的技术方案：

3、本发明的目的之一是提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株为anti-txndc12，分类命名为小鼠杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.46002。

4、本发明的目的之二是提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述杂交瘤细胞株产生，能特异性识别、靶向txndc12蛋白。

5、本发明的目的之三是提供了一种所述单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

6、1)重组表达载体的构建

7、根据txndc12开放阅读框序列，设计引物扩增txndc12编码区，通过酶切位点插入到pet28a载体中，构建pet28a-txndc12-his重组表达载体；

8、2)txndc12重组蛋白的表达和纯化

9、将所述pet28a-txndc12-his重组表达载体转化至细菌，诱导蛋白表达，然后裂解细菌，离心获得蛋白上清，最后经过纯化获得纯化的txndc12蛋白；

10、3)单克隆抗体的筛选与制备

11、使用所述纯化的txndc12蛋白免疫小鼠，免疫完成后，取小鼠的脾细胞和sp2/0细胞融合获得单克隆，筛选出阳性杂交瘤细胞株，即得到能够分泌针对txndc12蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为抗txndc12重组单克隆抗体1b4，亚型鉴定为igg2b，将所述杂交瘤细胞株接种至小鼠腹腔，收集小鼠腹水，经过纯化即获得所述单克隆抗体。

12、进一步的，所述步骤(1)中设计的引物序列如seq id no.1-seq id no.2所示，使用的酶切位点为ecori和xhoi。

13、进一步的，所述步骤(2)中使用的细菌为bl2(de3)感受态细菌，使用iptg诱导蛋白表达。

14、进一步的，所述步骤(3)中免疫小鼠时使用的是icr雌鼠，免疫包括初次免疫和加强免疫，最后通过proteina/g纯化获得所述单克隆抗体。

15、本发明的目的之四是提供了一种所述杂交瘤细胞株和/或所述单克隆抗体在txndc12蛋白检测产品制备中的应用。

16、本发明的目的之五是提供了一种所述杂交瘤细胞株和/或所述单克隆抗体在癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品制备中的应用。

17、本发明的目的之六是提供了一种txndc12蛋白检测产品，所述txndc12蛋白检测产品中含有所述单克隆抗体，其不仅能特异性识别、靶向txndc12，检测txndc12含量的多少、变化，而且能阻断txndc12促迁移功能。

18、本发明的目的之七是提供了一种癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品，所述癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品中含有所述单克隆抗体，其不仅能检测、诊断癌变进程，而且能抑结肠癌转移。

19、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

20、(1)本发明采用带有his标签的txndc12全长蛋白免疫icr小鼠，因为免疫蛋白所携带的标签分子量较小，相对于mbp、gst等大分子标签来说免疫原性较低，产生的抗体特异性较好。此外采用的icr小鼠相关融合稳定性高，排异性小，后期产生的抗体稳定性较好。

21、(2)实验发现，本发明中的抗体能够有效检测结肠癌细胞如dld-1和sw48及结肠癌组织中的txndc12，特异性好，此外还可阻断txndc12，抑制结肠癌的转移。

22、保藏证明说明：

23、保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

24、保藏编号：cgmcc no.46002；

25、保藏日期：2024年06月17日；

26、保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

27、分类学命名：小鼠杂交瘤细胞株。

技术特征：

1.一种杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为anti-txndc12，分类命名为小鼠杂交瘤细胞株，保藏编号为cgmcc no.46002。

2.一种单克隆抗体，其特征在于，由如权利要求1所述的杂交瘤细胞株产生，能特异性识别、靶向txndc12蛋白。

3.权利要求2所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中设计的引物序列如seqid no.1-seq id no.2所示，使用的酶切位点为ecori和xhoi。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中使用的细菌为bl21(de3)感受态细菌，使用iptg诱导蛋白表达。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中免疫小鼠时使用的是icr雌鼠，免疫包括初次免疫和加强免疫，最后通过proteina/g纯化获得所述单克隆抗体。

7.权利要求1所述的杂交瘤细胞株和/或权利要求2所述的单克隆抗体在txndc12蛋白检测产品制备中的应用。

8.权利要求1所述的杂交瘤细胞株和/或权利要求2所述的单克隆抗体在癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品制备中的应用。

9.一种txndc12蛋白检测产品，其特征在于，其中含有权利要求2所述的单克隆抗体，其不仅能特异性识别、靶向txndc12，检测txndc12含量的多少、变化，而且能阻断txndc12促迁移功能。

10.一种癌症检测、筛查、诊断和/或防治产品，其特征在于，其中含有权利要求2所述的单克隆抗体，其不仅能检测、诊断癌变进程，而且能抑制癌细胞迁移。

技术总结本发明公开了一种针对TXNDC12的单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于单克隆抗体技术领域。本发明中的杂交瘤细胞株保藏编号为CGMCC No.46002，产生的抗体为抗TXNDC12重组单克隆抗体，命名为IB4，亚型鉴定为IgG2b型。本发明采用带有His标签的TXNDC12全长蛋白免疫ICR小鼠，因为其携带的标签分子量较小，相对于MBP、GST等大分子标签来说免疫原性较低，产生的抗体特异性较好，此外采用的ICR小鼠相关融合稳定性高，排异性小，后期产生的抗体稳定性较好。实验发现，本发明中的抗体能有效检测结肠癌细胞及结肠癌组织中的TXNDC12，特异性好，此外还可阻断TXNDC12的生物学功能，抑制结肠癌转移。技术研发人员：王征,王琳,田少博,储亚南,李诺金受保护的技术使用者：华中科技大学同济医学院附属协和医院技术研发日：技术公布日：2024/11/18